一种鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的跨膜型胞内抗体、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的跨膜型胞内抗体、制备方法及其应用。本发明专利技术通过将扩增的鸡源抗NDV的P蛋白单链抗体scFv ZL1编码基因与跨膜肽CTP基因融合，得到scFvZL1-CTP编码基因，将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中，构建鸡源性抗NDV的P蛋白的跨模型细胞内抗体表达质粒(pET28a-scFvZL1-CTP)；其原核表达产物就是跨模型胞内抗体(Trans-ZL1-CTP)。将跨模型胞内抗体转染BHK21细胞，其能够在宿主细胞内胞浆内均匀分布，对细胞没有毒性作用；TCID50法检测证明，跨模型胞内抗体对细胞有一定的保护效果，可以用于鸡新城疫的治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的跨膜型胞内抗体、制备方法及其应用
本专利技术涉及基因工程
，具体的说，涉及一种鸡源性抗鸡新城疫病毒(NDV)P蛋白的跨膜型胞内抗体、制备方法及其应用。
技术介绍
新城疫病毒(NDV)属副粘病毒，其引起的新城疫(ND)是一种对世界养禽业危害极为严重的传染病。NDV进入细胞后，首先转录产生mRNA，翻译出早期蛋白(NP，P蛋白)，二者与L蛋白共同组成病毒的核糖核蛋白复合体(RNP)之后，病毒mRNA才能翻译出其他晚期蛋白(F蛋白、HN以及M蛋白等)，进而组装成病毒粒子出芽。此外，P蛋白还能与未组装的前体NP结合，形成P-NP复合物，该复合物既可激活病毒基因组复制，也可阻止前体NP与病毒RNA非法组装形成核衣壳。由此可见，新城疫病毒进入宿主细胞后能否顺利复制增殖，其中能否形成RNP是最为关键的。因此，深入研究转录复合体(RNP)关键的P蛋白，无论是对于病毒复制增殖机制研究，还是新型抗病毒药物研发都是非常必要的。胞内抗体技术是一种全新的可阻断细胞内靶蛋白功能的技术，它通过特异性干扰或阻断分布于该部位的某些生物大分子的活性或加工、分泌过程，引起细胞的一系列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的跨膜型胞内抗体的制备方法，其特征在于：其将扩增的鸡源抗NDV的P蛋白单链抗体scFv ZL1编码基因与跨膜肽CTP基因融合，得到scFvZL1‑CTP编码基因，再将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中，构建鸡源性抗NDV的P蛋白的跨模型细胞内抗体表达质粒pET28a‑scFvZL1‑CTP；其原核表达产物就是跨模型胞内抗体Trans‑ZL1‑CTP。

【技术特征摘要】
1.一种鸡源性抗鸡新城疫病毒P蛋白的跨膜型胞内抗体的制备方法，其将扩增的鸡源抗NDV的P蛋白单链抗体scFvZL1编码基因与跨膜肽CTP基因融合，得到scFvZL1-CTP编码基因，再将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中，构建鸡源性抗NDV的P蛋白的跨模型细胞内抗体表达质粒pET28a-scFvZL1-CTP；其原核表达产物就是跨模型胞内抗体Trans-ZL1-CTP，其特征在于：具体步骤如下：(1)PCR扩增目的基因取冷冻保存的抗体ZL1工程菌，分区划线LB平板，从LB平板挑取单克隆后摇菌，按常规方法提取质粒，取1μl作为模板，利用特异性引物PCR扩增目的基因scFvZL1-CTP，所述特异性引物中融合加入33个碱基的CTP；经检测无误后，采用AxyGEN胶回收试剂盒回收扩增的目的片段scfvZL1-CTP；(2)目的片段scFvZL1-CTP和原核表达载体pET28a(+)载体黏性末端的制备将上述回收的目的片段scFvZL1-CTP和原核表达载体pET28a(+)用EcoRI和NcoI双酶切，然后经琼脂糖凝胶电泳验证，对酶切产物目的条带，采用AxyGEN胶回收试剂盒回收；(3)目的基因与表达载体的连接将上述回收的目的片段scFvZL1-CTP和原核表达载体pET28a(+)载体用T4DNA连接酶进行连接，得到重组质粒pET28a-scFvZL1-CTP；(4)pET28a–scFvZL1-CTP重组质粒诱导表达和纯化先将重组质粒pET28a-scFvZL1-CTP转化至Trans1-Blue感受态细胞中，重组菌经1mM的IPTG诱导表达后，收集菌体，得到跨膜型细胞内抗体表达质粒pET28a–...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建国，李本强，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31