一种治疗乙型病毒性肝炎的新型药物组合制造技术

本技术发明专利技术涉及一种新型药物组合，具体涉及甘草酸二铵在提高恩替卡韦治疗乙型肝炎疗效中的应用。药代结果显示分别在整体动物和细胞/亚细胞水平，甘草酸/甘草次酸增加恩替卡韦血浆/肝组织内的药物浓度和肝细胞/亚细胞内药物摄取量。药效学结果也发现在HBV转染的体外细胞模型及HBV小鼠模型上甘草酸/甘草次酸增加恩替卡韦抗病毒药效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型药物组合物，具体涉及中药甘草的主要成分甘草酸在提高核苷类药物恩替卡韦治疗乙型肝炎疗效中的应用。
技术介绍
乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(HBV)引起、以肝脏炎性病变为主，并可引起多器官损害的一种传染性疾病，慢性乙肝甚至可导致肝硬化或肝癌。目前，乙肝广泛流行于世界各国，发病率逐年提高，肝炎病毒携带者的数目也在不断增加，成为我国当前流行最为广泛、危害性最严重的疾病之一。由于乙肝病毒变异迅速，容易造成抗乙肝病毒药物的耐药；同时，由于乙肝患者病程长、用药时间长，很容易导致肝损伤。目前有关乙型肝炎的治疗方法主要是抗病毒治疗，抑制HBV的持续复制以达到延缓疾病进展的目的。恩替卡韦(Entecavir，ETV)为抗乙肝病毒的一线药物，抑制HBV多聚酶的起始、逆转录及DNA正链合成过程，具有较强的抗病毒效果，且副作用少，病毒变异力低，已经被广泛应用于慢性乙型肝炎的治疗。甘草酸是中药甘草有效成分的提取物，具有一定的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用。临床数据显示，当恩替卡韦与甘草酸二铵(Diammoniumglycyrrhizinate，GLN)联合使用时，具有更强的病毒性肝炎治疗作用，同时改善肝功能及延缓肝纤维化发生。恩替卡韦作为抗病毒类药物，甘草酸二铵作为保肝药物，因研究两药联合应用机制成为进一步开发病毒性肝炎治疗药物组合的关键之一。甘草为豆科植物，性平味甘，具有补气益脾、和中缓急、调和诸药等功效。甘草酸为甘草<br>的主要成分，是一种五环三萜系列皂苷，可水解为甘草次酸(Glycyrrhetinicacid，GA)和两分子葡萄糖醛酸，具有诸多药理活性，包括抗炎、免疫调节、抗肝损伤等作用。其结构式如下：专利CN200610018367.1公开了甘草酸或甘草次酸在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。甘草酸或甘草次酸可通过抑制炎症反应及抗氧化作用达到抗炎症性肠病的作用。专利CN200510045377.X公开了一种主要用于肝脏疾病的药物组合物，由枸杞子、当归、甘草酸制成，共同发挥治疗病毒性肝炎、药物性肝损伤、脂肪肝等功效。专利CN98805037.4公开了含有甘草酸和至少一种具有抗病毒活性的蛋白质的抗病毒药物组合物。
技术实现思路
本专利技术目的是为乙肝疾病治疗提供甘草酸二铵-恩替卡韦这一新型药物组合，即药物联用相对于恩替卡韦自身具有增效作用。药代结果显示分别在整体动物和细胞/亚细胞水平，甘草酸/甘草次酸增加恩替卡韦血浆/肝组织内的药物浓度和肝细胞/亚细胞内药物摄取量。药效学结果也发现在HBV转染的体外细胞模型及HBV小鼠模型上甘草酸/甘草次酸增加恩替卡韦抗病毒药效。本专利技术的研究方案是(1)在整体动物水平考察甘草酸二铵-恩替卡韦联合用药后，恩替卡韦的血浆药代动力学及组织内浓度的变化，从整体动物角度判断甘草酸二铵-恩替卡韦联用增效的可能机制。(2)运用肝细胞模型，考察恩替卡韦在肝细胞内的摄取、亚细胞分布等细胞药代动力学行为，以及甘草次酸对上述过程的影响。(3)运用HBV转染的HepG2215细胞模型，考察药物联用后，细胞上清病毒拷贝数与单用组相比是否降低。(4)运用HBV转基因小鼠模型，考察长期药物联用后，小鼠血浆中HBV病毒拷贝数与单用组相比是否降低。本专利技术的研究结果主要包括联用甘草酸二铵对恩替卡韦的血浆药代动力学过程无显著影响，但恩替卡韦在肝脏组织内的分布量增加；联用甘草次酸后恩替卡韦在细胞核及胞浆内的分布量均得到提高；体外HepG2215细胞模型及HBV转基因小鼠模型中的病毒拷贝指标，联用组与单用组相比均出现降低。附图说明图1：联用甘草酸二铵后恩替卡韦大鼠药代动力学变化图2：联用甘草酸二铵后恩替卡韦大鼠组织分布量变化图3：甘草次酸对恩替卡韦肝细胞摄取的影响图4：联用甘草次酸后恩替卡韦亚细胞分布变化图5：联用甘草次酸对恩替卡韦在HepG2215模型上病毒抑制IC50的影响图6：长期联用甘草酸二铵对恩替卡韦抑制HBV小鼠病毒复制过程的影响具体实施方式实施例1：测定单次及多次联用甘草酸二铵后恩替卡韦大鼠血浆药物浓度主要步骤如下：雄性SD大鼠20只，按体重随机分配成分为四组，每组5只。1.单次联用给药：大鼠灌胃(i.g.)给予0.09mg/kgETV(controlgroup)，100mg/kgGLN+0.09mg/kgETV(testgroup)2.长期联用给药：大鼠连续10天，每天灌胃(i.g.)给予0.09mg/kgETV(controlgroup)，100mg/kgGLN+0.09mg/kgETV(testgroup)，第11天正常给药GLN后两组均灌胃给予0.09mg/kgETV。实验过程中所用采血管预先按1μl/20μl(v/v，抗凝剂/全血)比例加入肝素作为血浆抗凝剂。眼眶静脉丛采集给药前及给药后0.167，0.5，1，1.5，2，4，8，24h静脉血200μl至采血管中，以8000rpm离心5min后转移上层血浆，处理后经LC-MS/MS测定各组血浆中的恩替卡韦经时浓度并计算主要药代动力学参数，结果如下：表1.长、短期联用甘草酸二铵后恩替卡韦主要药代动力学参数实施例2：测定单次及多次联用甘草酸二铵后恩替卡韦大鼠组织中的药物浓度主要步骤如下：雄性SD大鼠60只，按体重随机分配成分为十二组，每组5只。1.单次联用给药：大鼠灌胃(i.g.)给予100mg/kgGLN6h后，灌胃(i.g.)给予0.09mg/kgETV(testgroup)，或直接灌胃(i.g.)给予0.09mg/kgETV(controlgroup)，再经过1，2，4h后将大鼠股动脉放血处死，并取组织。2.长期联用给药：大鼠连续10天，每天灌胃(i.g.)给予100mg/kgGLN6h后，灌胃(i.g.)给予0.09mg/kgETV(testgroup)，或直接灌胃(i.g.)给予0.09mg/kgETV(controlgroup)，第11天正常给药GLN后两组均灌胃给予0.09mg/kgETV。实验过程中所用采血管预先按1μl/20μl(v/v，抗凝剂/全血)比例加入肝素作为血浆抗凝剂，收集全血以8000rpm离心5min后转移上层血浆，测定各组血浆及组织中的恩替卡韦浓度。实施例3：测定甘草次酸对恩替卡韦肝细胞摄取的影响主要步骤如下：在37℃，含5％CO2的环境中，选用HepG2细胞培养于高糖DMEM培养基中，含10％胎牛血清(FBS)，青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml，当细胞达90％本文档来自技高网...

【技术保护点】
提供一种治疗乙型病毒性肝炎的药物组合物，其特征在于：运用药代药效的研究手段，从整体动物和细胞/亚细胞两个水平，阐明恩替卡韦与甘草酸二铵药物联用增效机制。

【技术特征摘要】
1.提供一种治疗乙型病毒性肝炎的药物组合物，其特征在于：运用药代药效的研究手段，从
整体动物和细胞/亚细胞两个水平，阐明恩替卡韦与甘草酸二铵药物联用增效机制。
2.如权利要求1所述的对治疗乙型病毒性肝炎的药物组合联用增效的机制研究，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：王广基，张经纬，陈倩莹，周芳，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32