本发明专利技术提供鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体的制备方法，包括以下步骤：分离鸭病毒性肝炎毒株和制备灭活疫苗；所述灭活疫苗免疫无病产蛋鸡群得到高免蛋，分离蛋黄后经酸化处理、辛酸处理、离心、板框过滤、灭活、超滤、配液、过滤除菌后得到鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体。将鸭病毒性肝炎1型和鸭病毒性肝炎3型毒株单独做苗，分开免疫健康产蛋鸡群，避免了两种抗原在同一机体中的免疫应答竞争影响的因素，每种血清型的抗体效价单独控制，避免因一种血清型抗体效价不高时，再次免疫二联疫苗对另一种血清型抗原造成免疫耐受的后果。该技术得到了无类脂物质、无任何外源微生物污染的高效价精制蛋黄抗体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及禽用生物制品领域，特别涉及鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体的制备方 法。
技术介绍
鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒（DHV)引起雏鸭的一种高度致死性、传播迅速的病 毒性疾病，以肝炎为其主要特征。如果防治不当，死亡率很高，对养鸭场会造成很大的经济 损失。 鸭病毒性肝炎于1958年始发于我国上海地区，迄今为止，该病已在我国流行50多 年。根据大量的文献报道及实验室检测结果，表明目前在我国大量流行的鸭病毒性肝炎的 发生主要由DHAV-I型和DHAV-3型感染所致，其中单个血清型的流行占据70%以上，两种 血清型的混合感染占据小于30%的比例，但是目前临床现有的鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体 主要以二价抗体为主，并未针对地方所流行血清型来选择特异性抗体。DHAV-I型和DHAV-3 型之间几乎没有交叉保护，这样无疑造成了非特异性抗体的浪费。为了适应市场需求，降低 非特异性鸭肝抗体的浪费，研宄一种鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体的新型制备方法，根据地 方流行鸭肝炎病毒血清型来选择相应的血清型抗体预防和治疗，迫在眉睫。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在通过分离目前临床最流行的鸭肝炎病毒的血清型毒株，提 出，以制备出高效价、高特异性、高纯度、无任何外 源微生物污染的鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体。 本专利技术提出了一种，包括以下步骤：分离 鸭病毒性肝炎毒株和制备灭活疫苗；所述灭活疫苗免疫健康产蛋鸡群得到高免蛋，分离蛋 黄后经酸化处理、辛酸处理、离心、板框过滤、灭活、超滤、配液、过滤除菌后得到鸭病毒性肝 炎精制蛋黄抗体。 本专利技术的有益效果在于： 1)将鸭病毒性肝炎1型和鸭病毒性肝炎3型毒株单独做苗，分开免疫健康产蛋鸡 群，避免了两种抗原在同一机体中的免疫应答竞争影响的因素，每种血清型的抗体效价单 独控制，避免因一种血清型抗体效价不高时，再次免疫二联疫苗对另一种血清型抗原造成 免疫耐受的后果。 2)通过辛酸处理、离心、板框过滤、灭活等环节处理，该技术非常适合大规模生产， 得到了无类脂物质、无任何外源微生物污染的高效价精制蛋黄抗体。 3)中和效价均高于1:350,中和效价远高于现有的鸭病毒性肝炎二价精制蛋黄抗 体。 4)鸭病毒性肝炎1型和鸭病毒性肝炎3型疫苗分开免疫鸡群，单独生产制备抗体， 可以针对特定鸭病毒性肝炎血清型的流行区域制备同种血清型的抗体，避免了非特异性抗 体的浪费，降低了养殖户的抗体使用成本。【附图说明】 图1是本专利技术实施例的鸭肝炎病毒1型引物扩增结果示意图； 图2是本专利技术实施例的鸭肝炎病毒3型引物扩增结果示意图。 图1中，M :MarkerDL2000 ;1 :已知1型鸭肝炎病毒；2 :待检鸭肝炎肝脏病料；3 :已 知3型鸭肝炎肝脏病料；4 :鸭瘟病毒；5 :番鸭细小病毒； 图2中，M :MarkerDL2000 ;1 :已知3型鸭肝炎病毒；2 :待检鸭肝炎肝脏病料；3 :已 知1型鸭肝炎肝脏病料；4 :鸭瘟病毒；5 :番鸭细小病毒。【具体实施方式】 以下优选实施例，对本专利技术作详细描述，以使本领域的技术人员能够实践它们。 下面对本专利技术做详细描述。 ，包括以下步骤：分离鸭病毒性肝炎毒株 和制备灭活疫苗；所述灭活疫苗免疫健康产蛋鸡群得到高免蛋，分离蛋黄后经酸化处理、辛 酸处理、离心、板框过滤、灭活、超滤、配液、过滤除菌后得到鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体。 其中，以下菌株保藏于中国典型培养物保藏中心： 名称鸭肝炎病毒 SD-1 株 Duck hepatitis virus ; 保藏编号 CCTCC V201440 ; 保藏日期2014年11月2日； 简称为鸭肝炎病毒SD-I株； 保藏地址中国.武汉.武汉大学。 名称鸭肝炎病毒 SD-3 株 Duck hepatitis virus ; 保藏编号 CCTCC V201441 ; 保藏日期2014年11月2日； 简称为鸭肝炎病毒SD-3株； 保藏地址中国.武汉.武汉大学。 本专利技术所述鸭病毒性肝炎毒株为鸭病毒性肝炎1型（DHAV-I)和鸭病毒性肝炎3 型（DHAV-3)毒株中的一种或两种；所述鸭病毒性肝炎1型的所述免疫原性较好的血清型病 毒为鸭肝炎病毒SD-I株CCTCC V201440 ;所述鸭病毒性肝炎3型的所述免疫原性较好的血 清型病毒为鸭肝炎病毒SD-3株CCTCC V201441。 所述步骤具体为： 一、免疫抗原（疫苗）的制备 I. 1分离鸭病毒性肝炎毒株和制备灭活疫苗：选取鸭病毒性肝炎毒株接种鸭胚， 分离筛选到免疫原性较好的血清型的病毒，将获得的免疫原性较好的血清型的病毒用灭菌 生理盐水做1:1000倍稀释后，绒毛尿囊腔接种11日龄非免疫鸭胚，每胚0. 2ml，置37? 38°C继续孵育。24h内死亡的鸭胚弃去，鸭胚死亡时间稳定在72?120小时，死亡胚胎眼观 病变为全身皮肤和皮下充血、出血，胚肝呈红黄色，肿大并有针头大小出血点和坏死灶，死 亡时间较长的胚胎绒尿液显浅绿色。死亡的鸭胚置于4°C冰箱冷藏过夜，无菌收取尿囊液和 胚体，胚体用组织匀浆机处理后，反复冻融3次，4°C，5000r/min离心取上清液与尿囊液混 合，病毒液4倍浓缩，浓缩后取出部分待检验及测定毒价，剩余的-20°C保存待用做制备疫 苗。 其中，所述鸭病毒性肝炎毒株为鸭病毒性肝炎1型和鸭病毒性肝炎3型毒株中的 一种或两种；所述鸭病毒性肝炎1型的所述免疫原性较好的血清型病毒为鸭肝炎病毒SD-I 株CCTCC V201440 ;所述鸭病毒性肝炎3型的所述免疫原性较好的血清型病毒为鸭肝炎病 毒 SD-3 株 CCTCC V201441。 1. 2免疫原性较好的血清型病毒液纯净性检验 将浓缩后的病毒液按照现行《中国兽药典》三部附录进行无菌、支原体、外源病毒 检验，均为阴性，证明所得的病毒液均无菌、无支原体、无外源病毒污染。 1. 3免疫原性较好的血清型病毒液病毒含量测定 将浓缩后的病毒液用灭菌生理盐水作10倍系列稀释，取KT4?KT8 5个稀释度， 绒毛尿囊腔接种11日龄非免疫鸭胚5个，每胚0. lml。置37?38°C继续孵育，观察24? 96小时，24小时内死亡鸭胚弃去，记录24?96小时死亡鸡胚数量，计算ELD 5tl含量至少为 IO6.86ELD50Ail。 1. 4免疫原性较好的血清型病毒液灭活 将病毒液中加入甲醛溶液，使其终浓度为0. 1 %，密闭后充分振摇混匀，置37°C温 箱灭活48小时，期间每6小时振摇一次。 1. 5灭活检验 对灭活液抽样并接种11日龄非免疫鸭胚，抗原接种5枚，连续观察7天，鸭胚全部 健活。 1. 6疫苗乳化 ①油相制备：10号白油94份，司本-806份，硬脂酸铝2%。硬酯酸铝与少量白油 混合加热熔化后，补足白油，加入司本-80,充分搅拌，分装。116°C，30分钟灭菌，10°C冷藏 备用。 ②水相制备：按抗原96份，吐温-804份配制。吐温-80加入带玻璃珠的瓶中灭 菌。吐温-80先与少量抗原混和，然后与大量抗原混合，充分振摇，使吐温-80完全溶解。 ③乳化：按油相3份，水相1份配制。取油相加入高速乳化机缸内，慢速搅拌，徐 徐加入水相，加毕高速乳化2?5分钟。取少量乳化液低于冷清水中，不扩散为乳化完成。 L 7疫苗检验 ①物理性状：油乳佐剂抗原应为乳白色带粘本文档来自技高网...
【技术保护点】
鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：分离鸭病毒性肝炎毒株和制备灭活疫苗；所述灭活疫苗免疫无病产蛋鸡群得到高免蛋，分离蛋黄后经酸化处理、辛酸处理、离心、板框过滤、灭活、超滤、配液、过滤除菌后得到鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李朝阳，赵锋祥，乔彦良，吴庆海，薛希娟，
申请(专利权)人：山东信得科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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