一种利用RFLP鉴定蛋白与DNA结合互作的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用RFLP鉴定蛋白与DNA结合互作的方法：S1.分析待测DNA序列中所有的限制性内切酶位点；S2.选择限制性内切酶，使其能切割N个被靶蛋白覆盖的DNA序列（包括核心序列和侧翼序列）中自然存在的酶切位点或通过突变得到的酶切位点，和M个被靶蛋白覆盖的DNA序列以外的序列中存在的酶切位点；N>0；M≥0，M、N均为整数；S3.将待测DNA序列和靶蛋白混合反应后，加入选择的限制性内切酶进行酶切反应和结果判定：若出现M+1条条带，表明靶蛋白与待测DNA结合；若出现N+M+1条条带，表明靶蛋白与待测DNA不结合；该方法原理简单、操作方便，可高效清晰鉴定蛋白与DNA的结合互作关系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，更具体地，涉及一种利用RFLP鉴定蛋白与DNA结合互作的方法。
技术介绍
随着大量生物基因组测序工作的完成，研宄基因功能和调控机制成为后基因组时代的核心内容。蛋白反式作用因子(trans-acting factor)与核酸尤其是DNA序列上的顺式作用元件(cis-acting element)的相互作用关系是研宄基因表达转录调控机制的重要内容。目前，利用酵母单杂交或染色质免疫共沉淀等技术筛选到的与特定DNA序列结合的候选蛋白通常是用足迹法(DNase footprinting assay)和凝胶电泳迀移法(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)进行验证。足迹法主要是基于核酸酶DNAaseI能够随机切割DNA分子，但被蛋白结合的DNA特定区域则不能被DNAaseI切割，并在电泳胶上显示一个特定“足迹”带型的原理来确定DNA与某一蛋白的互作关系；凝胶电泳迀移法则是基于特定蛋白若能结合目的DNA形成复合体，在电泳时，该复合体迀移速度减慢而导致电泳条带滞后的现象而确定蛋白与DNA的结合作用。现有技术中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用RFLP鉴定靶蛋白与DNA结合互作的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 分析待测DNA序列中所有的限制性内切酶位点；S2. 选择限制性内切酶，使得该内切酶能切割N个被靶蛋白覆盖的DNA序列中自然存在的酶切位点或通过突变得到的酶切位点，和M个被靶蛋白覆盖的DNA序列以外的序列中存在的酶切位点；其中，N为大于0的整数，M为大于等于0的整数；被靶蛋白覆盖的DNA序列包括核心序列和侧翼序列；S3. 将待测DNA序列和靶蛋白混合反应后，加入S2选择的限制性内切酶进行酶切反应和结果判定，所述结果判定为：若出现M+1条条带，则表明靶蛋白与待测DNA结合；若出现N+M+1条条带，则表明靶蛋白与待测...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈乐天，谢勇尧，张雅玲，赵秀彩，刘耀光，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44