一种鲎血浆蛋白的水解方法技术

本发明专利技术涉及一种鲎血浆蛋白水解方法，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血浆恒温水浴2～4小时，然后将鲎血浆抽滤并用水洗涤多次备用；S2：使用蛋白酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血浆水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉；其中，步骤S1中的水浴温度为70～100℃，步骤S2中，水解体系的pH为7～9。本发明专利技术提供的酶法水解鲎血浆蛋白方法利用蛋白酶在最适温度和pH条件下进行酶解反应，反应比较温和，可控制水解度，并且保存氨基酸的营养价值，要求实验设备简单，操作安全，无溶剂污染，投资少。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种鲎血浆蛋白的水解方法。
技术介绍
蛋白质是人体必不可少的营养素之一，但不同蛋白质由于其氨基酸组成和空间结构不同，在人体内的消化吸收率也大不相同，将蛋白质水解为多肽，可以大大提高其吸收率。水解蛋白质的主要方法有酸水解法、碱水解法、酶水解法、微生物降解法等等。化学法水解方法简单，价格便宜，水解效率高，但是对肽链断裂没有特异性，水解程度不易控制，反应条件剧烈。微生物降解法不容易控制降解过程中的降解产物和产物种类，并且微生物发酵产物复杂，除所需要的产物外，还有由微生物产生的各类物质，后续的提取和后处理工序繁杂。鲎血资源珍贵，鲎血蛋白含量高，含有人体所必须的八种必须氨基酸以及多种微量元素，存在着多种具有抗菌抗内毒素的小分子活性多肽，是制作保健食品和药品的理想原料。我国对鲎血的利用研究，主要是提取鲎血中的变形细胞，然后从变形细胞中分离具有抗菌抗内毒素活性的小分子活性肽并生产鲎试剂，国内外正着手以鲎血内源性多肽为先导化合物开发新的抗菌、抗病毒、抗肿瘤药物，但是鲎血分离变形细胞后剩余的鲎血浆由于铜含量超出人类食用标准，鲎血浆一般作为废物被丢弃，这就造成了极大的浪费。截止目前，对鲎血浆蛋白水解肽的直接研究国内外尚未见报道。利用现代生物化学技术制备鲎血蛋白多肽，致力于开发用于食品和制药工业的新产品，提高蛋白质资源的利用率，对走工业化开发道路和保护生态环境有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种鲎血浆蛋白水解方法，本专利技术提供的方法具有较高的水解率，水解率可以达到78.29%，同时酶解后水解肽中铜离子含量最终可降为44.10ug/mL。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种鲎血浆蛋白水解方法，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血浆恒温水浴2～4小时，然后将鲎血浆抽滤并用水洗涤多次备用；S2：使用蛋白酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血浆水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉；其中，步骤S1中的水浴温度为70～100℃，步骤S2中，水解体系的pH为7～9。鲎血浆蛋白是铜蓝蛋白，其中铜含量高达144.21ug/mL，依据国家标准GB5009.13中规定水产类食品含铜量要小于等于50mg/kg，所以鲎血浆是不能直接食用的，只有经过降铜后鲎血浆才能被人食用。另外，鲎血浆蛋白经过热处理后会变性，易于被蛋白酶水解成肽；本专利技术选用酶解法水解鲎血浆蛋白，该方法反应条件比较温和，可控制水解度。本专利技术步骤S1中通过将鲎血浆恒温水浴2～4小时，显著降低了鲎血浆蛋白水解肽中铜离子的含量，将鲎血浆中的铜离子含量从144.21ug/mL降低到44.10ug/mL，铜离子含量能够达到食用标准。本专利技术提供的方法能够保存氨基酸的营养价值，要求实验设备简单，操作安全，无溶剂污染，投资少，具有较大的推广使用价值。优选地，所述蛋白酶为胰蛋白酶、胰酶或木瓜蛋白酶中的一种或几种；更为优选地，所述蛋白酶为胰蛋白酶。优选地，步骤S1中的水浴温度为90℃；步骤S2中，水解体系的pH为8.0。优选地，步骤S2中，所述蛋白酶的浓度为2～4%，底物浓度为3～5%；更为优选地，所述蛋白酶的浓度为3%，底物浓度为4%。优选地，步骤S2中，水解时间为2～4h，水解温度为40～60℃；更为优选地，所述水解时间为3h，水解温度为50℃。本专利技术提供的水解方法的最佳水解条件为：选择胰蛋白酶水解鲎血浆蛋白，酶浓度3%、底物浓度4%、pH为8.0、水解时间为3h、水解温度为50℃，此时鲎血浆蛋白的水解率是78.29%。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供了一种酶法水解鲎血浆蛋白的方法，该方法利用蛋白酶在最适温度和pH条件下进行酶解反应，反应比较温和，可控制水解度，并且保存氨基酸的营养价值，要求实验设备简单，操作安全，无溶剂污染，投资少。本实验采用酶水解蛋白法，选用胰蛋白酶水解鲎血浆蛋白，通过单因素和正交试验设计确定出最佳酶解条件为酶浓度3%，底物浓度4%，pH值为8.0，水解时间3h，水解温度50℃，在此条件下，鲎血浆蛋白的水解率可以达到78.29%，同时酶解后水解肽中铜离子含量最终可以从144.21ug/mL降低到44.10ug/mL，铜离子含量达到食用标准，此酶水解鲎血浆蛋白法具有高鲎血蛋白的水解肽得率。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的解释说明，但具体实施例并不对本专利技术作任何限定。除非特别说明，所有本专利技术提供的实施例中，提供的原材料均可从市面采购获得。实施例1一种鲎血浆蛋白水解方法，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血恒温90℃水浴3小时，然后将鲎血抽滤并用蒸馏水洗涤多次备用；S2：使用胰蛋白酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉。本实施例的最佳酶解条件：酶浓度3%、底物浓度4%、pH 8.0、水解时间3h以及水解温度50℃，此时的水解率是78.29%，水解肽中铜离子含量为44.10ug/mL。实施例2一种鲎血浆蛋白水解方法，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血恒温70℃水浴4小时，然后将鲎血抽滤并用蒸馏水洗涤多次备用；S2：使用胰蛋白酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉。本实施例的酶解条件：酶浓度3%、底物浓度5%、pH 8.0、水解时间2h以及水解温度50℃，此时的水解率是66.09%，水解肽中铜离子含量为47.60ug/mL。实施例3一种鲎血浆蛋白水解方法，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血恒温90℃水浴3小时，然后将鲎血抽滤并用蒸馏水洗涤多次备用；S2：使用胰酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉。本实施例的最佳酶解条件：酶浓度3%、底物浓度5%、pH为8.0、水解时间2h以及水解温度50℃，此时的水解率是57.10%，水解肽中铜离子含量为44.10ug/mL。对照例1一种鲎血浆蛋白水解方法，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血恒温110℃水浴3小时，然后将鲎血抽滤并用蒸馏水洗涤多次备用；S2：使用胰蛋白酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉。本实施例的酶解条件：酶浓度9%、底物浓度3%、pH 7.5、水解时间3h以及水解温度50℃，此时的水解率是53.36%，水解肽中铜离子含量为59.36ug/mL。对照例2一种鲎血浆蛋白水解方法，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血恒温60℃水浴2小时，然后将鲎血抽滤并用蒸馏水洗涤多次备用；S2：使用胰酶和木瓜蛋白酶按照1:1的比例水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉。本实施例的酶解条件：酶浓度1%、底物浓度5%、pH 8.0、水解时间2h以及水解温度50℃，此时的水解率是28.31%，水解肽中铜离子含量为69.11ug/mL。试验例1 鲎血浆蛋白的抗氧化活性实验将实施例1的水解方法水解得到的鲎血浆蛋白水解肽粉溶解，然后过SephadexG-50葡聚糖凝胶柱，收集在波长230nm处吸光度最大的组分即得鲎血浆蛋白水解肽，冷冻干燥得具有抗氧化活性的水解肽产品。对上述水解肽产品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲎血浆蛋白水解方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血浆恒温水浴2～4小时，然后将鲎血浆抽滤并用水洗涤多次备用；S2：使用蛋白酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血浆水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉；其中，步骤S1中的水浴温度为70～100℃，步骤S2中，水解体系的pH为7～9。

【技术特征摘要】
1.一种鲎血浆蛋白水解方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：将鲎血浆恒温水浴2～4小时，然后将鲎血浆抽滤并用水洗涤多次备用；S2：使用蛋白酶水解步骤S1所得鲎血，然后将鲎血浆水解液离心分离得上清液，冷冻干燥得鲎血浆蛋白水解肽粉；其中，步骤S1中的水浴温度为70～100℃，步骤S2中，水解体系的pH为7～9。2.根据权利要求1所述鲎血浆蛋白水解方法，其特征在于，所述蛋白酶为胰蛋白酶、胰酶或木瓜蛋白酶中的一种或几种。3.根据权利要求2所述鲎血浆蛋白水解方法，其特征在于，所述蛋白酶为胰蛋白酶。4.根据权利要求1所述鲎血...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓春梅，杜建喜，康信煌，何兰珍，温燕梅，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东;44