表达H5亚型禽流感病毒截短HA蛋白的重组新城疫耐热疫苗株及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种表达H5亚型禽流感病毒截短HA蛋白的重组新城疫耐热疫苗株及制备方法，所述的耐热疫苗株分类命名为rTS‑HA1/H5，于2016年4月19日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:V201629。该疫苗株具有显著的耐热特性，可极大降低对冷链系统的依赖，节省保存运输成本和提高疫苗热稳定性。该疫苗株表达的不是完整的HA蛋白，只选取了HA蛋白中具有强免疫原性的HA1区域(1‑1041nt)，可针对性地增强疫苗的免疫保护效果。可用于制备H5禽流感、新城疫二联耐热活疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种表达H5亚型禽流感病毒截短HA蛋白的重组新城疫耐热疫苗株及制备方法。
技术介绍
H5亚型禽流感病毒可引发禽类的急性致死性传染病--高致病性禽流感，其临床表现为高死亡率、产蛋下降，严重的呼吸道症状等。H5亚型禽流感还可感染人类，并引起发病。1997年香港的“禽流感”事件中，H5亚型禽流感跨越种间障碍直接感染人类，造成了18人感染、6人死亡。截止2013年，H5亚型禽流感已经导致648人感染，384人死亡，其中我国45人感染，30人死亡。除家禽外，我国从水禽、野鸟及其它野生动物中也分离到了H5亚型禽流感毒株。近年来，H5亚型禽流感给全球养禽业造成了巨大经济损失的同时，也对人类健康和全球公共卫生构成严重威胁。预防接种灭活疫苗是我国当前防控H5亚型禽流感的主要手段。传统的灭活疫苗制备比较简单，储存运输方便，免疫效果持久，在禽流感防控中发挥了重要作用。但灭活疫苗也有一些不足之处，如需肌肉注射，费工费时，免疫成本高。灭活疫苗的使用在一定程度上增加了临床上区分野毒感染与疫苗免疫的难度，且存在散毒风险。因此，研发廉价、安全、高效的H5亚型禽流感疫苗具有重要本文档来自技高网...

【技术保护点】
表达H5亚型禽流感病毒截短HA蛋白的重组新城疫耐热疫苗株，其特征在于所述的耐热疫苗株分类命名为rTS‑HA1/H5，于2016年4月19日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:V201629。

【技术特征摘要】
1.表达H5亚型禽流感病毒截短HA蛋白的重组新城疫耐热疫苗株，其特征在于所述的耐热疫苗株分类命名为rTS-HA1/H5，于2016年4月19日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:V201629。2.表达H5亚型禽流感病毒截短HA蛋白的重组新城疫耐热疫苗株的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1.1H5亚型禽流感病毒HA1基因的PCR扩增将H5N1禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004株在9-11日龄鸡胚上进行增殖，接种5天后收获鸡胚尿囊液；将收获的尿囊液进行HA1基因的RT-PCR扩增，扩增引物为：上游引物5′-AAGCTTGCCACCATGGAGAAAATAGTGCTTCTTCTTGC-3′，下游引物5′-ATCGGGGCACTCCGATTCTACCCGTATTTTTTCTTAATTATTATCCTCTCTTTTTTCTTCTTCTC-3′；对PCR产物进行琼脂糖凝胶回收纯化后，测定DNA浓度，待进行克隆连接；1.2新城疫病毒耐热载体片段的PCR扩增以超长片段PCR的方法获得新城疫病毒载体序列，扩增引物为：上游引物5′-TCGGAGTGCCCCGATTGTGCCAAGATGGACTC-3′，下游引物5′-CATGGTGGCAAGCTTTCTA...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵华斌，温国元，罗青平，潘兹书，乔磊，罗玲，王红琳，张腾飞，汪宏才，张蓉蓉，卢琴，艾地云，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42