本发明专利技术涉及一种食物过敏原的化学发光定量检测试剂盒，包括如下试剂：磁分离试剂：标记有食物过敏原的磁微粒悬浮液，所述的标记有食物过敏原的磁微粒的浓度为0.1~1.0mg/ml；酶标试剂：含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液，所述的含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体的浓度为0.5~1μg/ml。本发明专利技术通过采用标记有食物过敏原的磁微粒悬浮液和含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液制成的试剂盒，使得灵敏度达到0.008IU/ml，并且该试剂盒与其他免疫球蛋白的交叉反应率均小于0.04%，准确性好、精密度高，样本无需预稀释，操作简单省时，检测范围宽。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种食物过敏原的化学发光定量检测试剂盒，包括如下试剂：磁分离试剂：标记有食物过敏原的磁微粒悬浮液，所述的标记有食物过敏原的磁微粒的浓度为0.1~1.0mg/ml；酶标试剂：含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液，所述的含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体的浓度为0.5~1μg/ml。本专利技术通过采用标记有食物过敏原的磁微粒悬浮液和含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液制成的试剂盒，使得灵敏度达到0.008IU/ml，并且该试剂盒与其他免疫球蛋白的交叉反应率均小于0.04%，准确性好、精密度高，样本无需预稀释，操作简单省时，检测范围宽。【专利说明】
本专利技术涉及免疫分析领域，具体涉及。
技术介绍
化学发光技术在欧美发达国家比较成熟，以瑞士罗氏、美国雅培、美国贝克曼，德国西门子等进口品牌为代表，其质量可靠，性能稳定，主要集中在国内的三级以及部分二级医院开展，但由于各家试剂的产品特点及在国内的注册情况不同，一般三级医院会同时应用上述厂家不同系列的产品。过敏性疾病又称变态反应性疾病，是指机体通过食入、注入或接触某种含有致敏成分的物质(称为过敏原或变应原)后触发机体产生过量的免疫球蛋白E (IgE)，从而引起各种功能性障碍或组织损伤的一类疾病，常表现为支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮肤病等，有时会发生威胁生命的过敏性休克。过敏性疾病影响着全世界近1/4的人口，被世界卫生组织列为21世纪重点防治的三大疾病之一。实际上，很多的过敏性疾病，只要知道了过敏原，就可以采取简单的避免接触和谨慎使用的方式，防止过敏性疾病的发生，极大节省医疗开支，减少抗过敏类药物的使用。目前本项目的研究内容即是研发和优化与血清学抗原抗体反应原理相关的各种关键技术，从而提闻针对临床患者体内IgE抗体的检测敏感度和特异性，并在此基础上开发出灵敏、稳定的纳米磁微粒免疫诊断试剂，从而快速、准确地确定机体相关的过敏原类型。相对于体外诊断试剂，过敏原检测的主要的替代品是皮试。这是传统的检测方法，具有准确性高、简便易行的优点。但是，皮试具有受检者痛苦、危险性高、发作期不能检查、依赖主管判断的致命缺点，江苏省和北京市都有过患者因皮试死亡的病例。而且，目前全国没有经过药监局批准的合法皮试产品，所以其替代性较差。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高的食物过敏原的化学发光定量检测试剂盒。本专利技术所要解决的另一技术问题是提供上述试剂盒的制备方法。本专利技术所要解决的再一技术问题是提供采用上述试剂盒进行检测的检测方法。为解决以上技术问题，本专利技术采取如下技术方案:一种食物过敏原的化学发光定量检测试剂盒，包括如下试剂:磁分离试剂:标记有食物过敏原的磁微粒悬浮液，所述的标记有食物过敏原的磁微粒的浓度为0.1?1.0mg/ml ；酶标试剂:含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液，所述的含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体的浓度为0.5?I μ g/mlo优选地，所述的食物过敏原的纯度大于90%。优选地，所述的磁微粒具有超顺磁性，其直径为0.1?2 μ m，每克磁微粒表面的羧基含量不低于I毫摩尔。优选地，所述的食物过敏原与所述的磁微粒的官能团摩尔比为0.02?0.16:1。优选地，所述的抗人IgE抗体与所述的碱性磷酸酶的摩尔比为1:1?5。优选地，所述的碱性磷酸酶的纯度大于95%，比活性大于1000U/mg，浓度大于5mg/ml ο优选地,所述的抗人IgE抗体的纯度大于95%,浓度大于lmg/ml。上述食物过敏原的化学发光定量检测试剂盒的制备方法，磁分离试剂的制备方法为:将所述的磁微粒用0.04?0.06mol/L、pH4.5?5的2-吗啉乙磺酸缓冲液重悬；然后加入所述的食物过敏原，在15?40°C下混悬30?60分钟；然后再加入新鲜配置的8?12mg/ml的碳二亚胺水溶液,在15?40°C下混悬2?12h,其中所述的2-吗啉乙磺酸缓冲液与所述的碳二亚胺水溶液的体积比为10?20:1 ;磁分离，去上清，用含质量比为4.5?5.5%的牛血清白蛋白、pH为8?9.5、物质的量浓度为0.01?0.5mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液重悬到所述的标记有食物过敏原的磁微粒的浓度为0.1?1.0mg/ml,即得所述的磁分离试剂；酶标试剂的制备方法为:将抗人IgE抗体加入到浓度为8?12mg/ml的2_亚胺基硫烷盐酸盐偶联剂中，在15?40°C下静置18?25分钟，加入0.09?0.llmol/L的甘氨酸溶液，在15?40°C下静置4?5分钟，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后抗人IgE抗体，2?8°C保存备用；将碱性磷酸酶溶液加入到4?5mg/ml的4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液中，在15?40°C下静置25?35分钟，用G-25凝胶柱除盐，收集活化后碱性磷酸酶，2?8°C保存备用；将活化后的抗人IgE抗体和活化后的碱性磷酸酶混合，在2?8°C下静置12?24h，用Supperdex200凝胶纯化柱纯化，获得连接物浓溶液，在2?8°C保存备用；将所述的连接物浓溶液用含质量比为0.4?0.6%的牛血清白蛋白、pH为7.8?8.0、物质的量浓度为0.09?0.llmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液稀释到含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体的浓度为0.5?I μ g/ml,即得所述的酶标试剂；上述食物过敏原的化学发光定量检测试剂盒的检测方法，包括依次进行的以下步骤:步骤1:在检测管中加入待测样本原液，然后加入所述的磁分离试剂，混匀，在36?38°C下温育25?35分钟，其中所述的待测样本原液与所述的磁分离试剂的体积比为1:0.9 ?1.1 ;步骤2:添加磁场，使步骤I温育后的体系在磁场中沉降，去除上清液，经清洗液多次清洗后，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬；步骤3:向步骤2处理后的体系中加入所述的酶标试剂，混匀，在36?38°C下温育8?12分钟；步骤4:添加磁场，使步骤3温育后的磁微粒在磁场中沉降，去除上清液，经清洗液多次清洗后，去除磁场，震荡使磁微粒充分混悬；步骤5:添加磁场，使步骤4处理后的磁微粒在磁场中沉降，去除上清液，然后加入发光底物，去除磁场，充分混悬后检测5min内相对发光强度值。由于以上技术方案的实施，本专利技术与现有技术相比具有如下优点:本专利技术通过采用标记有食物过敏原的磁微粒悬浮液和含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液制成的试剂盒，使得灵敏度达到0.008IU/ml，并且该试剂盒与其他免疫球蛋白的交叉反应率均小于0.04%，准确性好、精密度高，样本无需预稀释，操作简单省时，检测范围宽。【专利附图】【附图说明】附图1为A，B点连点拟合曲线；附图2为实施例1制备得到的试剂盒的系统参比结果；附图3为测试校准品标准曲线。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细的说明，但本专利技术并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。 实施例1:试剂盒的制备(一)磁分离试剂的制备:材料与仪器:1、磁微粒:含羧基(COOH)活性集团，每克(g)磁微粒(干重)羧基含量为I毫摩尔(mmol),具有超顺磁性,直径为I μ m。2、食物过敏原:将冻干花生过敏原10本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种食物过敏原的化学发光定量检测试剂盒，其特征在于：包括如下试剂：磁分离试剂：标记有食物过敏原的磁微粒悬浮液，所述的标记有食物过敏原的磁微粒的浓度为0.1~1.0mg/ml；酶标试剂：含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体溶液，所述的含碱性磷酸酶标记的抗人IgE抗体的浓度为0.5~1μg/ml。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李庆春，孙婵，丁俊荣，宋孟杰，李永红，左云国，
申请(专利权)人：苏州浩欧博生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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