对CD22有特异性的抗体及其使用方法技术

本公开提供对存在于CD22上的表位有特异性的抗体。所述抗体可用于多种治疗、诊断和监测应用，其也一并提供。本公开的抗-CD22抗体可在一些情况下在于其细胞表面上表达CD22的细胞中诱导凋亡。主题抗体特异性结合CD22多肽，其中表位包含CD22抗原内的氨基酸残基(例如，在CD22氨基酸序列的氨基酸1-847，氨基酸1-759，氨基酸1-751，或氨基酸1-670内)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对CD22有特异性的抗体及其使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2012年7月19日提交的美国临时申请系列no.61/673,630的优先权权益，该申请以其整体通过引用并入本文。前言CD22，一种属于Ig超家族的谱系限制性B细胞抗原，在许多类型的恶性B细胞以及正常成熟B淋巴细胞的表面上表达。专利技术概述本公开提供对CD22有特异性的抗体。所述抗体可用于多种治疗、诊断和监测应用，其也一并提供。附图简述图1A和1B示出编码嵌合或人源化抗-CD22抗体重链(图1A)和轻链(图1B)的构建体。图2A-E为示出人源化抗-CD22抗体与生物素化亲本嵌合抗-CD22抗体竞争结合固定的CD22的图。图3A-D示出健康供体T细胞对测试抗体的增殖应答。图4示出人源化抗-CD22抗体与Raji细胞的结合，以及所述抗体被所述Raji细胞的内化。图5示出变体抗体对人CD22的结合亲和力。图6A-6D示出人源化抗-CD22变体的聚集。图7A和7B提供抗-CD22重链(图7A)和轻链(图7B)可变区的氨基酸序列。图8A-E提供抗-CD22抗体的变体抗体9-20的氨基酸序列。图9A-C提供CD22同种型(isoform)的氨基酸序列(上至下：SEQIDNO:35-38)。定义术语"抗体"和"免疫球蛋白"包括任何同种型的抗体或免疫球蛋白，保留与抗原的特异性结合的抗体片段，(包括但不限于Fab、Fv、scFv、和Fd片段)，嵌合抗体，人源化抗体，单链抗体，及包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合抗体。抗体可以例如用放射性同位素、产生可检测产物的酶、荧光蛋白等可检测地标记。抗体可以进一步与其它部分缀合，例如特异性结合对的成员，如生物素(生物素-亲和素特异性结合对的成员)等。抗体也可以与固体支持物结合，包括但不限于，聚苯乙烯板或珠等。该术语还涵盖的是Fab’、Fv、F(ab’)2，和或其它保留与抗原特异性结合的抗体片段，以及单克隆抗体。抗体可以是单价或二价的。“抗体片段”包含完整抗体的一部分，例如，完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体(Zapata等人，ProteinEng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的称作“Fab”片段的抗原结合片段，所述“Fab”片段各自具有单一抗原结合位点以及剩余的“Fc”片段(该名称反映了容易结晶的能力)。胃蛋白酶处理产生了具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab')2片段。“Fv”是最小的抗体片段，其含有完整的抗原识别位点和结合位点。该区域由紧密非共价连接的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在该构型中，各可变结构域的三个CDR相互作用以在所述VH-VL二聚体表面上限定抗原结合位点。共同地，该六个CDR赋予所述抗体抗原结合特异性。然而，即使单一可变结构域(或抗原特异性的仅包含三个CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，不过亲和力低于整个结合位点。"Fab"片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab片段与Fab'片段的不同在于其重链CH1结构域的羧基端添加了若干残基，包括来自抗体铰链区的一或多个半胱氨酸。本文中Fab'-SH是其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab'的名称。F(ab')2抗体片段原来是作为Fab'片段对产生的，其中Fab'片段之间具有铰链半胱氨酸。也已知抗体片段的其它化学偶联。来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”，基于它们的恒定结构域的氨基酸序列，可被分至两种明显不同类型(称作κ和λ)中的一种。基于它们的重链恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被分为不同类型。有五种主要类型的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，并且这些中的几种可以被进一步划分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。“单链Fv”或“sFv”抗体片段包括抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。在一些实施方案中，Fv多肽还包括在VH和VL结构域之间的多肽接头，其使得sFv形成抗原结合所需的结构。针对sFv的综述，请参见PluckthuninThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,第113卷,RosenburgandMoore编辑，Springer-Verlag,NewYork,第269-315页(1994)。术语“双抗体”指的是具有两个抗原结合位点的小的抗体片段，其片段包含在同一多肽链(VH-VL)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过使用太短而不能使得同一链上的两个结构域配对的接头，迫使所述结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体更全面地描述于例如EP404,097、WO93/11161、和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。如本文所用，术语“亲和力”指的是两种试剂可逆结合的平衡常数，并且表达为解离常数(Kd)。亲和力可以比抗体对不相关氨基酸序列的亲和力高至少1倍、高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍、高至少20倍、高至少30倍、高至少40倍、高至少50倍、高至少60倍、高至少70倍、高至少80倍、高至少90倍、高至少100倍、或高至少1000倍、或更高。抗体对靶蛋白的亲和力可以是例如约100纳摩尔(nM)至约0.1nM，约100nM至约1皮摩尔(pM)，或约100nM至约1飞摩尔(fM)或更高。如本文所用，术语“亲合力(avidity)”指的是两种或更多种试剂的复合物在稀释后对解离的抗性。就抗体和/或抗原结合片段而言，术语“免疫反应性”和“优先结合”在本文中可互换使用。术语“结合”指的是由于例如共价、静电、疏水、和离子和/或氢键相互作用(包括例如盐桥和水桥相互作用)两个分子间的直接连接其。主题抗-CD22抗体特异性结合CD-22多肽内的表位。非特异性结合将指的是具有小于约10-7M的亲和力的结合，例如具有10-6M、10-5M、10-4M等亲和力的结合。如本文所用，术语“CDR”或“互补决定区”意指在重链和轻链多肽两者的可变区内发现的非连续抗原结合位点。CDR描述于Kabat等人，J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)；Kabat等人，U.S.Dept.ofHealthandHumanServices,“Sequencesofproteinsofimmunologicalinterest”(1991)；Chothia等人，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；和MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996)，其中所述定义包括当相互比较时重叠的氨基酸残基或氨基酸残基的子集。然而，应用两种定义之一来指代抗体或接枝的抗体或其变体的CDR意在属于如本文定义和所用的该术语的范围内。涵盖由如上面所引用文献各自定义本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异性结合CD22中的表位的抗体，其中所述抗体包含：a)免疫球蛋白重链，其包含具有氨基酸序列EVQLVESGGGLVKPGGSLX1LSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNX2LYLQMX3SLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)的VH区，其中X1是K或R；X2是S或T；且X3是N或S；和b)免疫球蛋白轻链。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.19 US 61/673,6301.一种特异性结合CD22中的表位的抗体，其中所述抗体包含：a)免疫球蛋白重链，其包含氨基酸序列EVQLVESGGGLVKPGGSLX1LSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNX2LYLQMX3SLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:1)所示的VH区，其中X1是K或R；X2是S或T；且X3是N或S；和b)免疫球蛋白轻链，其包含氨基酸序列DIQMTQSPSSX4SASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAX5KLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQX6EDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:2)，其中X4是L(Leu)或V(Val)；X5是V或P；且X6是Q或P。2.如权利要求1所述的抗体，其中所述免疫球蛋白轻链包含氨基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQQEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:7；VK1)。3.如权利要求1所述的抗体，其中所述免疫球蛋白轻链包含氨基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:8；VK2)。4.如权利要求1所述的抗体，其中所述免疫球蛋白轻链包含氨基酸序列DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYFCQQGNTLPWTFGGGTKVEIK(SEQIDNO:9；VK4)。5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述免疫球蛋白重链包含选自以下的氨基酸序列：EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO：3；VH3)；EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO：4；VH4)；EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO：5；VH5)；和EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAMYYCARHSGYGSSYGVLFAYWGQGTLVTVSS(SEQIDNO：6；VH6)。6.如权利要求2-4中任一项所述的抗体，其中所述免疫球蛋白重链包含选自以下的氨基酸序列：EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFAFSIYDMSWVRQAPGKGLEWVAYISSGGGTTYYPDTVKGRFTISRDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·兰布卡，R·G·E·霍尔盖特，F·J·卡尔，
申请(专利权)人：雷德伍德生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US