本发明专利技术提供了一种分离的且纯化的核酸序列，其编码针对B-细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)。本发明专利技术还提供了表达CAR的宿主细胞，诸如T-细胞或自然杀伤(NK)细胞，和用于破坏多发性骨髓瘤细胞的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向B-细胞成熟抗原的嵌合抗原受体 相关申请的夺叉引用 本专利申请要求2012年4月11日提交的美国临时专利申请号61/622,600的权 益，其通过引用整体并入本文。 电子递夺的材料通讨引用并入 通过引用整体并入本文的是，与本文一起提交并如下标识的计算机可读的核苷酸 /氨基酸序列表：一个42, 589字节的ASCII (文本）文件，名称为712361_ST25. TXT，创建 于2013年3月14日。 专利技术背景 多发性骨髓瘤（MM)是以克隆浆细胞的积累为特征的恶性肿瘤（参见，例如， Palumbo 等人，New England J. Med.，364 (11) : 1046-1060 (2011)，和 Lonial 等人，Clinical Cancer Res. ,17(6): 1264-1277 (2011))。MM的当前疗法经常造成缓解，但是几乎所有 的患者最终会复发和死亡（参见，例如，Lonial等人，出处同上，和Rajkumar, Nature Rev.Clinical 0ncol.，8(8):479_491(2011))。已经证实，同种异体造血干细胞移植 会诱导免疫介导的骨髓瘤细胞的消除；但是，该方案的毒性较高，且鲜有患者被治愈 (参见，例如，Lonial 等人，出处同上，和 Salit 等人，Clin. Lymphoma, Myeloma, and Leukemia, 11 (3) :247-252 (2011))。当前，MM尚不存在临床上有效的、FDA批准的单克隆抗 体或自体 T-细胞疗法（参见，例如，Richardson 等人，British J. Haematology, 154 (6): 7 45-754(2011)，和 Yi, Cancer Journal, 15(6):502-510(2009))。 经过遗传修饰以识别恶性肿瘤相关抗原的T-细胞的过继转移正在显示出作为 治疗癌症的新方案的希望（参见，例如，Morgan等人，Science, 314(5796) : 126-129(200 6) ;Brenner 等人，Current Opinion in Immunology, 22 (2) : 251-257 (2010) ；Rosenberg 等人，Nature Reviews Cancer, 8(4):299-308(2008) ,Kershaw 等人，Nature Reviews Immunology, 5 (12) : 928-940 (2005);和 Pule 等人，Nature Medicine, 14 (I I) : 1264-1270 (2 008))。可以将T-细胞遗传修饰成表达嵌合抗原受体（CAR)，所述嵌合抗原受体是包含抗原 识别部分和T-细胞活化结构域的融合蛋白（参见，例如，Kershaw等人，出处同上，Eshhar 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 (2) : 720-724 (1993)，和 Sadelain 等人，Curr. Opin. Immunol.，21 (2):215-223(2009))。 就B-细胞谱系恶性肿瘤而言，在开发利用抗-⑶19CAR的过继性T-细 胞方案中已经取得了广泛的进展（参见，例如，Jensen等人，Biology of Blood and Marrow Transplantation, 16 : 1245-1256 (2010) ；Kochenderf er 等 人，Blood, 116(20):4099-4102(2010) ;Porter 等人，The New England Journal of Medicine, 365(8):725-733(2011) ;Savoldo 等人，Journal of Clinical Investigatio n，121 (5):1822-1826(2011), Cooper 等人，Blood, 101(4):1637-1644(2003) ;Brentjens 等人，Nature Medicine，9(3):279_286(2003);和 Kalos 等人，Science Translational Medicine, 3 (95) :95ra73 (2011))。过继转移的、抗-CD19-CAR转导的T-细胞已经治 愈了小鼠中的白血病和淋巴瘤（参见，例如，Cheadle等人，Journal of Immunolog y，184(4):1885-1896(2010) ;Brentjens 等人，Clinical Cancer Research, 13(18Pt I) : 5426-5435 (2007);和 Kochenderfer 等人，Blood, 116 (19) : 3875-3886 (2010))。在早期 临床试验中，过继转移的、用抗-CD 19CAR转导的T-细胞会根除白血病和淋巴瘤患者中的 正常和恶性 B-细胞（参见，例如，Kochenderfer 等人，Blood, 116(20) :4099-4102(2010); Porter 等人，出处同上，Brentjens 等人，Blood, 118(18):4817-4828(2011);和 Kochenderfer等人，Blood, 2011年12月8日（印刷之前的电子出版物（2012))。但是，CD19 仅罕见地在多发性骨髓瘤的恶性浆细胞上表达（参见，例如，Gupta等人，Amer. J. Clin. Pathology, 132(5) :728-732(2009);和 Lin 等人，Amer. J. Clin. Pathology, 121(4) :482-48 8(2004))。 因而，仍然需要可以用在治疗多发性骨髓瘤的方法中的组合物。本专利技术提供了这 样的组合物和方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种分离的或纯化的编码嵌合抗原受体（CAR)的核酸序列，其中所 述CAR包含抗原识别部分和T-细胞活化部分，且其中所述抗原识别部分是针对B-细胞成 熟抗原（BCMA)。 【附图说明】 图IA和IB的图描绘的实验数据解释了跨多种人细胞类型的BCM的表达模式，如 使用定量PCR所确定的。将结果表示为每IO 5肌动蛋白cDNA拷贝的BCM cDNA拷贝的数 目。 图2A-2L的图描绘的实验数据解释了，细胞表面BCM表达在多发性骨髓瘤细胞系 上检测到，但是没有在其它类型的细胞上检测到，如在实施例1中所述。对于所有图，实线 代表用抗-BCM抗体染色，且虚线代表用同种型匹配的对照抗体染色。所有图均为在活细 胞上门控的。 图3A的简图描绘了一种编码抗-BCM CAR的核酸构建体。从N-端至C-端， 抗-BCM CAR包括：抗-BCM scFv、⑶8 α分子的铰链和跨膜区域、⑶28分子的细胞质部分 和⑶3 ζ分子的细胞质部分。 图3B-3D的图描绘的实验数据解释了，抗-bcmalCAR、抗-bcma2CAR和SP6CAR(在 实施例2中描述）在T-细胞的表面上表达。在未转导的（UT)细胞上发生微小抗-Fab染 色。所述图为在CD3+淋巴细胞上门控的。本文档来自技高网...
【技术保护点】
分离的或纯化的编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列，其中所述CAR包含抗原识别部分和T‑细胞活化部分，且其中所述抗原识别部分针对B‑细胞成熟抗原(BCMA)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.11 US 61/622,6001. 分离的或纯化的编码嵌合抗原受体（CAR)的核酸序列，其中所述CAR包含抗原识别 部分和T-细胞活化部分，且其中所述抗原识别部分针对B-细胞成熟抗原（BCMA)。2. 根据权利要求1所述的分离的或纯化的核酸序列，其中所述抗原识别部分包含针对 BCMA的单克隆抗体或其抗原结合部分。3. 根据权利要求2所述的分离的或纯化的核酸序列，其中所述抗原识别部分包含针对 BCMA的单克隆抗体的可变区。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的分离的或纯化的核酸序列，其中所述T-细胞活 化部分包含下述蛋白中的任一种的T-细胞信号传导结构域：人CD8-a蛋白、人CD28蛋白、 人⑶3-(蛋白、人FcRy蛋白、⑶27蛋白、0X40蛋白、人4-1BB蛋白、前述任一种的修饰形 式或前述的任意组合。5. 根据权利要求1-4中任一项所述的分离的或纯化的核酸序列，其包含SEQIDN0:1、 SEQIDN0:2 或SEQIDN0:3 的核酸序列。6. 分离的或纯化的CAR，其由权利要求1-5中任一项所述的核酸序列编码。7. 根据权利要求6所述的分离的或纯化的CAR，其包含SEQIDN0:4、SEQIDN0:5、SEQ IDN0:6、SEQIDN0:8、SEQIDN0:9、SEQIDNO: 10、SEQIDNO: 11 或SEQIDNO: 12 的氨 基酸序列。8. 载体，其包含权利要求1-5中任一项所述的分离的或纯化的核酸序列。9. 分离的宿主细胞，其表达权利要求1-5中任一项所述的核酸序列。10. 根据权利要求9所述的分离的宿主细胞，其表达...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·诺布尔·科亨德费尔，
申请(专利权)人：美国卫生和人力服务部，
类型：发明
国别省市：美国;US
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