【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术，发现一组含有保守序列的肽段，及其在药物研发中的应用，具体涉及一组肽段及其在筛选评价fxr配体中的应用。
技术介绍
1、非酒精性脂肪性肝炎(nash)是一种严重的非酒精性脂肪肝，以肝脏炎症和纤维化为特征，可发展为肝硬化、肝衰竭和肝癌。法尼醇受体x(fxr)是核受体超家族的成员之一，fxr在调控胆汁酸稳态、糖脂代谢、炎症等生理过程中发挥重要作用，是nafld/nash治疗的重要靶点。fxr配体类化合物被广泛研究用于治疗肝脏代谢疾病。目前，已经有很多fxr配体被发现，其内源性配体就是体内产生的各类胆汁酸。外源性fxr激动剂可根据其化学结构分为甾体类和非甾体类，代表性的fxr激动剂有以下几种：obeticholic acid(oca)、tropifexor(lnj-452)、cilofexor(gs-9674)、edp-305，fexaramine(fex)是一种肠道限制性fxr激动剂。udca是第一个走上临床的fxr配体类药物，被用作治疗原发性胆汁性肝硬化(pbc)患者的一线治疗药物。2016年奥贝胆酸获欧盟批准上市，与udca联用或单药用于治疗udca响应不佳的pbc患者。但在nash治疗中，目前仍没有一款针对nash适应症的药物上市。奥贝胆酸是全球第一个进入iii期临床的nash药物，但其药效不够显著，且瘙痒和肝毒性等副作用严重，没有通过fda审批。同为fxr激动剂的tropifexor、cilofexor和edp305等也开始向临床探索。发掘新型fxr激动剂对治疗nash、pbc等肝病具有重要意义。>
2、作为一个转录因子，fxr与转录辅因子协同调控对下游通路的转录。fxr通常与视黄醇x受体(rxr)结合形成异二聚体调控转录，在没有激动剂存在时，fxr/rxr一般与辅抑制因子结合抑制转录。当激动剂结合到fxr lbd区域后，fxr羧基末端结构域发生构象转变，通过招募一系列辅激活因子到靶基因启动子区域来激活转录。目前认为辅激活因子通常通过nr作用域又称nr box，特征为含有一个或多个保守lxxll序列与nr结合，与核受体lbd段结合后发挥转录激活功能。
3、转录辅激活因子mediator是一种多蛋白复合物，其成员包括mediator 1(med1)、med4、med6、med7、med8、med9、med10、med11、med12、med13、med14、med15、med16、med17、med18、med19、med20、med21、med22、med23、med24、med25、med26、med27、med28、med29。mediator参与fxr等多个核受体的转录激活。然而具体是哪个mediator成员通过直接与fxr蛋白互作，进而转录激活fxr，尚且未知。除mediator外，还有其他多种共转录因子参与fxr的转录激活，如src-1、src-2、pgc-1alpha等。
4、常用于筛选fxr激动剂的方法有报告基因系统、表面等离子共振( surfaceplasmon resonance，简称spr)技术、alphascreen和时间分辨荧光共振能量转移(tr-fret)等，这些方法都可用于高通量筛选。tr-fret同时具有时间分辨荧光(trf)和的共振能量转移(fret)的优势。fret技术是当供体荧光分子的发射光谱和受体荧光分子的激发光谱重叠的时候，可以将供体分子的能量共振转移到受体分子上的技术。供体和受体之间的能量转移取决于物理接近度(＜10nm)，当大于此距离时能量转移效率会大幅度降低。因此，当两个分子相互作用时，其距离缩短，因而可以完成fret的配对；当在溶液中的两个分子相距较远，超过fret的距离要求时，无法完成fret配对，不会发生fret。时间分辨荧光(trf)检测技术引入了镧系(如铕等)元素，由于镧系元素的独特性质，使得荧光寿命大幅度延长。通过引入延迟检测，trf可以利用目标荧光和背景荧光寿命的差异选择性检测具有长荧光寿命的特异荧光。
5、目前市面上已有的fxr的tr-fret试剂盒是thermo fisher的lanthascreentm tr-fret farnesoid x receptor coactivatorassay试剂盒，该试剂盒的关键成分包括fxr-lbd蛋白和src2-2辅因子肽段，通过考察化合物促进fxr和src2-2结合的能力来鉴定潜在的fxr激动剂。但该试剂盒存在货期长，且价格昂贵的问题，并且不同类型的fxr激动剂对辅因子的募集存在选择性，仅用单一的src2-2肽段筛选并不能够全面覆盖到所有fxr激动剂。
技术实现思路
1、专利技术目的：为解决现有技术的不足，本专利技术提供一系列用于高通量筛选fxr配体的新型辅因子肽段，这些肽段也可用于预测在不同配体存在时，fxr募集不同辅因子的能力。
2、技术方案：一组辅因子肽段，所述肽段来源于fxr的辅激活因子，序列中包含lxxll基序；其中l指亮氨酸，x为任意氨基酸。
3、所述的肽段，肽段序列如seq id no.1～seq id no.7所示。
4、 序号 序列 seq id no.1 vsqnpiltsllqitgk seq id no.2 nhpmlmnllkdnpak seq id no.3 qdilrmllslqpvlk seq id no.4 ayselmvltdllprk seq id no.5 ilthsalnilllpspk seq id no.6 rallsalhwllrctak seq id no.7 aeepsllkklllqpk
5、一组辅因子肽段，将所述的肽段的n端或者c端连接荧光基团。
6、所述的肽段，所述荧光基团包括fitc、5-fam、alexa fluor 488tm。
7、所述的肽段在筛选或评价fxr配体的应用。
8、所述的应用，所述fxr配体包括fxr激动剂、fxr拮本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组辅因子肽段，其特征在于，所述肽段来源于FXR的辅激活因子，序列中包含LXXLL基序；其中L指亮氨酸，X为任意氨基酸。
2.根据权利要求1所述的肽段，其特征在于，肽段序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.7所示。
3.一组辅因子肽段，其特征在于，将权利要求1所述的肽段的N端或者C端连接荧光基团。
4.根据权利要求3所述的肽段，其特征在于，所述荧光基团包括FITC、5-FAM、AlexaFluor 488TM。
5.权利要求1-4所述的肽段在筛选或评价FXR配体的应用。
6.一种荧光探针，其特征在于，将权利要求1所述的肽段的N端或者C端连接荧光基团。
7.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-4任一项所述的肽段中的一种或多种。
8.权利要求7所述的试剂盒在筛选或评价FXR配体中的应用。
9.根据权利要求5或8所述的应用，其特征在于，所述FXR配体包括FXR激动剂、FXR拮抗剂。
10.一种筛选FXR配体的方法，其特征在于，将权利要求3所述的肽段与FXR蛋白
...【技术特征摘要】
1.一组辅因子肽段，其特征在于，所述肽段来源于fxr的辅激活因子，序列中包含lxxll基序；其中l指亮氨酸，x为任意氨基酸。
2.根据权利要求1所述的肽段，其特征在于，肽段序列如seq id no.1～seq id no.7所示。
3.一组辅因子肽段，其特征在于，将权利要求1所述的肽段的n端或者c端连接荧光基团。
4.根据权利要求3所述的肽段，其特征在于，所述荧光基团包括fitc、5-fam、alexafluor 488tm。
5.权利要求1-4所述的肽段在筛选或评价fxr配体的应用。
【专利技术属性】
技术研发人员：郝海平，王洪，敖澜嘉，朱晓钗，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：
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