本发明专利技术涉及稳定的药物组合物，其含有具有至少两个抗原-结合结构域的多肽且尤其适于皮下施用。本发明专利技术提供液体组合物，其将不期望的多肽团聚体(二聚体和/或多聚体)的形成降至最低。本发明专利技术进一步提供用于在液体组合物中将具有抗原-结合结构域的多肽的团聚降至最低的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于双特异性T细胞衔接体（BITES)的制剂 本专利技术涉及稳定的药物组合物，其含有具有至少两个抗原_结合结构域的多肽且 尤其适于皮下施用。本专利技术提供液体组合物，其将不期望的多肽团聚体（二聚体和/或多 聚体）的形成减至最低。本专利技术进一步提供用于在液体组合物中将具有抗原-结合结构域 的多肽团聚降至最低的方法。 在现有技术中已知需要使溶液中的抗体稳定化（即防止形成二聚体和多聚体） (已知为高分子量或HMW团聚体），以维持治疗活性恒定。W02011061712公开了稳定的抗体 制剂，除了 25-250mg/ml抗体以外，其含有10-30 mM缓冲剂（优选为乙酸盐、琥珀酸盐、磷 酸盐、组氨酸或其组合）、1-15%多元醇以及0. 001-0. 05%润湿剂。组合物的pH为5-7. 5之 间。 W02010148337 (Al) (^Lyophilized formulation for small modular immunopharmaceuticals")公开了已知为小免疫药剂蛋白（SMIP)的组合物。这些是由多重 融合结构域（例如抗原-结合结构域、免疫球蛋白铰链区和Ig分子的G2或C H3区或自其 衍生的区域）组成的构建体。SMIP的结构域由多肽组成，所述多肽是基因序列的产物，其 可以是人、非人或人工（使用基因技术方法所产生）来源。尽管SMIP蛋白优选为单特异性 的，但该申请还公开了多特异性变体，例如蝎分子（Scorpion molecules)。它们含有SMIP 蛋白，其具有进一步C端结合结构域。蝎分子的结合结构域优选结合至不同的目标结构且 因此适于作为免疫特异性治疗剂。W02010148337 (Al)公开了冻干组合物的稳定制剂，其含 有SMIP，其中少于7%的SMIP以团聚形式存在。所述制剂可进一步包含缓冲剂、稳定剂、填 充剂、润湿剂和其它赋形剂。W02009070642 Al公开了 BiTE分子MT103的各种制剂，其第一 结合结构域特异性结合至T细胞受体抗原CD3，而第二结合结构域特异性结合至B细胞抗原 ⑶19。所述BiTE分子在7. 0的pH在公开的组合物中是稳定的，至高达300呢/ml的最大 浓度。所用缓冲剂是柠檬酸盐。所述制剂适于静脉内和皮下施用。在皮下施用之后的生物 利用度为10-50%。 IgG抗体具有大恒定区（CH1_3/Q区），这是其大部分物理化学特性的原因。具 有不同特异性的IgG抗体在结构上主要在'和V h区内的高变抗体结合位点的区域 (CDR1-CDR3)中不同。由于恒定区大，所以个别IgG变体之间的结构和物理化学差异相对地 小。如IgG抗体，W02010148337(A1)中所述的SMIP分子含有恒定抗体结构域的部分。 相比之下，具有不同特异性的BiTE分子在其物理化学特性上显著不同。作为由 不同免疫球蛋白的两个单链可变片段（scFv)idR.构成的融合蛋白，它们缺乏恒SC H1_3/Q 区，因此在抗原-结合结构域中的差异涉及BiTE分子的区段比IgG或SMIP抗体的区段大 得多。同样地，BiTE分子MT103和本专利技术中使用的BiTE分子主要在其分子结构上不同。尽 管MT103中的结构域以顺序Vf VH-VH-Vjf列，但本专利技术中优选使用的BiTE分子排列是形式 Vh-Wt。此外，两种分子的顺序在许多位置处不同。 BiTE分子的这些特性及其小尺寸在不同BiTE分子的物理化学行为上产生明显差 异。这导致需要针对各个别应用开发个别制剂（以增加物理化学稳定性），这是由于无法使 用个别BiTE或类似分子的制剂，或仅可以有限制地使用，用于替代应用。 在一个实施方案中，存在于组合物中的多肽是已知为双特异性T细胞衔接体 (BiTE)的多肽。在一个特定实施方案中，BiTE具有特异性结合至T细胞受体-CD3复合体 的e链的第一结合结构域，以及特异性结合至前列腺-特异性膜抗原（PSM)的第二结合 结构域。PSMA是一种整合II型膜蛋白，其以高度特异性表达在前列腺上皮细胞上，且在前 列腺癌的情况下强度增加。此外，PSM由实体肿瘤的新形成血管表达。PSM-BiTE因此介 导细胞毒性T细胞和这些目标细胞之间的直接接触。 蛋白（例如BiTE分子）的团聚体形成在药物应用中是不期望的，例如生物活性成 分的效力或利用度可能由于团聚体形成而改变。 这导致提供以抑制不期望的团聚体形成的方式容许BiTE分子稳定的制剂的目 标。 解决方案描述于本申请和权利要求中，且涵盖BiTE制剂，其包含TRIS和磷酸盐。 在其优选的实施方案中，所述制剂包含pH 6.0的50mM磷酸盐、IOOmM TRIS、0. 04%聚山梨醇 酯80和4%海藻糖二水合物，且能够就形成团聚体而言稳定具有PSMA-BiTEl分子的制剂。 这适用于范围低于Mg/ml的低浓度和>2mg/ml的高浓度两者。稳定效果对于本领域技术 人员而言是令人惊讶的，因为，例如，在W02009070642 Al中使用的柠檬酸盐，甚至作为pH 6. 0的50mM柠檬酸盐和IOOmM TRIS的组合，也没有表现出该效果。例如，在相当的组合物 (其仅含有柠檬酸盐取代磷酸盐）中所测量的二聚体分数为7.0%。相比之下，根据本专利技术 的组合物将二聚体分数限制在0. 8%(参见表6和7)。组合使用TRIS和磷酸盐是组合物的 稳定效果的原因。为了也在剪切力方面稳定BiTE分子，需要浓度为至少0. 04%的润湿剂诸 如聚山梨醇酯80,因为二聚体分数否则将太大（约7. 5%，见表15)。为了防止PSMA-BiTEl 分子吸附在注射器、输注袋等的容器壁上，具有仅〇. 002%聚山梨醇酯80是足够的。 如本文所使用的术语"抗体"是指免疫球蛋白分子，其各自包含经由二硫键而彼此连接 的两个重（H)多肽链以及两个轻（L)多肽链。每一重链由可变区（Vh )和恒定区组成，恒 定区又由三个结构域（CH1、CH2*CH3)组成。每一轻链是由可变区（')和恒定区)构 成。轻链和重链两者的的可变区（V#P VJ在各情况下均进一步再分为三个超变抗体结合 位点（CDR1-CDR3)，以及在CDR之间总共四个保守区（FR1-FR4)。 术语"单克隆抗体"描述源自相同的抗体群体的抗体，其除了相对少量的天然存在 的突变或翻译后修饰以外是相同的。与作为免疫反应的部分出现的多克隆抗体相比之下， 单克隆抗体针对特异性表位。 "双特异性"或"双功能性抗体"是一种人工、杂合抗体，其具有两对不同的重链和 轻链，且还有两个不同的抗原-结合位点。 以木瓜蛋白酶处理抗体产生两个相同的抗原-结合Fab片段和可结晶Fc片段。 "Fab片段"由完整的' 链和部分重链（即含有可变区的Vh结构域和第一恒定结构域ChI) 组成。每一 Fab片段因此具有个别的抗原-结合位点。"Fc片段"包含两个重链的羧基-端 部分，其经由二硫键连接。Fc片段的部分被其它细胞的Fc受体所识别并经由其决定抗体的 效应子功能。胃蛋白酶在二硫键下切割抗体，而这样两个Fab片段经由铰链区保持连接并形成 单一"F(ab'） 2片段"。其具有两者抗原-结合位点且因此如完整抗体能够交联抗原。 术语"结构域"描述蛋白的球形区域，其具有定义并独立折叠的结构。I本文档来自技高网...
【技术保护点】
液体药物组合物，其包含多肽、TRIS和磷酸盐，其中所述多肽包含SEQ ID NO: 8中再现的氨基酸序列，其特征在于：所述组合物含有浓度为0.5µg/ml至3.0mg/ml的多肽，所述组合物含有100mM TRIS和50mM磷酸盐，所述组合物的pH值为约6.0，且所述组合物含有0.04%聚山梨醇酯80。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：C奥尔布里希，T邦特，J温特，J彼特斯，T特里尔，
申请(专利权)人：拜耳制药股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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