一种镉-纤维蛋白原螯合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种镉-纤维蛋白原螯合物及其制备方法和应用，该镉-纤维蛋白原螯合物是镉离子与纤维蛋白原通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成，可用于制备检测人体镉-纤维蛋白原螯合物的试剂。本发明专利技术首次证实了镉离子可直接作用于纤维蛋白原。本发明专利技术建立了镉-纤维蛋白原螯合物的定性定量检测方法，以检测一个地区人群体内纤维蛋白原的含量，从而间接反映一个地区镉污染程度以及对人群的健康影响。本发明专利技术建立的镉-纤维蛋白原螯合物定量检测方法准确度高重、复性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及重金属离子的免疫学检测，具体设及一种簡-纤维蛋白原馨合物及其 制备方法与应用。
技术介绍
纤维蛋白原（fibrinogen,Fg)其生理功能主要是作为凝血因子I而直接参与凝 血过程。在凝血共同途径中，凝血酶先裂解纤维蛋白原两条Aa链氨基端Argl6-Glyl7释 放出一对纤维蛋白原肤A，形成纤维蛋白原单体I;在裂解纤维蛋白原两条B0链氨基端 Argl4-Glyl5释放出一对纤维蛋白原肤B，形成纤维蛋白原单体II，暴露纤维蛋白原单体的 聚合部位，通过非共价结合，形成了不稳定的可溶性纤维蛋白原单体。在活化的凝血因子 XIII及Ca"的作用下，纤维蛋白原单体互相交联，生成稳定的可溶性纤维蛋白原，并将血 液的有形成分包绕其中，形成牢固的血栓。 除参与凝血外，纤维蛋白原还具有其他多种功能，如与血小板膜糖蛋白IIb/IIIa 结合而介导血小板聚集反应，参与动脉粥样硬化及肿瘤血行转移等；纤维蛋白原水平还影 响血液粘度，尤其近年来人们发现血浆纤维蛋白原水平升高是屯、脑血管、血栓性疾病的重 要危险因素。血浆纤维蛋白原也是急性时相蛋白，在很多应激状况下，如感染、严重外伤等 也可短时间内升高。 簡是一种常见的有毒金属及环境污染物，广泛应用于工业生产环境中，包括电锻、 制造工业颜料、塑料稳定剂、镶铭电池等，与人们生活息息相关。对于普通人群，主要是通过 吸入簡污染的空气，及食用含簡污水灌概农田生产的农作物（如含簡大米）等方式摄入簡。 当然，吸烟也是慢性簡吸入的另一重要来源。随着经济的飞速发展，簡污染对于人类的影响 越来越大。 簡可W作用于多种蛋白。簡可W促使蛋白质结构变性，功能改变，活性丧失，最终 导致机体损伤。但是还有多种蛋白质与簡之间的关系尚不清楚，关于簡与蛋白质作用的研 究也仅是冰山一角，还有很多蛋白质与簡之间的关系还不清楚，因而加强对于簡与蛋白质 之间的关系至关重要，而该也将为我们在进一步了解簡致机体损伤的机制奠定基础。 虽然簡是通过何种机制馨合于Fg上尚不清楚，两者之间的相互作用对机体的影 响也尚待研究。但是可W明确的，Fg和簡对于机体的作用都至关重要，而检测Fg上馨合簡 是研究两者相互关系的第一步，其具有重要科研及临床价值，对疾病预防与诊断均有重要 意义。
技术实现思路
针对簡污染严重的问题，本专利技术的目的在于提供一种簡-纤维蛋白原馨合物及其 制备方法，并建立簡-纤维蛋白原馨合物的定性、定量检测方法，W便定量检测簡-纤维蛋 白原馨合物在评价一个地区簡污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群全血中簡-纤 维蛋白原馨合物，可W间接反映该个地区人群受簡污染的情况，从而间接反映该个地区簡 污染程度。[000引本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是；提供一种簡-纤维蛋白原馨合物， 该簡-纤维蛋白原馨合物是簡离子与纤维蛋白原通过琉基或/和半脱氨酸残基馨合而成。 本专利技术还提供一种上述的簡-纤维蛋白原馨合物的制备方法，即体外合成法，包 括W下步骤： A)簡-纤维蛋白原塞合物的合成；在提纯源于人体的纤维蛋白原或按照生物学方 法重组的纤维蛋白原中加入簡离子进行馨合反应，得到反应溶液； B)簡-纤维蛋白原馨合物纯化；采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中未 反应的纤维蛋白原、特异性抗体和簡离子，即得簡-纤维蛋白原馨合物。 作为优选，所述步骤B)中具体包括W下步骤： (1)溶解样品；将上述步骤A)的簡-纤维蛋白原馨合物溶解于生理盐水中，得 簡-纤维蛋白原馨合物溶液； 似平衡层析柱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与纤维 蛋白原特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与纤维蛋白原特异性结合的填料为吸附有可与纤维蛋白原特异性结合物 质的硅胶或树脂； (3)上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)所述溶液，然后上柱，使纤 维蛋白原与填料特异性结合； (4)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0. 10M的 化2册〇4溶液进行洗脱；[001引 （5)收集；收集步骤（4)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原； (6)透析；将步骤巧）中的收集的洗脱液装透析袋，用d地2〇透析除盐，换水S次 后，透析过夜，收集样本； (7)平衡层析柱；采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与簡特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱； 所述能与簡特异性结合的填料为吸附有可与簡特异性结合物质的硅胶或树脂； (8)上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤化）中样本，然后上柱；[002引 （9)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1. 0M的化2册04 溶液进行洗脱；(10)收集；收集步骤巧）的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原； (11)透析；将步骤（10)的洗脱液装透析袋，用d地2〇透析除盐，换水S次后，透析 过夜，收集样本，即得簡-纤维蛋白原馨合物。 作为优选，上述簡-纤维蛋白原馨合物的制备方法，还包括W下对簡-纤维蛋白原 馨合物的鉴定步骤，具体包括W下步骤： (1)制备胶床；W琼脂糖凝胶、聚丙締酷胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；[002引 似加样；取步骤B)中提取纯化得到的簡-纤维蛋白原馨合物，加入上样缓冲液， 并混匀，然后加样于样品槽中； 做电泳：连接电泳板，进行电泳； (4)检测；在胶床上找出含有簡的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带溶 解，然后再采用ICP-MS或AAS检测是否含有簡W及检测簡的含量。 本专利技术还提供一种如上述的簡-纤维蛋白原馨合物在制备检测人体内簡-纤维蛋 白原馨合物的试剂或试剂盒中的应用。 本专利技术还提供一种至少包括如上述的簡-纤维蛋白原馨合物作为标准品的试剂 盒。 优选地，该试剂盒中还包括包被液，该包被液含有捕获纤维蛋白原的物质或捕获 金属簡的物质。 本专利技术还提供一种定量检测簡-纤维蛋白原馨合物的方法，W已知含量的上述的 簡-纤维蛋白原馨合物作为标准品，采用W下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联 免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感禪合等离子体质谱结合法、提纯簡-纤维蛋 白原馨合物与酶联免疫结合法、提纯簡-纤维蛋白原馨合物与原子吸收光谱结合法、提纯 簡-纤维蛋白原馨合物与电感禪合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱 或电感禪合等离子体质谱结合法。 相比现有技术，本专利技术的有益效果在于： 1.本专利技术首次合成了簡-纤维蛋白原馨合物； 2.本专利技术首次提出簡-纤维蛋白原馨合物可用于制备检测血样中簡-纤维蛋白原 馨合物的试剂或试剂盒中的应用；[003引 3.本专利技术实现了簡馨合型纤维蛋白原的特异性识别和定量检测，W便定量检测人 群全血中簡馨合型纤维蛋白原的含量，W评价一个地区簡污染程度的应用，为工业地区的 簡污染水平提供间接指标。本专利技术建立的簡-纤维蛋白原馨合物定量检测方法的准确度 高、重复性好。【附图说明】 图1为本专利技术所述的簡-纤维蛋白原馨合物的非变性电泳条带图； 图2为本专利技术所述的簡-纤维蛋白原馨合物的电泳条带的同步福射X线巧光分析 图。【具体实施方式】 下面结合【具体实施方式】，对本专利技术做进一步描述： 本专利技术除特别说明外，设及的实验操作步骤均为本领域常规的步骤；所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种镉‑纤维蛋白原螯合物，其特征在于，该镉‑纤维蛋白原螯合物是镉离子与纤维蛋白原通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张积仁，阳帆，董欣敏，吴婧，蔡睿，孙遥，赵乙木，
申请(专利权)人：上海拜豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31