丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应用。所述的丹参单体化合物为丹参酚酸B和丹参酮IIA磺酸钠中的至少一种，所述的丹参酚酸B和丹参酮IIA的结构式如式Ⅰ和式Ⅱ所示：本发明专利技术还提供了一种增强iPS细胞生物学特性药物。本发明专利技术中通过不同浓度的丹参单体成分预处理iPS，结果显示，丹参酮ⅡA磺酸钠与丹参酚酸B均能促进多能诱导干细胞增殖，且丹参酚酸B在该方面的能力更为显著。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，具体涉及一种丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应用。
技术介绍
丹参系唇形科多年生草本植物，丹参常配伍于治疗心脑血管疾病如冠心病、脑梗死的处方中。其对血管内皮细胞分泌功能有保护作用、显著抑制动脉硬化，降低血清总胆固醇、抗心室肥厚、抗氧化、抗心律失常等作用。且心血管患者常合并其他疾病，而丹参还有抗炎、抗血小板、抗凝、抗血栓形成的作用，能有效改善患者的预后。因此，丹参在心血管疾病防治方面具有广阔的应用前景。目前研究证实，诱导性多能干细胞(iPS)是通过重编程体细胞获得的具有与胚胎干细胞相似的高度增殖和多向分化潜力的一种多能干细胞，是修复坏死心肌的重要候选干细胞。哺乳动物心肌细胞受损(如缺血性心脏病、动脉粥样硬化、高血压等)后不能再生，限制了心肌的自我修复功能，而iPS细胞类似胚胎干细胞，在体外已成功地被分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等，因此，iPS细胞将是未来可以用于治疗神经系统疾病、心血管疾病、生殖疾病等人类疾病的一种有效的干预手段。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的首要目的在于提供一种丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种增强iPS细胞生物学特性药物。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应用，所述的丹参<br>单体化合物为丹参酚酸B和丹参酮IIA磺酸钠中的至少一种，所述的丹参酚酸B和丹参酮IIA的结构式如式Ⅰ和式Ⅱ所示：所述的丹参酚酸B的有效浓度优选为2.5×10-5mol/L；所述的丹参酮ⅡA磺酸钠的有效浓度优选为150μmol/L；所述的丹参单体化合物优选为丹参酚酸B；一种增强iPS细胞生物学特性药物，包含上述丹参酚酸B、丹参酮IIA磺酸钠或其药学上可接受的盐，以及丹参酚酸B、丹参酮IIA或其药学上可接受的盐的溶剂化合物、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物；所述的增强iPS细胞生物学特性药物中还包含药用辅料或其它可配伍的药物；所述的药用辅料是指常规的药用赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂等；所述的增强iPS细胞生物学特性药物包括多种临床药物剂型，如片剂、注射液、脂质体纳米粒、控释剂等；本专利技术的原理：本专利技术通过适当iPS皮下注射裸鼠后，可见iPS细胞能分化三个胚层，然后用不同浓度的丹参单体成分预处理iPS，观察了不同浓度的丹参单体成分的生物效应，通过QPCR方法检测不同丹参单体成分预处理iPS细胞后的OCT-4、C-myc的表达，结果表明，丹参酚酸B和丹参酮IIA磺酸钠均能显著提高iPS的分化增殖能力，且丹参酚酸B在该方面的效果更为显著。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术中通过不同浓度的丹参单体成分预处理iPS，比较了各浓度的丹参单体成分对iPS的生物活性的影响，结果显示，丹参酮ⅡA磺酸钠与丹参酚酸B均能促进多能诱导干细胞增殖；其中，丹参酚酸B能够促进体外培养的iPS细胞的增殖，减少其凋亡，并能提高干细胞多向分化潜能性相关基因(Oct4和c-myc基因)的表达，从而提高iPS细胞分化能力。(2)本专利技术提供了一种增强iPS细胞生物学特性药物，该药物可以促进体外培养的iPS细胞的增殖，减少其凋亡，提高iPS细胞分化能力，可以用于治疗神经系统疾病、心血管疾病(如缺血性心脏病、动脉粥样硬化、高血压等)、生殖疾病等人类疾病。附图说明图1是iPS细胞集落的形态图；其中，A：光学显微镜下正常培养的iPS细胞集落(40×)；B：荧光显微镜下的正常iPS细胞集落(40×)；C：分化的iPS细胞形态(40×)。图2是拟胚体的形态图；其中，A：光学显微镜下的拟胚体(40×)；B；荧光显微镜下的拟胚体(40×)。图3是畸胎瘤中的三个胚层组织HE染色后的形态图；其中，A：内胚层来源的纤毛柱状上皮；B：外胚层组织来源的菊花团样原始神经管；C：中胚层组织来源的软骨岛。图4是丹参酮ⅡA磺酸钠预处理iPS细胞的时间增殖曲线图。图5是丹参酮ⅡA预处理iPS细胞后的时间增殖曲线图。图6是丹参酚酸B预处理iPS细胞后的时间增殖曲线图。图7是丹参酚酸B预处理iPS细胞后OCT-4、C-myc基因表达结果分析图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。本专利技术的实施例中，原料丹参为南京柯菲医药有限公司赠与，其它试剂均为市售试剂，分析纯，未纯化；采用HE染色染色检测iPS的分化状况；westernblot方法检测OCT-4、C-myc的表达；实施例1制备iPS细胞(1)滋养层(MEF)的制备：0.1％(体积分数)的明胶加入T25培养瓶，摇匀覆盖即可，于37℃细胞培养箱静置20min后将其吸除，加入5～6mL预热37℃的MEF培养液，与此同时将小鼠胚胎成纤维细胞(购自上海中科院细胞库)从液氮中快速取出，置于37℃水浴中快速融解并立即用体积分数为75％的酒精擦拭冻存管后拿到超净台内，将冻存管内的细胞悬液转移至含MEF培养液的15mL离心管内，以1000rpm离心5min，弃上清液重悬后加入到T25培养瓶中，放置到CO2恒温培养箱中，培养24h后得到滋养层即可加入iPS细胞；(2)iPS细胞的培养以及传代：步骤(1)中培养24h后得到的滋养层，4倍显微镜下可见已经均匀铺满T25培养瓶，此时可迅速从液氮中取出iPS细胞(购自中科院上海生科院生化细胞所和中科院上海生科院生化细胞所干细胞平台)冻存管，复苏过程类似小鼠胚胎成纤维细胞，将复苏的iPS细胞直接传入MEF铺板的T25培养瓶，置于37℃细胞培养箱，每日换液并且观察细胞集落形态的变化(图1)。待细胞集落长到合适大小及时传代，PBS(不含钙镁离子)轻轻冲洗一遍后加入0.25％(体积分数)胰酶(含EDTA)消化，小鼠iPS细胞培养液终止消化，以1000rpm离心5min，弃上清加培养液吹打制备成单细胞悬液。实施例2制备丹参单体成分(1)采用体积分数为95％的乙醇提取丹参(1kg)，获得总提物76g；将总提物混悬于500mL水中，用环己烷100mL萃取两次，弃去环己烷层。接着用乙酸乙酯100mL萃取两次，用旋转蒸发仪减压浓缩，获得乙酸乙酯萃取部位；进一步用硅胶柱层析的方法对乙酸乙酯萃取部位进行分离，采用环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，收集环己烷-乙酸乙酯20本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应用，其特征在于：所述的丹参单体化合物为丹参酚酸B和丹参酮IIA磺酸钠中的至少一种，所述的丹参酚酸B和丹参酮IIA的结构式如式Ⅰ和式Ⅱ所示：

【技术特征摘要】
1.一种丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应用，其特征在于：所
述的丹参单体化合物为丹参酚酸B和丹参酮IIA磺酸钠中的至少一种，所述的丹参酚酸B和
丹参酮IIA的结构式如式Ⅰ和式Ⅱ所示：
2.根据权利要求1所述的丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的应
用，其特征在于：
所述的丹参酚酸B的有效浓度为2.5×10-5mol/L；
所述的丹参酮ⅡA磺酸钠的有效浓度为150μmol/L。
3.根据权利要求1或2所述的丹参单体化合物在制备增强iPS细胞生物学特性产品中的
应用，其特征在于：
所述的丹参单体化合物为丹参酚酸B。
4.一种增强iPS细胞生物学特性药物，其特征在于：包含权利要求1～3任...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭军，江仁望，江灿，郑栋，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44