一种鸡新城疫弱毒株及其在制备鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的应用，本发明专利技术的目的是提供一种低致病力的鸡新城疫病毒，该病毒具有免疫原性好，安全的特性。本发明专利技术的技术方案是，一种鸡新城疫弱毒株，藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，微生物保藏编号为CGMCC No.11290。本发明专利技术分离得到的毒株是一株免疫原性好、生产性能优良、适宜大规模生产的种毒。由该毒株制备的活疫苗产品质量合格，具备产业化生产的条件。
【技术实现步骤摘要】
：本专利技术涉及鸡新城疫的病原以及预防，特别是一种鸡新城疫弱毒株及其在制备鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的应用。
技术介绍
：新城疫(NewcastleDisease，ND)，又称亚洲鸡瘟、伪鸡瘟等，是发生于鸡、鸽、鹌鹑、火鸡等家禽和野生禽类的一种急性、败血性和高度接触性传染病，是世界动物卫生组织（OIE）规定的法定必报传染病之一。其病原是新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus，NDV)。NDV属于副黏病毒科，副黏病毒亚科，腮腺炎病毒属（Rubulavirus）。NDV只有1个血清型，但通过遗传发生分析，可将不同地区的流行毒株或疫苗株分成若干个基因型或抗原群。近年来，我国流行的主要毒株属于NDVⅦ、Ⅷ、Ⅸ基因型，其中基因Ⅶ型是主要流行毒株。基因Ⅶ型包括Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd、Ⅶe5个亚型，我国流行的主要是Ⅶd、Ⅶe亚型。新城疫不仅给家禽养殖业带来严重的经济损失，而且还严重影响禽和禽类相关产品的国际贸易。因此，世界各国对该病的发生流行均采取非常严格的防控措施。1990年代以来，我国新城疫在疫苗免疫鸡群中的发生逐渐严重，主要特征是产蛋量大幅下降以及死亡率低、抗体滴度高，这种非典型新城疫严重危害了鸡的生产性能，给养禽业造成了巨大损失。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供一种低致病力的鸡新城疫病毒，该病毒具有免疫原性好，安全的特性。本专利技术的技术方案是，一种鸡新城疫弱毒株，藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，微生物保藏编号为CGMCCNo.11290。保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏日期：2015年10月19日。分类命名：鸡新城疫病毒。一种鸡新城疫弱毒株在制备鸡新城疫弱毒活疫苗中的应用。一种鸡新城疫弱毒株由其制备鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的制备，步骤包括：（1）以权力1要求所述的弱毒株为种毒，PBS缓冲液等量稀释后接种鸡胚尿囊腔，每胚0.1-0.2mL，37℃孵育，孵育96h后收获尿囊液，计量加入0.1%的甲醛溶液灭活，即得抗原液；（2）以白油和Span-80按94:6的比例混合后，加2%的硬脂酸铝，搅拌至透明，高压灭菌即得油相；（3）抗原液和灭菌后的Tween-80按96:4比例混合，充分振摇，使Tween-80完全溶解，即为水相；（4）油相和水相按照2份:1份混合乳化，即油相2份注入胶体磨中，打开开关搅动油相，同时缓慢加入水相1份，搅拌转速由慢到快充分乳化，即完成制备。本专利技术分离得到的毒株是一株免疫原性好、生产性能优良、适宜大规模生产的种毒。由该毒株制备的活疫苗产品质量合格，具备产业化生产的条件。具体实施方式：实施例1，（1）以微生物保藏编号为CGMCCNo.11290的弱毒株为种毒，PBS缓冲液等量稀释后接种鸡胚尿囊腔，每胚0.1-0.2mL，37℃孵育，孵育96h后收获尿囊液，孵育96h后收获尿囊液，计量加入0.1%的甲醛溶液灭活，即得抗原液；（2）以白油和Span-80按94:6的比例混合后，加2%的硬脂酸铝，搅拌至透明，高压灭菌即得油相；（3）抗原液和灭菌后的Tween-80按96:4比例混合，充分振摇，使Tween-80完全溶解，即为水相；（4）油相和水相按照2份:1份混合乳化，即油相2份注入胶体磨中，打开开关搅动油相，同时缓慢加入水相1份，搅拌转速由慢到快充分乳化，即完成制备。具体实例：病料采集及处理病料来自河南省卫辉市某蛋鸡场，选择自然发病死亡6h内或频死鸡，无菌采集气管组织块、肝脏、肾脏、脑，加10倍生理盐水，在研钵内反复研磨成乳剂，4000r/min离心10min，反复2次。取上清液向其中按1%的量加入双抗，于4℃冰箱内过夜保存。2鸡胚接种及尿囊液的收集无菌条件下，将上清液接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔，接种量为0.2mL/胚。将接种的鸡胚置37℃恒温箱孵育。每4h照蛋一次，将死亡鸡胚或垂死鸡胚取出置4℃冰箱保存，7d后将所有鸡胚取出置于4℃冷却，收集尿囊液。重复传3代，收尿囊液4000r/min离心15min，收上清液冷冻保存。3血凝特性测定分别采集猪、兔、犬、绵羊、豚鼠、小鼠、山羊、鸡、人的O型红细胞。将红细胞用生理盐水制成1%的悬液。在V型血凝板上，每孔滴加PBS液（PH7.0）0.025mL，每孔分别滴加待检病毒0.025mL，混匀后弃去0.025mL，之后每孔滴加1%（v/v）红细胞悬液0.025mL，每种动物红细胞2个重复，置于微型混合器上振荡1min，置于室温条件下（18℃-20℃）35min后，观察可见红细胞均出现凝集（见表1）。表1分离毒株对不同种红细胞血凝（HA）图谱红细胞猪兔犬绵羊豚鼠小鼠山羊鸡人O型HA结果+++++++++在V型血凝板上，5排每孔滴加PBS液（PH7.0）0.025mL，每孔分别滴加待检病毒0.025mL，混匀后弃去0.025mL，第1排每孔滴加抗NDV标准阳性血清0.025mL，第2排每孔滴加抗AIVH9亚型标准阳性血清0.025mL，第3排每孔滴加抗AIVH5亚型标准阳性血清0.025mL，第4排每孔滴加抗EDS标准阳性血清0.025mL，第5排滴加盐水0.025mL为对照，充分混匀后室温下孵育20min。之后滴加1%(v/v)红细胞悬液0.025mL，每种红细胞1列孔，充分混匀后室温下作用35min，观察可见，第1、5排红细胞无凝集，第2、3、4排红细胞凝集（见表2）。表2分离毒株对不同红细胞血凝性抑制试验血凝板红细胞猪兔犬绵羊豚鼠小鼠山羊鸡人O型第1排抗NDV血清组－－－－－－－－－第2排抗AIVH9血清组＋＋＋＋＋＋＋＋＋2-->第3排抗AIVH5血清组＋＋＋＋＋＋＋＋＋第4排抗EDS血清组＋＋＋＋＋＋＋＋＋第5排对照－－－－－－－－－4鸡胚平均致死时间（MDT）测定将新鲜的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鸡新城疫弱毒株，藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，微生物保藏编号为CGMCC No.11290。
【技术特征摘要】
1.一种鸡新城疫弱毒株，藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，微生
物保藏编号为CGMCCNo.11290。
2.如权利要求1所述的一种鸡新城疫弱毒株在制备鸡新城疫弱毒活疫苗中的应用。
3.如权利要求1所述一种鸡新城疫弱毒株，由其制备鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的制备，
其特征在于：步骤包括：
（1）以权利要求1所述的弱毒株为种毒，稀释后接种鸡胚尿囊腔，孵育96h后收获尿囊
液，计量加入...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵坤，徐小博，徐萍，刘明成，王丽荣，王元元，李任峰，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：河南;41
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