一种制备人纤维蛋白原制剂的方法及其制备的制剂技术

本发明专利技术公开了一种制备人纤维蛋白原制剂的方法，该方法以健康人血浆为原料，经低温乙醇蛋白分离法分离纯化，其中采用温和的压滤法替代了离心法，并用低温乙醇溶液对沉淀进行顶洗；增加了多级深层过滤；改进了冻干工艺，使冻干周期由4～8天缩短到2～3天；并将S/D法、UVC照射法和干热法结合对病毒进行灭活处理，保证了对脂包膜、非脂包膜病毒尤其是耐热的细小病毒的去除效果。本发明专利技术还公开了由上述方法制备的人纤维蛋白原制剂。本发明专利技术生产出的人纤维蛋白原制剂质量更稳定，杂质含量更低，病毒安全性更高，能最大限度的减少输注该制剂可能给患者带来的安全风险，降低了临床应用时副反应的发生，使用药更安全。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及血液制品领域，特别是涉及一种制备人纤维蛋白原制剂的方法及其制备的制剂。
技术介绍
纤维蛋白原(Fibrinogen，Fg)，即凝血因子Ⅰ(FⅠ)，是凝血系统中的“中心”蛋白质之一，相对分子量340kDa，具有2964(6)个氨基酸残基，分子长度约为45nm，宽度最大直径为4.8nm，半衰期为96～144小时，等电点为5.1～5.5，沉降系数为7.7～7.9。Fg主要由肝脏合成，是一种糖蛋白，含碳水化合物3％～5％，由两个相同部分组成，每个部分含有3条肽链，即Aα、Bβ和γ链，分别由610、461和410个氨基酸残基构成。每部分由12个二硫键相连，两个部分之间通过两条γ链的半胱氨酸8、9及Aα链的半胱氨酸28所形成的3个二硫键在氨基端相连。大部分存在于人体血浆中，约15％存在于血管外，正常人血浆中Fg的含量为2.0～4.0g/L，是血浆粘滞性的主要决定因素，止血需要量约为正常的25％～50％，血浆水平低于1～1.5g/L可能引起凝血障碍。纤维蛋白原在凝血酶的作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备人纤维蛋白原制剂的方法，其特征在于，所述制备方法步骤如下：(1)分离组分I：将病毒检测合格并且符合国家检疫期规定的原料血浆,在温度0℃±2.5℃、乙醇浓度8～10％、pH7.0±0.20条件下，搅拌1～3小时，然后通过压滤法分离出组分I；(2)洗涤/溶解组分I：将组分I沉淀粉碎后，加入体积升数为组分I千克数20±5倍的枸橼酸钠‑甘氨酸缓冲液中，在温度0℃±2.5℃条件下搅拌洗涤30～60分钟，通过压滤法分离出洗涤后的沉淀A，将该沉淀A粉碎，加入到体积升数为沉淀A千克数3～5倍的三羟甲基氨基甲烷‑枸橼酸钠缓冲液中，在温度20℃～30℃的条件下搅拌溶解1～3小时，用三羟甲基氨基甲烷‑枸橼酸...

【技术特征摘要】
1.一种制备人纤维蛋白原制剂的方法，其特征在于，所述制备方法步
骤如下：
(1)分离组分I：将病毒检测合格并且符合国家检疫期规定的原料血
浆,在温度0℃±2.5℃、乙醇浓度8～10％、pH7.0±0.20条件下，搅拌1～
3小时，然后通过压滤法分离出组分I；
(2)洗涤/溶解组分I：将组分I沉淀粉碎后，加入体积升数为组分I
千克数20±5倍的枸橼酸钠-甘氨酸缓冲液中，在温度0℃±2.5℃条件下搅
拌洗涤30～60分钟，通过压滤法分离出洗涤后的沉淀A，将该沉淀A粉碎，
加入到体积升数为沉淀A千克数3～5倍的三羟甲基氨基甲烷-枸橼酸钠缓
冲液中，在温度20℃～30℃的条件下搅拌溶解1～3小时，用三羟甲基氨基
甲烷-枸橼酸钠缓冲液稀释至体积升数为沉淀A千克数的10～12倍，澄清
过滤，取滤液备用；
(3)S/D灭活处理：计量步骤(2)得到的滤液体积后，在搅拌过程中，
加入1/10滤液体积的S/D溶液，所述S/D溶液含110g/L聚山梨酯80和33g/L
磷酸三丁酯，温度20℃～30℃，调制溶液pH至7.00±0.20，并在水浴24
℃～26℃的条件下缓慢搅拌灭活4～8小时；
(4)乙醇沉淀：将步骤(3)得到的溶液澄清过滤后，降温至0℃～2
℃，在搅拌过程中，加入预冷至-5℃以下的50％乙醇溶液，使溶液中乙醇终
含量为8％～10％，并调整温度至-2℃～2℃，pH至7.00±0.20，搅拌反应0.5
～1.5小时，通过压滤法分离出沉淀B，将沉淀B加入到体积升数为沉淀B
千克数13～15倍的三羟甲基氨基甲烷-枸橼酸钠缓冲液中，保持温度30℃～
37℃，搅拌溶解0.5～1.5小时，澄清过滤，重复本步骤上述操作一次，通
过压滤法分离出沉淀C；
(5)原液制备：将沉淀C粉碎后，加入到体积升数为沉淀C千克数4～
8倍的盐酸精氨酸-枸橼酸钠缓冲液中，在30℃～37℃的条件下搅拌溶解0.5
～1.5小时，澄清过滤后，用盐酸精氨酸-枸...

【专利技术属性】
技术研发人员：马小伟，梁雪爽，张学成，谢来峰，李冠军，王学位，
申请(专利权)人：华兰生物工程股份有限公司，华兰生物疫苗有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41