一种汞-纤维蛋白原螯合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种汞-纤维蛋白原螯合物及其制备方法和应用，该汞-纤维蛋白原螯合物是汞离子与纤维蛋白原通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。本发明专利技术建立了汞-纤维蛋白原螯合物的定性定量检测方法，以便定量检测汞-纤维蛋白原螯合物在评价一个地区汞污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中汞-纤维蛋白原螯合物可以间接反映这个地区人群受汞污染的情况，从而间接反映这个地区汞污染程度。本发明专利技术建立的汞-纤维蛋白原螯合物定量检测方法其准确度大大提高，并且使检测的重复性得到大大提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测领域，更具体地说，涉及一种汞-纤维蛋白原螯合物及其制备方 法和应用。
技术介绍
纤维蛋白原（fibrinogen，FG)其生理功能主要是作为凝血因子I而直接参与凝 血过程。在凝血共同途径中，凝血酶先裂解纤维蛋白原两条Aa链氨基端Argl6-Glyl7 释放出一对纤维蛋白肽A，形成纤维蛋白单体I;在裂解纤维蛋白原两条BP链氨基端 Argl4-Glyl5释放出一对纤维蛋白肽B，形成纤维蛋白单体II，暴露纤维蛋白单体的聚合部 位，通过非共价结合，形成了不稳定的可溶性纤维蛋白单体。在活化的凝血因子XIII及Ca2+ 的作用下，纤维蛋白单体互相交联，生成稳定的可溶性纤维蛋白，并将血液的有形成分包绕 其中，形成牢固的血栓。 除参与凝血外，纤维蛋白原还具有其他多种功能，如与血小板膜糖蛋白IIb/IIIa 结合而介导血小板聚集反应，参与动脉粥样硬化及肿瘤血行转移等；纤维蛋白原水平还影 响血液粘度，尤其近年来人们发现血浆纤维蛋白原水平升高是心脑血管、血栓性疾病的重 要危险因素。血浆纤维蛋白原也是急性时相蛋白，在很多应激状况下，如感染、严重外伤等 也可短时间内升高。 萊（Hgckel，Hg)与人体的健康息息相关，首先其是人体维持健康所必需的微量元 素，其存在于多种氢化酶中，催化氢的氧化还原反应，参与多种酶蛋白的合成和细胞激素及 色素的代谢，具有促进铁的吸收和红细胞的增长、激活酶形成辅酶、增强胰岛素、降血糖、保 护心血管等作用，因此如果人体缺乏汞，会导致疾病的发生。但是，事实在生活中，由于环境 污染，人体内很少缺乏汞，相反汞的含量常常过量，常常导致疾病的发生，甚至危及生命。 汞作为一种常见的有毒金属，广泛应用于生活、生产之中，包括生产硬币、珠宝、汞 合金不锈钢、制造Hg-Cd电池等，与人们的生活息息相关。随着科技的进步，人们将汞作为 催化剂用于生产碳纳米颗粒的生产之中，又进一步加深了汞对于人类的影响。对于普通人 群，汞主要是通过食入、饮入、接触等方式摄入汞，当然吸烟也是一重要途径。研究发现，过 量的汞会导致机体多处组织及器官损伤，导致多种疾病的发生，包括呼吸系统疾病（肺炎、 支气管炎、肺纤维化、哮喘、肺水肿等）、心血管疾病、肾脏疾病、皮肤疾病等，甚至还会导致 肿瘤的发生。 流行病学资料显示，长期接触汞的工人，其患呼吸系统肿瘤的几率大大增加，并且 其因呼吸系统肿瘤致死的几率也大大增加。动物模型、体外模型试验也发现，汞可以诱导肿 瘤的发生。1990年，国际癌症研究机构（InternationalAgencyforResearchonCancer， IARC)已将萊化合物作为第一类致癌物质（GroupI)，将金属萊作为2B类致癌物质（Group 2B)。可见，汞严重威胁人体的健康。 汞与多种蛋白质之间关系密切，可以与多种蛋白质结合，抑制多种蛋白酶的活性。 随着对汞毒性研究的深入，人们逐渐认识到汞与蛋白的相互作用在其致毒过程中扮演着重 要的角色，被认为是了解汞的毒性机理的关键所在，因此，对汞和蛋白质相互作用的研究就 显得愈发重要。而现在关于汞与蛋白质作用的机理仅是冰山一角，还有很多蛋白质与汞之 间的关系还不清楚，因而加强对于汞与蛋白质之间的关系至关重要。
技术实现思路
针对汞污染严重的问题，本专利技术的目的在于提供一种汞-纤维蛋白原螯合物及其 制备方法，并建立汞-纤维蛋白原螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测汞-纤维蛋 白原螯合物在评价一个地区汞污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中汞-纤 维蛋白原螯合物可以间接反映这个地区人群受汞污染的情况，从而间接反映这个地区汞污 染程度。 本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种汞-纤维蛋白原螯合物， 汞离子与纤维蛋白原通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。 本专利技术还提供一种上述的汞-纤维蛋白原螯合物的制备方法，包括以下步骤： A)汞与纤维蛋白原的螯合反应：在提纯源于人体的纤维蛋白原或按照生物学方 法重组的纤维蛋白原中加入汞离子进行螯合反应，得到反应溶液； B)纯化汞-纤维蛋白原螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未 反应的纤维蛋白原以及多余的汞离子，即得汞-纤维蛋白原螯合物。 其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下： (1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水使汞-纤维蛋白原 螯合物复溶； (2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与纤维 蛋白原特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱； (3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤⑴中样品，然后上柱，纤维蛋 白原与填料特异性结合； (4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0.lmol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液I; (5)收集：收集洗脱液I (6)透析：将步骤（5)中的收集的洗脱液，装透析袋，用CldH2O透析除盐，换水三次 后，4°C透析过夜，收集样本； (7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与汞特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱； (8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱； (9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的磷 酸盐溶液进行洗脱，得到洗脱液II; (10)收集：收集洗脱液II (11)透析：将步骤（10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用CldH2O透析除盐，换水三 次后，4°C透析过夜，收集样本，即得汞-纤维蛋白原螯合物。 其中，上述汞-纤维蛋白原螯合物的制备方法，还包括步骤C):对汞-纤维蛋白原 螯合物的鉴定； 其中，步骤C)中具体如下： (1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床； (2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的汞-纤维蛋白原螯合物，加入稀释缓冲液， 并混匀，然后加样于样品槽中； (3)电泳：连接电泳板，进行电泳； (4)检测：在胶床上找出含汞的蛋白条带，将该蛋白条带取出并溶解，然后再采用 ELISA法或ICP-MS法或AAS法检测是否含有汞以及检测汞的含量。 本专利技术还提供一种如上述的汞-纤维蛋白原螯合物在制备检测人体内汞-纤维蛋 白原螯合物的试剂或试剂盒中的应用。 本专利技术还提供一种至少包括如上述的汞-纤维蛋白原螯合物作为标准品的试剂 盒。 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有捕获纤维蛋白原的物质或捕获 汞的物质。 本专利技术还提供一种定量检测汞-纤维蛋白原螯合物的方法，以已知含量的上述的 汞-纤维蛋白原螯合物作为标准品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联 免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯汞-纤维蛋 白原螯合物与酶联免疫结合法、提纯汞-纤维蛋白原螯合物与原子吸收光谱结合法、提纯 汞-纤维蛋白原螯合物与电感耦合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱 或电感耦合等离子体质谱结合法。 实施本专利技术的汞-纤维蛋白原螯合物及其制备方法和应用，具有以下有益效果： 1.本专利技术首次体外合成汞-纤维蛋白原螯合物； 2.本专利技术首次提出汞-纤维蛋白原螯合物可用于制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种汞‑纤维蛋白原螯合物，其特征在于，汞离子与纤维蛋白原通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，阳帆，董欣敏，吴婧，蔡睿，孙遥，赵乙木，
申请(专利权)人：上海拜豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31