一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒，由C肽R1试剂、C肽R2试剂和C肽校准品组成；其中C肽R1试剂包含缓冲液、保护剂Ⅰ、反应增强剂和防腐剂，C肽R2试剂包含缓冲液、保护剂Ⅰ、防腐剂和包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，C肽校准品包含缓冲液、保护剂Ⅱ、防腐剂和C肽重组蛋白。本发明专利技术制备的试剂盒适用于半自动、全自动生化分析仪及散射比浊分析仪，具有操作简单、快速、测试精确度高、自动化程度高的优点，适用于在临床上广泛使用，特别是对急诊能实现快速定量测定。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒，由C肽R1试剂、C肽R2试剂和C肽校准品组成；其中C肽R1试剂包含缓冲液、保护剂Ⅰ、反应增强剂和防腐剂，C肽R2试剂包含缓冲液、保护剂Ⅰ、防腐剂和包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，C肽校准品包含缓冲液、保护剂Ⅱ、防腐剂和C肽重组蛋白。本专利技术制备的试剂盒适用于半自动、全自动生化分析仪及散射比浊分析仪，具有操作简单、快速、测试精确度高、自动化程度高的优点，适用于在临床上广泛使用，特别是对急诊能实现快速定量测定。【专利说明】一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒
本专利技术属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种采用胶乳增强免疫比浊法定量测定检测标本中C肽含量的试剂盒。
技术介绍
C肽(C-P印tide)又称连接肽，由31个氨基酸组成，分子量为3020道尔顿，是胰岛素原中连接胰岛素A链和B链的一段短肽，其作用在于促进胰岛素分子在β细胞内质网中合成，并使胰岛素进行有效折叠和装配。临床上对于C肽的测定主要用来正确评价胰岛β细胞功能变化及发展规律，以及对糖尿病类型的准确判断和病情监控。人体胰岛β细胞合成胰岛素原，随后胰岛素原被等摩尔地切割成胰岛素和C肽。因此，胰岛β细胞分泌的胰岛素和C肽呈等分子关系，血中C肽浓度可间接反应胰岛素浓度。而与胰岛素相比，C肽在体内不被肝脏分解，只能通过肾脏清除，且半衰期较长(C肽的半衰期大于30min,胰岛素的半衰期为3?4min),在血清中的浓度几乎是胰岛素的10倍，因此C肽水平更能准确反映胰腺中β细胞的分泌功能。此外，人源和动物源以及各种改进的胰岛素在氨基酸序列和结构上类似，导致了它们的免疫原性相近，在检测中不易区分。如果通过检测血中的胰岛素水平来评价胰岛功能，容易受到外源性胰岛素的影响，而外源性胰岛素中不含有C肽，且C肽不受胰岛素治疗中产生的胰岛素自身抗体的干扰，因此，测定C肽对内源性胰岛素的分泌能力评价更具有临床意义。尽管测量C肽的抗体容易与胰岛素原发生交叉反应，但是胰岛素原一般不会出现在血中，游离C肽的含量大概占总C肽含量的90%以上，所以临床上一般通过直接测定血清总C肽的含量来对β细胞进行评价。目前，临床上对C肽的测定方法主要包括放射免疫法(Radioimmunoassay, RIA)、酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked, Immunosorbent Assay, ELISA)及化学发光法等,其中RIA法虽然灵敏度高，但对设备要求较高、检测结果不稳定且存在放射性污染；ELISA定量准确性差，操作时间长，自动化程度低，无法满足临床上大量、快速检测的需求；化学发光法则存在仪器维护昂贵，易受干扰，重复性差的缺点。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述不足，本专利技术要解决的技术问题是:提供一种稳定性好，测试效率高，测试结果准确，灵敏度高的定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案: 一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，包括C肽Rl试剂、C肽R2试剂和C肽校准品； 所述C肽Rl试剂由缓冲液、保护剂1、反应增强剂和防腐剂得到； 所述C肽R2试剂由缓冲液、保护剂1、防腐剂和包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒得到；其中包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒由抗人C肽抗体和聚苯乙烯胶乳颗粒偶联得到；所述抗人C肽抗体为鼠源抗人C肽抗体、兔源抗人C肽抗体或者羊源抗人C肽抗体； 所述C肽校准品由缓冲液、保护剂I1、防腐剂和C肽重组蛋白得到。上述技术方案中，将抗人C肽抗体以定向化学偶联的方式连接在聚苯乙烯胶乳颗粒表面，当检测标本中的C肽抗原与试剂盒中的抗人C肽抗体发生免疫反应后形成聚集颗粒而产生浊度，通过在400~700nm波长下测定其浊度即可计算出检测标本中的C肽含量。上述技术方案中，C肽R2试剂中包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒由抗人C肽抗体和聚苯乙烯胶乳颗粒偶联得到，其中抗体与聚苯乙烯胶乳颗粒的重量比可以为0.5~20:100，抗人C肽抗体为鼠源抗人C肽抗体、兔源抗人C肽抗体或者羊源抗人C肽抗体，其可以和检测样本中的抗原发生免疫反应；优选鼠源抗人C肽抗体，这是因为其免疫原性、抗原结合亲和力、血清半衰期更为理想，与血清中的C肽特异性结合能力高，可以大大提闻检测的准确性。作为优化，所述缓冲液为PBS缓冲液、TriS-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或者几种； 其中C肽Rl试剂中缓冲液的浓度为20~200mM ;(:肽R2试剂中缓冲液的浓度为20~200mM ;C肽校准品中缓冲液的浓度为20~200mM。上述技术方案中缓冲液的主要作用是保证配制胶乳增强免疫比浊试剂盒的过程中，各组分的PH值保持在一定的范围内，使个组分的性能保持稳定。所述C肽Rl试剂中缓冲液的浓度为20~200mM，pH优选为4~10 ;所述C肽R2试剂中缓冲液为20~200mM，pH优选为4~10 ;所述C肽校准品中缓冲液的浓度为20~200mM，pH优选为6~8 ;这样C肽Rl试剂、C肽R2试剂和C肽校准品中缓冲液的加入量、pH值保持在一个适中的范围，使各组份的酸碱度保持稳定，不会对其他物质的性能产生影响，从而保证试剂盒整体性能的稳定，使测试结果更准确。作为优化，所述保护剂I为牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA和明胶中的一种；其中C肽Rl试剂中保护剂I的 浓度为I~10g/L <肽1?2试剂中保护剂I的浓度为I~IOg/L ； 所述保护剂II为牛血清白蛋白BSA，其中C肽校准品中保护剂II浓度为I~8 g/L。上述技术方案中的保护剂I可以使C肽Rl试剂和C肽R2试剂在保存期内性能保持稳定；保护剂II可以保持C肽重组蛋白的性能稳定，在保存期内使C肽校准品不会因为环境温度的变化而产生变异。作为优化，所述反应增强剂为PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的一种，其中C肽Rl试剂中反应增强剂的浓度为10~50g/L。上述技术方案中，反应增强剂均为非离子型水溶性聚合物，具很强的亲水性，在水中的溶解度比较大，可以调节C肽Rl试剂的浓度，促进抗原和抗体分子结合为复合物；同时反应增强剂可以破坏溶液中蛋白质周围的电子云和水化层，促进特异性的抗原和抗体分子聚集形成大分子复合物。作为优化，所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞和Proclin300中的一种； 其中C肽Rl试剂中防腐剂的浓度为0.3~3g/L ;C肽R2试剂中防腐剂的浓度为0.3~3g/L ；C肽校准品中防腐剂的浓度为0.3~3g/L。作为优化，所述聚苯乙烯胶乳颗粒为羧基化聚苯乙烯胶乳颗粒或者醛基化聚苯乙烯胶乳颗粒，其粒径为200?500nm。上述技术方案中，羧基化聚苯乙烯胶乳颗粒采用碳化二亚胺EDAC活化后再与抗人C肽抗体偶联，醛基化聚苯乙烯胶乳颗粒无需活化即可直接与抗人C肽抗体偶联，其中聚苯乙烯胶乳颗粒与EDAC的质量比为0.5?5:100，这样可以使聚苯乙烯胶乳颗粒表面快速活化，使聚苯乙烯胶乳颗粒上的基团与抗人C肽抗体上的氨基缩合形成交联结构，提高了二者之间的作用力以及胶乳颗粒的稳定性，进而可以准确、快速的测试检测标本中的C肽含量。作为进一步优化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定量检测C肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，包括C肽R1试剂、C肽R2试剂和C肽校准品；所述C肽R1试剂由缓冲液、保护剂Ⅰ、反应增强剂和防腐剂得到；所述C肽R2试剂由缓冲液、保护剂Ⅰ、防腐剂和包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒得到，其中包被抗人C肽抗体的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒由抗人C肽抗体和聚苯乙烯胶乳颗粒偶联得到；所述抗人C肽抗体为鼠源抗人C肽抗体、兔源抗人C肽抗体或者羊源抗人C肽抗体；所述C肽校准品由缓冲液、保护剂Ⅱ、防腐剂和C肽重组蛋白得到。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李民友，吉权，
申请(专利权)人：重庆中元生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85