用于制备纤维蛋白胶的含有浓缩纤维蛋白原的组合物和相关系统的制备方法技术方案

本发明专利技术涉及浓缩的纤维蛋白原组合物和相关方法以及其用途。所述浓缩的纤维蛋白原组合物可以通过以下步骤制备：向含有纤维蛋白原的流体中加入足够量的阳离子剂如鱼精蛋白，使纤维蛋白原形成纤维蛋白原沉淀；通过收集手段例如离心来收集纤维蛋白原沉淀；并将该纤维蛋白原沉淀悬浮或溶解在液态溶媒中以形成浓缩纤维蛋白原组合物。该浓缩纤维蛋白原组合物可以掺入用于制备纤维蛋白胶的系统中并用于治疗伤口。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本申请要求2007年3月30日提交的美国临时专利申请序号60/920，900 的优先权，其内容引入本文作为参考。
技术介绍
基于纤维蛋白的封闭剂经常用于减少手术期间/之后的出血。封闭剂通 过将纤维蛋白原的浓缩溶液与凝血酶和Ca^'昆合以生成纤维蛋白而形成， 其应用于出血的伤口和缝合线以帮助止血。浓缩的混合的人纤维蛋白原可 以购买，但其带来污染的风险，或者其通过进一步加工来降低该风险，但 却增加了商品化的封闭剂的成本。很少关注的从自体血液中制备浓缩纤维 蛋白原的方法相对于昂贵的商品化封闭剂将是一种有吸引力的替代方案。从人类血液中分离纤维蛋白原的最普通方法是通过低温沉淀来获得 20-40 mg/mL的纤维蛋白原浓度。该方法需要数个小时，并且形成粗的凝 血因子浓缩物，其可用于控制有止血缺陷的患者，但是对于从少量体积的 血液中收集纤维蛋白原来说不太实际。纤维蛋白原也可以使用化学试剂来沉淀，例如乙醇、聚乙二醇(PEG) 或硫酸铵。这些方法需时较短，并且提供的纤维蛋白原浓度为30到>50 mg/mL。但是，醇沉淀可能造成纤维蛋白原浓缩物中乙醇水平增高，这可 能导致纤维蛋白原的过早凝固和降低因子XIII的活性(以及降低封闭剂抗 张强度)。用硫酸铵分离纤维蛋白原还使大量的白蛋白沉淀，其可以干扰凝 血。使用PEG沉淀纤维蛋白原需要使用BaS04和MgS04进行费时的凝血 酶原的预吸收，并且也不希望在纤维蛋白原制剂中存在PEG，因为其可导 致功能下降。由于这些限制因素，无法广泛采用化学方法来快速收获作为 封闭剂用于临床的纤维蛋白原。10一种商品化的纤维蛋白原浓缩物Tisseel VH (Baxter Healthcare公司， Westlake Village, CA)从1998年起已经可以在美国购得。它是通过复杂的 过程制备的，包括从混合的人血浆中分离纤维蛋白原并进行热灭活或溶剂/ 洗涤剂提取，以减少病毒污染物的风险。Tissed相对较贵，并且贮存期在 一度程度上受到限制。作为商品化封闭剂的替代品，纤维蛋白封闭剂已经通过将血浆或冷沉 淀物与牛凝血酶混合而制备。但是，正如所述的，使用类似于血浆中的较 低浓度的纤维蛋白原制备的封闭剂可能不具有所希望的物理化学性能，并 且其止血能力有限。另外，制备冷沉淀物也是费时的，而且通常对于小体 积而言成本并不合算。当从血库中获得血浆或冷沉淀物时，也伴有传递血 液传染的病原体的风险。因此，需要更容易的和能广泛利用的制备纤维蛋白胶的改进的系统、 方法和组合物。附图简述附图说明图1是在含有浓缩纤维蛋白原的组合物中的纤维蛋白原回收率(在原始 血浆中的纤维蛋白原的百分率)的图示，其作为在血浆中所用的鱼精蛋白浓 度的函数。数据表示为平均值土SD(1^4)。图2是作为沉淀温度的函数的浓缩物中纤维蛋白原回收率(在原始血浆 中的纤维蛋白原的百分率)的图示。数据表示为平均值± SD (n=4)。图3是作为氯化钙浓度函数的纤维蛋白胶或封闭剂的抗张强度(11=4) 和粘合强度(11=8)的图示。所用的封闭剂纤维蛋白原浓度为15 mg/mL。数 据表示为平均值士 SD。图4是向纯纤维蛋白原(15 mg/mL)中加入因子XIII (10 ng/mL)和氯化 钩(8.9 mM)时抗张强度的图示。数据表示为平均值士 SD (n=4)。图5是作为在含有或不含氯化钙(8.9 mM)条件下愈合时间的函数的封 闭剂抗张强度(11=4)和粘合强度(11=8)的图示。封闭剂在37。C从沉淀的血浆 纤维蛋白原(15mg/mL)形成，并保持于22°C下30分钟。数据表示为平均值± SD。图6是封闭剂的抗张强度(11-4)和粘合强度(!1=8)的图示，其表现为纤维 蛋白原浓度的近似于线性的函数，并且随着CaCl2(8.9mM)的加入而增大。 还显示了来自于凝固的Tissed、血浆和纯纤维蛋白原(15mg/mL)的结果。 数据表示为平均值士 SD。图7是15 mg/mL纤维蛋白原浓缩物的抗张强度的图示，其制备自 l)纯纤维蛋白原；2)用鱼精蛋白沉淀、离心、随后重新溶解的纯纤维蛋白 原；和3)用鱼精蛋白沉淀、离心、随后重新溶解的血浆纤维蛋白原。数据 表示为平均值士 SD (n=4)。图8是在抗纤维蛋白溶解药存在下、在含有和不含氯化钙(8.9 mM)条 件下从封闭剂制备的凝块的抗张强度和粘合强度的图示。所用封闭剂纤维 蛋白原浓度为15mg/mL。所用抗纤维蛋白溶解药为抑肽酶(3000 KIU/mL) 和s-氨基己酸(s-ACA， 10 mg/mL)。数据表示为平均值士 SD (n=4)。图9是从全血中浓缩纤维蛋白原的滤器设计的图示。过滤室可以为一 定范围的血液体积(例如10-20 ml、 25-50 ml、 50-75 ml、 75-100 ml)而设计。 从将血液加入混合室到回收浓缩物的时间通常少于15分钟。从全血制备的 纤维蛋白原浓缩物具有类似于市售的纤维蛋白胶Tisseel V (Baxter Healthcare, CA)的物理化学特性。专利技术详述现在借助示例性的实施方案和本文所用的具体陈述来描述本专利技术。然 而，应当理解它不意味着限制本专利技术的范围。相关领域的技术人员了解本 文内容后，可以对本文所述的专利技术特点进行改变和进一步修饰，并可对本 文所说明的本专利技术的原理进行其他应用，这些都被;f见为涵盖于本专利技术的范 围内。还应当理解，本专利技术不限于本文所^Hf的具体构造、方法步骤和材 料，因为它们可以在一定程度上变化。而且，应当理解本文所用的术语仅 用于描述具体方案的目的，并不意味着限制本专利技术的范围。应当注意的是，除非文中另有清楚的说明，否则本说明书和权利要求中所用的单数形式一种和该包括复数指示物。本文所用的术语活动性出血是指任何从循环系统中失血，无论其 原因是什么。本文所用的术语伤口是指个体的任何组织的任何损伤。伤口可以 经历活动性出血，但不是必须经历。损伤可以是受伤或手术产生，并且可 以是个体的肌体内或肌体外的。受伤的非限制性的例子包括溃疡、骨折、 刺伤、割伤、擦伤、撕裂伤、手术切口等。本文所用的流体是指可流动的成分，其可以包括液体、悬浮固体 或其他可流动物质。流体可以是混悬液、乳浊液、溶液、混合物、胶体等。本文所用的术语含有纤维蛋白原的流体是指含有纤维蛋白原的任 何生物学或人造的流体。这类流体的非限制性的例子包括各种形式的血液 血浆。浓缩纤维蛋白原组合物是指来自于含有纤维蛋白原的流体的纤维 蛋白原组合物，所述纤维蛋白原存在于介质或液体中，所述的介质或液体 与产生浓缩纤维蛋白原的所述含有纤维蛋白原的流体不同。浓缩纤维蛋白 原组合物可以(但不是必需)具有高于含有纤维蛋白原的流体的浓度。例如，中的纤维蛋白原浓度，或者可以具有高于原始的含有纤维蛋白原的流体中 的纤维蛋白原浓度。换言之，术语浓缩不意味着与产生浓缩纤维蛋白 原组合物的原始的含有纤维蛋白原的流体相比是浓缩物，而仅仅是指其浓 度足以在适宜条件下形成凝块。本文所用的术语收集在用于纤维蛋白原沉淀物时，是指从大量的 含有纤维蛋白原的流体中分离纤维蛋白原沉淀物。该步骤不是必需的，但 是可使沉淀物实际上富集。可以通过任何一种本领域内的手段来实现收集， 包括但不限于重力分离、滗出、离本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备和凝固浓缩纤维蛋白原组合物的方法，其包括：向包含纤维蛋白原的流体中加入足够量的阳离子剂，使纤维蛋白原形成纤维蛋白原沉淀；收集纤维蛋白原沉淀；收集后，将该纤维蛋白原沉淀悬浮或溶解于液态溶媒中以形成浓缩纤维蛋白原组合物；以及使该浓缩纤维蛋白原组合物凝固。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-3-30 60/920,9001.制备和凝固浓缩纤维蛋白原组合物的方法，其包括向包含纤维蛋白原的流体中加入足够量的阳离子剂，使纤维蛋白原形成纤维蛋白原沉淀；收集纤维蛋白原沉淀；收集后，将该纤维蛋白原沉淀悬浮或溶解于液态溶媒中以形成浓缩纤维蛋白原组合物；以及使该浓缩纤维蛋白原组合物凝固。2. 如权利要求l所述的方法，其中浓缩纤维蛋白原组合物具有至少是 包含纤维蛋白原的流体中纤维蛋白原浓度的两倍的纤维蛋白原浓度。3. 如权利要求1所述的方法，其中所述的收集是通过重力沉降、离心、 过滤或其组合来进行。4. 如权利要求3所述的方法，其中所述的收集是通过过滤来进行。5. 如权利要求4所述的方法，其中所述的收集是使用便携式过滤装置 来进行。6. 如权利要求3所述的方法，其中所述的收集是通过离心来进行。7. 如权利要求l所述的方法，其中液态溶媒包括选自柠檬酸钠、氢氧 化钠、氢氧化钾、肝素、硫酸类肝素及其混合物的成员。8. 如权利要求l所述的方法，其中液态溶媒包括柠檬酸钠。9. 如权利要求l所述的方法，其中包含纤维蛋白原的流体是全血。10. 如权利要求1所述的方法，其中阳离子剂选自鱼精蛋白、聚赖氨 酸、聚烯丙胺、组蛋白及它们的混合物。11. 如权利要求10所述的方法，其中阳离子剂是鱼精蛋白.12. 如权利要求l所述的方法，其中包含纤维蛋白原的流体是血浆。13. 如权利要求1所述的方法，其中所述的收集是通过离心来进行并 且液态溶媒包括柠檬酸钠。14. 如权利要求1所述的方法，其中存在于浓缩纤维蛋白原组合物中 的纤维蛋白原的浓度为10mg/ml-200 mg/ml。15. 如权利要求1所述的方法，其中存在于浓缩纤维蛋白原组合物中 的纤维蛋白原的浓度为20 mg/ml-100 mg/ml。16. 如权利要求1所述的方法，其中存在于浓缩纤维蛋白原组合物中 的纤维蛋白原的浓度为20 mg/ml-60 mg/ml。17. 如权利要求1所述的方法，其中存在于浓缩纤维蛋白原组合物中 的纤维蛋白原的浓度至少为约15 mg/ml。18. 如权利要求1所述的方法，其中浓缩纤维蛋白原组合物还包含至 少一种选自因子II、因子IX、因子x和因子xin的凝血因子。19. 如权利要求1所述的方法，其中浓缩纤维蛋白原组合物还包含至 少两种选自因子IX、因子X、因子XIII和因子II的凝血因子。20. 如权利要求1所迷的方法，其中浓缩纤维蛋白原组合物还包含至 少三种选自因子II、因子1X、因子X和因子XIII的凝血因子。21. 如权利要求1所述的方法，其中浓缩纤维蛋白原组合物还包舍每 一种凝血因子II、因子IX、因子X和因子XIH。22. 如权利要求1所述的方法，其中凝固步骤包括将凝固试剂与浓缩 纤维蛋白原组合物混合。23. 如权利要求22所述的方法，其中凝固试剂选自钙盐、镁盐、促凝 血酶原激酶、肌动蛋白、凝血酶、胶原、血小板混悬液、沉淀或变性的蛋 白、复合糖、硅石、锌、硅藻土、高岭土、鲁塞尔蝰蛇毒、利托菌素及其 混合物。24. 如权利要求22所述的方法，其中凝固试剂是钙盐。25. 治疗伤口的方法，其包括a) 向包含纤维蛋白原的流体中加入足够量的阳离子剂，使纤维蛋白原 形成纤维蛋白原沉淀；b) 收集纤维蛋白原沉淀；c) 收集后，将该纤维蛋白原沉淀悬浮或溶解于液态溶媒中以形成浓缩 纤维蛋白原组合物；d) 将浓缩纤维蛋白原组合物与凝固试剂混合形成纤维蛋白封闭剂，和e) 将一定量的纤维蛋白封闭剂应用于伤口，从而形成凝块。26. 如权利要求25所述的方法，其中伤口是外科手术产生的切口。27. 如权利要求25所述的方法，其中伤口是受伤的结果。28. 如权利要求27所述的方法，其中受伤是溃疡、骨折或组织撕裂。29. 如权利要求25所述的方法，其中在伤口位置有身体表面的活动性 出血。30. 如权利要求25所述的方法，其中凝固试剂选自钙盐、镁盐、促凝 血酶原激酶、肌动蛋白、凝血酶、胶原、血小板混悬液、沉淀或变性的蛋 白、复合糖、硅石、锌、硅藻土、高岭土、鲁塞尔蝰蛇毒、利托菌素及其 混合物。31. 如权利要求25所述的方法，其中凝血酶以每ml纤维蛋白封闭剂 中为50单位-500单位的浓度存在于纤维蛋白封闭剂中。32. 如权利要求25所述的方法，其中浓缩纤维蛋白原组合物包含至少 一种选自因子II、因子IX、因子X和因子XIII的凝血因子。33. 如权利要求25所述的方法，其中凝固试剂包括钙、镁或其混合物。34. 如权利要求33所述的方法，其中凝固试剂包括钙，并且其以氯化 钩形式在纤维蛋白原封闭剂中以1.8nM-100nM的浓度存在。35. 如权利要求33所述的方法，其中凝固试剂包括钙，并且其以氯化 钩形式在纤维蛋白原封闭剂中以8.9nM-50nM的浓度存在。36. 如权利要求33所述的方法，其中凝固试剂包括镁，并且其以氯化 镁形式在纤维蛋白原封闭剂中以1,8nM-100nM的浓度存在。37. 如权利要求33所述的方法，其中凝固试剂包括镁，并且其以氯化 镁形式在纤维蛋白原封闭剂中以8.9nM-50nM的浓度存在。38. 如权利要求25所述的方法，其中纤维蛋白原封闭剂在少于5分钟 内形成凝块。39. 如权利要求25所述的方法，其中纤维蛋白原封闭剂在少于约3分 钟内形成凝块。40. 如权利要求25所述的方法，其中纤维蛋白原封闭剂在少于约1.5 分钟内形成凝块。41. 如权利要求25所述的方法，其中纤维蛋白原封闭剂在少于约30秒内形成凝块。42. 从血液中制备浓缩纤维蛋白原组合物的方法，其包括向血液中加入足够量的阳离子剂，使存在于全血中的纤维蛋白原形成纤维蛋白原沉淀；收集纤维蛋白原沉淀；收集后，将该纤维蛋白原沉淀悬浮或溶解于液态溶媒中以形成浓缩纤维蛋白原组合物。43. 如权利要求42所述的方法，其中浓缩纤维蛋白原组合物具有至少是包含纤维蛋白原的流体中纤维蛋白原浓度的两倍的纤维蛋白原浓度。44. 如权利要求42所述的方法，其中该方法还包括使浓缩纤维蛋白原组合物凝固的步骤。45. 如权利要求42所述的方法，其中收集是通过重力沉降、离心、过滤或其组合来进行。46. 如权利要求45所述的方法，其中收集是通过过滤来进行。47. 如权利要求42所述的方法，其中收集是通过离心来进行。48. 如权利要求42所述的方法，其中液态溶媒包括选自柠檬酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、肝素、硫酸类肝素及其混合物的成员。49. 如权利要求42所述的方法，其中存在于浓缩纤维蛋白原组合物中的纤维蛋白原的浓度为10 mg/ml-200 mg/ml。50. 如权利要求42所述的方法，其中存在于浓缩纤维蛋白原组合物中的纤维蛋白原的浓度为20 mg/ml-100 mg/ml。51. 如权利要求42所述的方法，其中存在于浓缩纤维蛋白原组合物中的纤维蛋白原的浓度为20 mg/ml-60 mg/ml。52. 如权利要求42所述的方法，其中浓缩纤维蛋白原组...

【专利技术属性】
技术研发人员：S苏卡文内什沃尔，SF穆罕默德，
申请(专利权)人：斯鲁姆博达因公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]