运载新城疫病毒的禽疫苗制造技术

本发明专利技术包括经加工的新城疫病毒（NDV）疫苗或组合物。疫苗或组合物可为重组疫苗。本发明专利技术也包括编码及表达禽病原体抗原，更特别禽流感蛋白，表位或免疫原的重组载体。该疫苗或组合物可用于保护动物，尤其是禽，免于疾病。

【技术实现步骤摘要】
运载新城疫病毒的禽疫苗本申请是分案申请，母案的申请号为201080022159.3 (国际申请号PCT/US2010/029825)，申请日为2010年4月2日，专利技术名称为“运载新城疫病毒的禽疫苗”。【援引加入】本申请要求2009年4月3日提交的US临时申请系列N0.61/166，481的权利。【
】本专利技术包括运载NDV的禽疫苗或组合物,尤其是禽流感疫苗。疫苗可为经加工的禽疫苗。【
技术介绍
】近年的几项研究点燃了新城疫病毒(NDV)用作禽疾病的疫苗载体的潜力(Krishnamurthy et al.,Virology278, 168-182, 2000;Huang et al.,J.Gen.Virol.82，1729-1736，2001;Nakaya et al.,J.Virol.75，11868-11873，2001;Parket al.PNAS103,8203-8208,2006;Veits et al PNAS103,8197-8202，2006;Geet a 1.j.Virol.81，150-158，2 0 0 7； Romer-Oberdorfer e tal.Vaccine26, 2307-2313，2008)。NDV属于副粘病毒亚科(Paramyxovirinae)和禽副粘病毒属(Avulavirus)。NDV在呼吸和消化道中，在输卵管中，及对于一些分离物，在神经系统中复制。传播是产气的，且通过口及粪便途径。NDV导致高度接触传染及致死的疾病，其影响全部物种的鸟，及可感染一些哺乳动物种。疾病可从临床不明显变化到高度强毒形式，依赖于病毒株和宿主物种。由NDV株显示的毒力的连续谱致使将它们分为3种不同致病型组:缓发型，中发型及速发型(Alexander, D.J.，Diseases of Poultry, 1wa State Un1.Press, AmesIA，541-569，1997)。缓发型株通常不在成年鸡中导致疾病，且在美国和其他国家在家禽工业中作为活疫苗广泛使用。中间毒力的病毒称之为中发型，而导致高死亡率的病毒称之为速发型。疾病具有世界性分布，且对商业家禽生产保持恒定的主要威胁。NDV基因组是约15kb的RNA的非-分段的阴性链。基因组RNA含有编码依序以下蛋白的6个基因:核壳蛋白(NP)，磷蛋白(P)，基质蛋白(M)，融合蛋白(F)，血细胞凝集素-神经酰胺酶(HN)和大聚合酶蛋白(L)15P基因转录期间通过RNA编辑产生未知的功能的2种额外的蛋白，V 和 W (Steward et al., 1993, Journal of General Virology74:2539-2547)。近年建立了自克隆的cDNA完全恢复非-分段的阴性RNA病毒的方法的开发，开启了遗传操作此病毒组，包括NDV的可能性(Conzelmann, K.K., Ann.Rev.Genet.32，123-162，1998; Roberts and Rose, Virology247, 1-6, 1998)。此独特分子遗传方法，称之为“反向遗传学”，提供不仅研究各种病毒-编码的基因的功能的手段(Paleseet al., PNAS93, 11354-11358，1996;Nagai, Y., Rev.Med.Virol.9, 83-99, 1999)，而且允许使用这些病毒来表达异源基因(Bukreyev et al., J.Virol.70, 6634-6641, 1996;Mebatsion et al.,PNAS93, 7310-7314，1996;Schnell et al., PNAS93, 11359-11365, 1996;Hasan etal., J.Gen.Virol.78, 2813-2820, 1997;He et al., Virology237, 249-260, 1997;Sakai etal.，FEBS Lett.45，221-226，1999)。此提供产生改善的疫苗和疫苗载体的新方法。2个独立小组在1999年同时报道了基于NDV的缓发型疫苗株(LaSota)自克隆的cDNA 恢复系统(Peeters et al., 1999; Romer-Oberdorfer et al.，1999)。在第 I 报道的系统中，将自LaSota株(ATCC-VR699)的全长NDV cDNA组装进含有T7DNA-依赖性-RNA聚合酶启动子的P0LTV5转录载体。将NDV转录酶复合物的个体克隆(NP，P和L)在真核表达载体中克隆。共转染流程在感染的单层细胞中产生了几个感染中心(Peeters et al.，J.Virol.73，5001-5009, 1999)。第2系统报道了自克隆的cDNA的缓发型NDV的恢复，基本上使用组装全长反基因链表达质粒及支持质粒的相同的策略(Romer-Oberdorfer etal., Journal of General Virology, 80, 2987 - 2995,1999)。最近开发其他系统来恢复NDV 的缓发型 Hitchner BI (Nakaya 等人，2001)或 LaSota 株(Huang 等人，2001 )。可对于重组体中发型NDV的恢复有用的系统仅被Krishnamurthy等人描述(2000)。此系统利用痘苗病毒重组(MVA)和用于转染的HEP-2细胞。使用中发型株Beaudette C的全长克隆和自相同的株的支持质粒(N，P和L)用于转染。将编码CAT报告子基因的额外的转录单元放置在HN和L基因之间。表达CAT基因的rNDV的生长延迟及病毒衰减。CAT报告子基因在细胞培养中稳定地表达几代。禽流感(AIV)，有时称之为禽流感(Avian flu)，且通常认识为鸟流感，指由适应于鸟的流感病毒导致的流感。AIV是分段的，单-链，负义RNA病毒，属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae),及分类为A型流感病毒。A型病毒是动物和人流感的最频繁的病原。此类型在主要基于2种表面脂质-包裹的膜蛋白，血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)分化的许多株或亚型中发生。HA,辅助病毒进入宿主细胞，及NA辅助后代病毒从感染的细胞释放(deJong et al., J Clin Virol.35 (I): 2-13，2006)。A 型病毒流感基于它们的特定 HA 和 NA 含量分为亚型。有16种不同HA亚型，及9种不同NA亚型。许多不同HA和NA蛋白的组合是可能的。流感A病毒亚型根 据它们的HA和NA表面蛋白命名。例如，“H7N2病毒”指具有H7亚型的HA蛋白和自N2亚型的NA蛋白的流感A亚型。类似地，“H5N1 ”病毒具有H5亚型的HA和自NI亚型的NA。H5N1亚型特别相关于新近在亚洲，俄罗斯，中东，欧洲和非洲的暴发(Olsen et al.，Science21;312(5772):384-8，2006)。流感A病毒可感染人，猪，马，海豹，鲸，家禽，猫，狗，雪貂及其他动物，但野生鸟是它们的天然的宿主。水生鸟构成主要流感携带者，由此病毒系进化及适应它们的宿主，例如，人，猪及马流感。宿主特异性不是绝对的，且物种间传播可发生，如通过高度病原本文档来自技高网...

【技术保护点】
组合物，其包含：（i）经加工的NDV载体、和（ii）药学或兽医学可接受的载体。

【技术特征摘要】
2009.04.03 US 61/166,4811.组合物，其包含: (i)经加工的NDV载体、和 (?)药学或兽医学可接受的载体。2.权利要求1的组合物，其中经加工的NDV载体包含编码禽流感HA抗原的异源多核苷酸或其变体。3.权利要求1或2的组合物，其中经加工的NDV载体包含: 与具有SEQ ID NO:1所不的序列的多核苷酸具有至少90%序列同一'丨生的多核苷酸、或 和与具有SEQ ID NO:1所不的序列的多核苷酸具有至少90%序列同一'丨生的多核苷酸互补的多核苷酸。4.权利要求2或3的组合物，其中禽流感HA抗原是H5HA多肽。5.权利要求2~4中任一项的组合物，其中HA抗原具有修饰的切割位点。6.权利要求2~5中任一项的组合物，其中HA抗原与具有SEQID NO: 15，17，19，21或23所示的序列的多肽具有至少80%氨基酸序列同一性。7.权利要求2~6中任一项的组合物，其中异源多核苷酸与具有SEQID NO: 14,16,18,20或22所不的序列的多核苷酸具有至少80%序列同一'丨生。8.修饰NDV的基因组来产生经加工的NDV载体的方法，其中方法包括将分离的多核苷酸在NDV基因组的非必要区内导入NDV基因组中。9.权利要求8的方法，其中NDV包含: 与具有SEQ ID NO:1所不的序列的多核苷酸具有至少90%序列同一'丨生的多核苷酸、或 和与具有SEQ ID NO:1所不的序列的多核苷酸具有至少90%序列同一'丨生的多核苷酸互补的多核苷酸。10.权利要求8或9的方法，其中非必要区选自由下列组成的区:位于NP基因上游，APMV基因组的2个基因之间，及L基因的下游的非翻译区。11.权利要求8~10中任一项的方法，其中非必要区位于P和M基因之间或M和F基因之间。12.表达至少一种抗原的经加工的NDV载体用于制备组合物的用途，所述组合物用于引发禽的保护性应答或针对至少一种禽病原体而给禽免疫接种。13.权利要求12的用途，其中NDV载体包含: 与具有SEQ ID NO:1所不的序列的多核苷酸具有至少90%序列同一'丨生的多核苷酸、或 和与具有SEQ ID NO:1所不的序列的多核苷酸具有至...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·巴布洛特，F·雷纳尔，FX·勒格罗斯，
申请(专利权)人：梅里亚有限公司，
类型：发明
国别省市：