禽流感病毒及其H6亚型和N1亚型的GeXP快速检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了禽流感病毒及其H6亚型和N1亚型的GeXP快速检测试剂盒。本发明专利技术所提供的GeXP快速检测试剂盒包括成套引物1、成套引物2、成套引物3或成套引物4；成套引物1包括H6、N1和M；成套引物2包括H6和M；成套引物3包括N1和M；成套引物4包括H6和N1；H6由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的所示的单链DNA组成；N1由SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的单链DNA组成；M由SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的单链DNA组成。实验证明，本发明专利技术的成套引物可用来鉴定禽流感病毒及其H6亚型和N1亚型。

【技术实现步骤摘要】
禽流感病毒及其H6亚型和N1亚型的GeXP快速检测试剂盒
本专利技术涉及生物
中禽流感病毒及其H6亚型和N1亚型的GeXP快速检测试剂盒。
技术介绍
禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus,AIV)根据表面糖蛋白(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)抗原性差异分为不同的亚型，目前已发现有16种HA亚型(H1-H16)和9种NA亚型(N1-N9)，HA和NA的组合可产生至少135种亚型，其中，H5和H7亚型中的部分组合(H5N1、H7N7和H7N9等)称为高致病性AIV，可感染人类并致死。低致病性AIV感染虽然无任何症状或表现温和的、轻微的不典型症状，对畜禽和人类的健康不具威胁性，但当不同亚型的低致病性AIV毒株混合感染畜禽时，可以在动物体内互相交换基因，从而产生无法预测致病性和传染性的新变异株，这将对禽类和人类健康存在很大的威胁。H6亚型AIV属于低致病性AIV，但有报道表明1997年在香港爆发感染人的高致病性H5N1病毒，除HA基因外，其余7个基因片段都与A/teal/HongKong/W312/97(H6N1)病毒高度相似，因此H6亚型AIV很可能成为高致病性H5亚型AIV的基因供体。2013年6月，台湾发现了第一例人感染型H6N1亚型AIV，是一种低致病性禽流感病毒，其HA基因由台湾H6亚型AIV支内进化而来。目前，H6亚型AIV受到广泛地关注，对养禽业和公共卫生有重要的影响。鉴别诊断AIV的传统常规方法，主要包括病原分离鉴定和血清学试验等，但这些方法常受临床病料新鲜度、污染程度或病程的限制，操作也十分繁琐费时，对多重混合感染的鉴别诊断就更为困难。近年来，随着分子生物学的发展，PCR技术已被广泛应用于这些呼吸道病的检测。但基于常规PCR技术建立的多重PCR检测技术，需几对引物组合在一起同时竞争地扩增，引物之间会产生相互干扰，多增加一对引物，敏感性就越低。PCR产物需要通过琼脂糖电泳才可观察结果，该电泳难以区分50bp-100bp以内的条带，一般只可勉强做到2-4重PCR，难以做到高通量检测。多重荧光PCR一般只检测到3重，由于探针要标记不同发光波长的荧光基团，如标记太多的荧光基团，相互会产生干扰，导致检测结果不准确。并且在多重PCR反应体系中同时存在几对引物，使得形成复杂引物二聚体的概率大大增加，同时检测的目的基因数量有限，使得多重PCR还达不到高通量快速检测和分析的目标。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何鉴定禽流感病毒，并确定其HA亚型是否为H6亚型及其NA亚型是否为N1亚型。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的成套引物。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的成套引物为成套引物1、成套引物2、成套引物3或成套引物4；所述成套引物1包括名称为H6的PCR引物对、名称为N1的PCR引物对和名称为M的PCR引物对；所述H6由H6-F和H6-R组成；所述H6-F为包含序列表中SEQIDNo.1的第19-38位核苷酸的单链DNA；所述H6-R为包含序列表中SEQIDNo.2的第20-39位核苷酸的单链DNA；所述N1由N1-F和N1-R组成；所述N1-F为包含序列表中SEQIDNo.3的第19-38位核苷酸的单链DNA；所述N1-R为包含序列表中SEQIDNo.4的第20-38位核苷酸的单链DNA；所述M由M-F和M-R组成；所述M-F为包含序列表中SEQIDNo.5的第19-38位核苷酸的单链DNA；所述M-R为包含序列表中SEQIDNo.6的第20-39位核苷酸的单链DNA；所述成套引物2包括所述H6和所述M；所述成套引物3包括所述N1和所述M；所述成套引物4包括所述H6和所述N1。上述成套引物中，所述H6可由序列表中SEQIDNo.1所示的单链DNA和SEQIDNo.2所示的单链DNA组成；所述N1可由序列表中SEQIDNo.3所示的单链DNA和SEQIDNo.4所示的单链DNA组成；所述M可由序列表中SEQIDNo.5所示的单链DNA和SEQIDNo.6所示的单链DNA组成。上述成套引物中，所述成套引物1可由所述H6、所述N1、所述M和引物对G组成；所述G由序列表中SEQIDNo.1的第1-18位核苷酸所示的单链DNA和SEQIDNo.2的第1-19位核苷酸所示的单链DNA组成；所述成套引物2可由所述H6、所述M和所述G组成；所述成套引物3可由所述N1、所述M和所述G组成；所述成套引物4可由所述H6、所述N1和所述G组成。上述成套引物还可为成套引物5、成套引物6或成套引物7；所述成套引物5由所述M和所述G组成；所述成套引物6由所述H6和所述G组成；所述成套引物7由所述N1和所述G组成。上述成套引物中，所述G可用荧光染料标记，具体可为CY5。在本专利技术的一个实施例中，所述G的一条单链DNA(SEQIDNo.1的第1-18位核苷酸所示的单链DNA)为5′端被CY5标记的单链DNA。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了PCR引物对。本专利技术所提供的PCR引物对，为鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的PCR引物对M、鉴定或辅助鉴定H6亚型禽流感病毒的引物对H6或鉴定或辅助鉴定N1亚型禽流感病毒的引物对N1；所述H6由H6-F和H6-R组成；所述H6-F为包含序列表中SEQIDNo.1的第19-38位核苷酸的单链DNA；所述H6-R为包含序列表中SEQIDNo.2的第20-39位核苷酸的单链DNA；所述N1由N1-F和N1-R组成；所述N1-F为包含序列表中SEQIDNo.3的第19-38位核苷酸的单链DNA；所述N1-R为包含序列表中SEQIDNo.4的第20-38位核苷酸的单链DNA；所述M由M-F和M-R组成；所述M-F为包含序列表中SEQIDNo.5的第19-38位核苷酸的单链DNA；所述M-R为包含序列表中SEQIDNo.6的第20-39位核苷酸的单链DNA。上述引物对中，所述H6可由序列表中SEQIDNo.1所示的单链DNA和SEQIDNo.2所示的单链DNA组成；所述N1可由序列表中SEQIDNo.3所示的单链DNA和SEQIDNo.4所示的单链DNA组成；所述M可由序列表中SEQIDNo.5所示的单链DNA和SEQIDNo.6所示的单链DNA组成。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的系统。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的系统为下述H-Q中的任一种：H、含有所述成套引物1的系统；I、含有所述成套引物2的系统；J、含有所述成套引物3的系统；K、含有所述成套引物4的系统；L、含有所述成套引物5的系统；M、含有所述成套引物6的系统；N、含有所述成套引物7的系统；O、含有所述M的系统；P、含有所述H6的系统；Q、含有所述N1的系统。上述鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的系统，还可包括通过GeXP遗传分析系统鉴定或辅助鉴定禽流感病毒所需的试剂和仪器。具体来说，鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的系统可包括所述成套引物1、所述成套引物2、所述成套引物3、所述成套引物4、所述成套引物5、所述成套引物6、所述成套引物7、所述M、所述H6或所述N1以及GeXP遗传分析系统所需要的其它试剂和仪器。上述鉴定本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的成套引物，为成套引物1、成套引物2、成套引物3或成套引物4；所述成套引物1包括名称为H6的PCR引物对、名称为N1的PCR引物对和名称为M的PCR引物对；所述H6由H6‑F和H6‑R组成；所述H6‑F为包含序列表中SEQ ID No.1的第19‑38位核苷酸的单链DNA；所述H6‑R为包含序列表中SEQ ID No.2的第20‑39位核苷酸的单链DNA；所述N1由N1‑F和N1‑R组成；所述N1‑F为包含序列表中SEQ ID No.3的第19‑38位核苷酸的单链DNA；所述N1‑R为包含序列表中SEQ ID No.4的第20‑38位核苷酸的单链DNA；所述M由M‑F和M‑R组成；所述M‑F为包含序列表中SEQ ID No.5的第19‑38位核苷酸的单链DNA；所述M‑R为包含序列表中SEQ ID No.6的第20‑39位核苷酸的单链DNA；所述成套引物2包括所述H6和所述M；所述成套引物3包括所述N1和所述M；所述成套引物4包括所述H6和所述N1。

【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定禽流感病毒的成套引物，所述成套引物包括名称为H6的PCR引物对、名称为N1的PCR引物对和名称为M的PCR引物对；所述H6由序列表中SEQIDNo.1所示的单链DNA和SEQIDNo.2所示的单链DNA组成；所述N1由序列表中SEQIDNo.3所示的单链DNA和SEQIDNo.4所示的单链DNA组成；所述M由序列表中SEQIDNo.5所示的单链DNA和SEQIDNo.6所示的单链DNA组成。2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，罗思思，谢志勤，邓显文，刘加波，谢丽基，黄莉，黄娇玲，曾婷婷，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45