蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途制造技术

本发明专利技术涉及蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途，属于畜禽免疫佐剂领域。所述蝉花虫草多糖由蝉花子实体或培养基采用热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制得。本发明专利技术工艺简单，通过免疫试验证明，蝉花虫草多糖免疫增强剂能显著增强鸡机体的免疫功能；配合新城疫疫苗免疫雏鸡，能显著提高疫苗的免疫应答，而且免疫作用的时间持续较长，该制剂无药物残留、毒副作用等问题，是一种绿色、高效及稳定的鸡免疫增强剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途，属于畜禽免疫佐剂领域。
技术介绍
传染病特别是病毒性传染病，在全世界范围内对畜牧业造成严重损失，接种疫苗是目前控制传染病最有效的手段。然而,养殖场虽然按免疫程序进行了严格的疫苗接种，但在很多情况下，动物免疫之后仍然难以产生有效的免疫应答，致使传染病不能完全被控制。若注射疫苗的同时，配合应用适当的免疫增强剂可以辅助疫苗产生较好的免疫应答，提高其免疫效力，从而提高疫苗免疫的效果。应用免疫增强剂成为目前提高疫苗免疫效果的重要手段之一。现有研究表明，中药及其有效成分能够显著提高疫苗的免疫效果，很多中药及其主要成分作为疫苗的免疫增强剂已开始在动物及人的临床上使用。近年来，很多研究者从植物和真菌中提取了多糖，通过研究发现多糖具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗衰老等一系列生物学活性。据报道，多糖最主要的活性是其免疫调节活性，其对机体的特异性和非特异性免疫功能均具有增强作用，主要体现在能够促进特异性抗体生成、促进淋巴细胞增殖、提高巨噬细胞系统的吞嚼能力、诱导细胞因子的分泌、激活补体系统等方式提高机体的免疫功能。蝉花(Paecilomycescicadae(Miq.)Samson)是我国传统的名贵中药材之一，又名金蝉花、蝉花虫草，由麦角菌科虫草属真菌蝉拟青霉寄生于蝉类若虫的干燥复合体。现有研究结果表明，蝉花与多种虫草中的主要成分氨基酸种类相似，具有不同程度的补益作用[2]。蝉花含有多种营养物质，提取的多糖称之为蝉拟青霉多糖、蝉花虫草多糖。有研究表明，蝉拟青霉多糖对老年大鼠免疫功能有调节作用、对大鼠免疫功能和血液生化功能等具有一定的作用。
技术实现思路
本专利技术从人工培养蝉花虫草中提取多糖，通过给鸡灌服不同浓度的蝉花虫草多糖，以鸡新城疫弱毒苗、灭活苗刺激，观察不同处理对疫苗免疫后鸡新城疫抗体变化水平的影响，发现蝉花虫草多糖可增强雏仔鸡机体的免疫功能，而且免疫作用的时间持续较长。本专利技术的第一个目的在于提供蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途，其特征在于：所述蝉花虫草多糖免疫增强剂由蝉花虫草热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制成，具体步骤如下：(1)将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50％乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液；(2)70℃减压浓缩至原体积的十分之一，得浓缩液；(3)将浓缩液在搅拌下加入3倍体积的95％乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖；(4)经孔径为50纳米与200纳米的陶瓷膜分离得到多糖分子分子量为30-100w之间的粗多糖溶液，对粗多糖用sevage法除蛋白、脱色、过阴离子交换柱后减压浓缩得到的浓缩液；(5)将浓缩液进一步过sephadrose6b凝胶树脂纯化，得到分子量大小在75W左右的目的多糖，经真空干燥、灭菌、获得蝉花虫草多糖。进一步地，步骤(1)中蝉花虫草可以是天然蝉花或人工栽培的蝉花虫草子实体、蝉花虫草菌丝体或蝉花虫草培养基。市售的免疫增强剂制备过程复杂，作用效果不确切，免疫作用时间不长。本专利技术蝉花虫草多糖能有效地促进雏鸡生长性能及免疫机能的提高，增强了雏仔鸡机体的免疫功能，而且免疫作用的时间持续较长，蝉花虫草多糖组成的免疫增强剂是一种安全有效的绿色环保型免疫增强剂。本专利技术针对当前动物疫病防控现有技术中急需高效、安全的免疫增强剂或疫苗佐剂的问题，提供一种由蝉花提取得到的多糖制成的新型中药免疫增强剂。本专利技术的蝉花虫草多糖免疫增强剂不同剂量对鸡新城疫苗免疫效果的免疫增强作用，证明合适的剂量能显著提高免疫雏鸡的血清抗体效价，增强鸡的细胞免疫和体液免疫，提高新城疫苗的免疫应答；100mg/kg·BW为雏鸡的最佳剂量。另一方面，本专利技术提供一种鸡免疫制剂，其特征在于，所述鸡免疫制剂包括蝉花虫草多糖和至少一种鸡的疫苗试剂，所述蝉花虫草多糖免疫增强剂由蝉花虫草热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制成，具体步骤如下：(1)将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50％乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液；(2)70℃减压浓缩至原体积的十分之一，得浓缩液；(3)将浓缩液在搅拌下加入3倍体积的95％乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖；(4)经孔径为50纳米与200纳米的陶瓷膜分离得到多糖分子分子量为30-100w之间的粗多糖溶液，对粗多糖用sevage法除蛋白、脱色、过阴离子交换柱后减压浓缩得到的浓缩液；(5)将浓缩液进一步过sephadrose6b凝胶树脂纯化，得到分子量大小在75W左右的目的多糖，经真空干燥、灭菌、获得蝉花虫草多糖。与现有技术相比，本专利技术优点如下：1.与化学佐剂相比，蝉花虫草多糖增强剂来源于天然中药，成分安全，无毒副作用，无药物残留隐患，可保障动物源食品安全且生产、制备过程对环境无污染，是一种绿色高效的免疫增强剂。2.与传统中药方剂相比，蝉花虫草多糖增强剂成分明确，质量可控，药效可靠。3.与同类中药成分方剂相比，蝉花虫草多糖增强剂功效提高，单用或配合新城疫疫苗免疫雏鸡，能显著增强细胞免疫和体液免疫，提高疫苗的免疫应答，可在兽医临床上推广应用。附图说明图1：14日龄雏鸡ND-HI抗体水平示意图。图2:脾脏组织形态学染色(100X)。图3：法氏囊组织形态学染色(100X)。具体实施方式实施例1.蝉花虫草多糖单一组分的分离纯化1.1蝉花虫草多糖的提取制备将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50％乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液。70℃减压浓缩至原体积的十分之一；上述浓缩液搅拌下加入3倍体积的95％乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖产品。1.2蝉花虫草多糖的分离纯化蝉花虫草多糖提取制备过程中最后一步用3倍体积的乙醇洗涤得到的多糖沉淀用适量去离子水稀释溶解至一定体积，将稀释溶解蝉花虫草多糖的溶液加到陶瓷膜分离机中，先利用截留能力为200纳米的陶瓷膜，将我们先前加入到陶瓷膜分离机中的蝉花虫草多糖溶液分离成两部分，即200纳米陶瓷膜的截流液A(多糖分子直径大小大于200纳米)与透过液B(多糖分子直径大小小于2本文档来自技高网...

【技术保护点】
蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途。

【技术特征摘要】
1.蝉花虫草多糖在制备鸡免疫增强试剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述蝉花虫草多糖免疫增强剂由蝉花虫草热回流提取后经陶瓷膜分离纯化制成，具体步骤如下：（1）将蝉花虫草粉碎过60～80目筛；向粉碎的原料中加入10倍体积的50%乙醇，进行热回流辅助提取，过滤，滤渣重复进行上述步骤，重复1～3次；合并多次滤液；（2）70℃减压浓缩至原体积的十分之一，得浓缩液；（3）将浓缩液在搅拌下加入3倍体积的95%乙醇，静置4小时以上，离心收集沉淀；用3倍体积的乙醇洗涤沉淀，离心，真空干燥得到深褐色粉末状的蝉花虫草多糖；（4）经孔径为50纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴一秋，刘素贞，朱碧纯，厉晓腊，
申请(专利权)人：浙江省亚热带作物研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33