【技术实现步骤摘要】
: 本专利技术涉及生物材料
，具体涉及一种聚氨酯材料界面特异结合的短肽及其筛选方法。
技术介绍
: 噬菌体随机肽库展示技术是将编码外源肽的DNA序列插入噬菌体表面编码外壳蛋白的基因中，使大量的随机肽段以融合形式表达在噬菌体表面。在该技术基础上通过反复的结合-洗脱-单克隆扩增可定向筛选与目标蛋白质、细胞、组织、材料等具有特异性亲和作用的多肽。聚氨酯全称为聚氨基甲酸酯，是主链上含有重复氨基甲酸酯基团的大分子化合物的统称，它是由有机二异氰酸酯或多异氰酸酯与二羟基或多羟基化合物加聚而成。聚氨酯涂层一般具有高强度、高耐磨和耐溶剂等特点，可以直接牢固地附着在各种有机物或金属材料表面。因此，目前已经广泛用于家具涂料、建材涂料、汽车涂料和纺织品等领域。上世纪90年代以来，以聚氨酯材料为载体的固定化酶报道逐渐增多，根据形状差异可以将其分为聚氨酯膜、微球、纤维和泡沫状固定化酶，主要应用在生物合成催化剂和生物降解有毒化合物等领域。聚氨酯前体材料中由于其自身包含能与酶分子直接反应的活性异氰酸根基团，在其聚合过程中也能以共价结合和包埋的形式固定酶分子，因而具有热稳定...
【技术保护点】
聚氨酯界面特异性亲和多肽，其特征在于它包含VHWDFRQWWQPS特异性氨基酸序列的亲和肽。
【技术特征摘要】
1.聚氨酯界面特异性亲和多肽，其特征在于它包含VHWDFRQffffQPS特异性氨基酸序列的亲和肽。2.聚氨酯界面特异性亲和多肽的筛选方法，其特征在于它的筛选方法为:分别以水基聚氨酯和溶剂基聚氨酯涂层材料为靶界面，利用噬菌体展示技术筛选与靶界面特异亲和的肽，包括噬菌体12肽库的亲和筛选，噬菌体克隆的ELISA鉴定，最后噬菌体阳性克隆DNA的制备及序列测定。3.根据权利要求2所述的聚氨酯界面特异性亲和多肽的筛选方法，其特征在于它的具体筛选方法为: (一)、噬菌体12肽库的亲和筛选 (1)水基聚氨酯涂层的制备:将3mL脂肪族水基聚氨酯TO-116加入细胞培养皿，水平静置室温24小时固化，之后置于70 0C烘箱内进一步固化4小时取出待用。4.溶剂基聚氨酯涂层的制备:聚丙烯酸树脂DesmophenA870和聚异氰酸树脂Desmodur N3600,称取2.1 g聚丙烯酸树脂Desmophen A870于20 mL玻璃瓶中，再加入0.5mL乙酸正丁酯,强力搅拌1500 rpm、l分钟,加入0.8 g聚异氰酸树脂Desmodur N3600,继续搅拌I分钟，将混合物转移加入至水平放置的细胞培养皿中，将涂层静置于通风处内10分钟后放入70 0C烘箱，在该温度下放置4小时使涂层聚合完全取出待用； (2)亲和筛选:加入含体积比0.1% Tween-20的TBST I mL洗涤6次，于洁净面巾纸上扣干；以I mL TBST稀释10 uL原始文库液至4X10 10 pfu/mL，加入到清洗晾干后的含聚氨酯涂层的细胞培养皿内，室温温和摇动60 min，倾倒出培养皿内液体，扣干残余溶液，并用4 mL TBST清洗10次，每次清洗后倾倒去缓冲溶液并在洁净的面巾纸上扣干；向培养皿中加入I mL浓度为0.2 M的pH 2.2的甘氨酸.盐酸Glycine-HCl缓冲液，于室温温和摇动10 min，洗脱液吸入另一干净微量离心管中，然后再用150 uL pH 9.1的Tris-HCl中和上述洗脱液，测定少量洗脱液的滴度，剩余洗脱物根据常规M13方法进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨柳，张立挺，
申请(专利权)人：陕西天瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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