本发明专利技术涉及用于标定多重测定的方法，包括：将标定试剂加入到其上已固定多种捕获剂的固相，加入具有结合到所述标定试剂的能力的检测分子，检测结合的检测分子，从而建立标定曲线，其中所述标定试剂包含至少2种不同的结合分子，其中每种结合分子具有特异性结合到固定在固相上的捕获剂的能力和结合到检测分子的能力。还提供的是包含所述标定试剂的多重测定系统。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及用于标定多重测定的方法，包括：将标定试剂加入到其上已固定多种捕获剂的固相，加入具有结合到所述标定试剂的能力的检测分子，检测结合的检测分子，从而建立标定曲线，其中所述标定试剂包含至少2种不同的结合分子，其中每种结合分子具有特异性结合到固定在固相上的捕获剂的能力和结合到检测分子的能力。还提供的是包含所述标定试剂的多重测定系统。【专利说明】专利
本专利技术涉及多重测定领域，更具体地讲涉及多重测定系统、用于标定多重测定的方法和标定试剂(calibration reagent)。专利技术背景 在单重测定中，分析物是在分析程序中测量的化学组分。在免疫测定中，分析物或是抗体或是抗原。抗体是在血液中的、由免疫系统产生以防护外来物的蛋白质，而所述外来物是抗原。抗体与抗原结合。在分析前，对抗原或抗体进行标记，以便给出可测量信号。该标记可以是酶、放射性同位素或荧光素。得自免疫测定的信号可以是放射性或发光。这些信号通常称为响应。免疫测定涉及在标准化条件下进行的得自患者的临床样品与试剂(即化学溶液)之间的化学反应。结果是与样品中的分析物浓度相关的响应。在竞争性免疫测定中，分析物未经标记并与标记分子竞争。响应则是分析物浓度的减函数。在非竞争性免疫测定中，标记分子与分析物结合，响应是增函数。在这两种情况下，需要估计响应和浓度间的准确关系。这样的估计就称为标定。为了标定，需要已知浓度的样品。这些特定样品就称为标定物(calibrator)或标准品，通常提前制备。例如，可将具有已知高浓度的单个样品溶于水或动物血清中，以产生具有覆盖测量范围的一些指定较低浓度的标定物。当讨论用于标定的统计学设计时，指定的标定物浓度称为设计点。因为标定物是特别制备的，但样品不是，所以标定物和临床样品可以稍微不同的方式反应。通常，将具有未知浓度的一组临床样品与标定物在一次测定运行中一起进行测定。将标定曲线与标定物的响应拟合。该曲线可以是直线或某些其它单调函数。通过拟合的标定曲线，将临床样品的响应转化为浓度的估计值。估计样品浓度的这一方法称为反向预测(inverse prediction)。因为响应和浓度间的关系在每次测定运行中可能变化,所以每次测定运行通常都包括标定物，这样每次测定运行就可以分别进行标定。然而，在某些系统中，假设所述关系是稳定的，使得标定不必频繁进行，例如可每月一次，或当新批次试剂启用时才进行标定(Forkman J., Doctoral Thesis, Swedish University of AgriculturalSciences, Uppsala, 2008， ISSN 1652-6880， ISBN 978-91-86195-13-7)。使用单一的试剂反应混合物，在单一样品样本中检测多特异性分析物的多重测定，是本领域已知的。这些测定的一个重要组件是标定系统，其用于确定通过测定而测量的试剂(即抗体或生物标志物)的水平。经典地，使用多个任意单位来报告这些水平，这取决于测定系统所提供的定量测定程度。在定性测定中，根据所测响应信号水平，与预先指定的阳性阈值水平进行比较，报告血清样本中的靶向分子为阳性或阴性。在多种半定量测定中，同时报告了阳性/阴性结果、所测信号的量值(例如发光单位，毫伏)、等级评分、经调整或标准化的计数(来自经修改的评分系统)或最低对照的百分率(替代评分系统)。信号量值与测试血清中存在的分子的数量在等级次序(rank order)方面相关(但并非总是与之直接成比例)。在此我们将以本领域已知的3种不同测试类型的多重测定来举例说明: 1)特异性IgE的分析； 2)特异性IgG的分析；和 3)非免疫球蛋白生物标志物(抗原)的分析。特异性免疫球蛋白的通常的分析方法是I)特异性IgE分析，目的是检测变态反应/超敏感性，和2)特异性IgG分析，目的是检测例如自身免疫性疾病或感染性疾病。疾病相关抗原沉积到微阵列的限定位置。使这些抗原暴露给包含可结合到所选抗原的免疫球蛋白的患者样品。特异性免疫球蛋白用与该特异性免疫球蛋白相互作用的免疫球蛋白特异性试剂(报道分子)来检测，并且这样的相互作用可通过检测系统来分析。从而有可能检测对某抗原具有特异性的所有不同的免疫球蛋白。对于测试类型3)，非免疫球蛋白生物标志物(抗原)例如血清中的前列腺癌生物标志物的分析，具有结合到目标生物标志物的能力的分子沉积在微阵列的限定位置。沉积的分子可以是例如生物标志物-特异性抗体、酶或与目标生物标志物互补的其它分子。使沉积的分子暴露给包含可结合到所选沉积分子的生物标志物的患者样品。特异性生物标志物用与该特异性生物标志物相互作用的生物标志物特异性试剂(报道分子)来检测，并且这样的相互作用可通过检测系统来分析。例如，在特异性IgE检测领域中，W02002029415 Al描述了在样品中检测变应原-特异性免疫球蛋白的方法，以及体外诊断个体中的变态反应的方法。临床表现例如在暴露给特异性变应原之后发生哮喘、枯草热、特应性湿疹和胃肠道症状。对特异性和/或交叉反应性变应原组分的致敏模式的确定有助于更详细评价过敏患者。可将市售的IgE抗体免疫测定分为定性、半定量或定量测定，这取决于测定结果准确反映测试样本中的IgE抗体量的程度和测定的精确度要求。这样的免疫测定传统上测量总血清IgE水平或变应原-特异性IgE水平。然而，尽管不同的技术平台以似乎相同的类别或单元报道它们的IgE结果，但研究已经显示了技术平台之间在检测总IgE和特异性IgE活性上的差异(Wood R A等人，AnnAllergy Asthma Tmmunol.2007, 99: 34-41)。定量IgE抗体测定法使用最先进的测定标定方法。定量测定的标定部分的目的是确定测定的剂量-反应关系，使得通过测试患者血清而得到的反应结果可以以剂量单位而插值，其涉及到血清中的IgE抗体的相对量。同源和异源的插值方法都已被成功使用。同源插值程序促进了总体测定平行性并使测定的工作范围最大化，即通过在整个测定中使用相同的固相变应原并用具有与待在测试血清中检测相同的变应原特异性的人IgE抗体建立标定曲线。一般而言，含有IgE抗体的参考血清库以与测试血清IgE相同的方式稀释，从而确保测定的平行性。该方法的主要局限是需要以升计的人血清库的数量，所述人血清库含有对待测的各变应原特异性具有特异性的IgE抗体。难以维持可以在各批次之间以可重现方式提供这样大量的人血清的血清储库(serum bank)，尤其是对于不太常见的变应原特异性。因为由有限的含IgE抗体的人血清库而导致使用同源插值标定的测定所具有的限制，已采用来自总IgE标定曲线的异源插值作为标定策略，用于当今的涉及数百种不同的变应原特异性的定量IgE抗体测定法。异源插值系统已经成为行业标准。在异源插值系统中，使用可追踪到WHO 75/502标准的IgE标定物，总血清IgE标定曲线与测定的变应原-特异性IgE部分同时进行(I/LA20-A2 Analytical performance characteristics and clinicalutility of immunological assays for human immunoglobulin E (I本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于标定多重测定的方法，包括：将标定试剂加入到其上已固定多种捕获剂的固相，加入具有结合到所述标定试剂的能力的检测分子，检测结合的检测分子，从而建立包含许多标定点/间隔的标定曲线，其特征在于，所述标定试剂包含至少2种不同的结合分子，其中每种结合分子具有特异性结合到固定在固相上的捕获剂的能力和结合到检测分子的能力，并且其中至少2种结合分子在标定试剂中以不同浓度存在，从而代表标定曲线中的不同的标定点/间隔。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：G伊夫维深，P马特斯森，M尼斯特兰德，
申请(专利权)人：法迪亚股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
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