一种灵敏度高的胶乳增强免疫比浊法肌钙蛋白I检测试剂制造技术

本发明专利技术涉及肌钙蛋白I检测技术领域，特别涉及一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂，其中试剂中的主要成分为缓冲液、氯化锌、Thesit、EMULGEN-A90、氨基三乙酸（NTA）防腐剂，试剂R2的组分为：缓冲液、曲拉通-308、牛血清白蛋白(BSA)、防腐剂、TnI抗体包被胶乳颗粒等主要组成成分。其中Thesit、EMULGEN-A90、曲拉通-308三种表面活性剂的加入以及恰当的胶乳微球粒径大小的选择大大增加了反应的灵敏度，并且产品配置简单，价格低廉，非常适合大面积的临床推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种灵敏度高的胶乳增强免疫比浊法肌钙蛋白I检测试剂，属于临床体外检测

技术介绍
肌钙蛋白，由T、C、I三亚基构成，和原肌球蛋白一起通过调节钙离子对横纹肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。当心肌损伤后，心肌肌钙蛋白复合物释放到血液中，4-6小时后，开始在血液中升高，升高的肌钙蛋白I能在血液中保持很长时间6-10天。肌钙蛋白I具有高度心肌特异性和灵敏度，所以肌钙蛋白T已成为目前最理想的心肌梗死标志物。患有各种冠状动脉疾患的病人必然会发生心肌细胞损伤.有些病人的临床表现可能不完全符合WHO关于AMI诊断标准（不稳定心绞痛就是其中之一），但却伴有某些心肌损伤标志物（如cTnT等）升高，从而导致细胞内的组成成分渗漏入外周血循环.这使得心肌细胞损伤标志物的检测成为可能.cTnT和cTnI在AMI后（3~6h）血中浓度很快升高，和CK-MB（3~8h）相当或稍早，它们测定的特异性和灵敏度明显高于CK-MB.cTn具有相当长的诊断窗口期（cTnI7~9天，cTnT更长）.cTn对急性胸痛病人（无论有无骨骼肌损伤）的诊断均优于CK-MB.研究表明：在对AMI的诊断方面cTnI和cTnT无显著差异，都能鉴别出CK-MB所不能检测出的心肌损伤.心肌肌钙蛋白I测定开始于20世纪80年代中期，最早使用的是多克隆抗体检测的放射免疫比浊法，随后相继出现了运用单克隆抗体检测的各种不同的免疫法。目前检测的方法<br>有肌钙蛋白I的测定主要有免疫学方法，检测方法则包括胶乳增强免疫比浊法，夹心免疫放射法、夹心酶联免疫法，化学发光以及电化学发光等相关方法，其中普通夹心免疫放射法、夹心酶联免疫法两种方法成本相对较低，操作相对较简单，但是若试验中所用的抗体为多克隆抗体，会交叉反应，且分析灵敏度较低。而化学发光和电化学发光这两种方法，准确度较好且反应的分析灵敏度高，能够快速准确的检测出结果，但是这两种方法需要特定的化学发光仪器，并且对实验室操作人员的要求相对较高，因此在临床中无法真正的普及使用，只有一些相对较大的实验室才具备相应的条件，而后期逐渐研发和使用的胶乳增强免疫比浊法操作简单，成本较低，能够较好的结合全自动生化分析仪器进行操作，方便快捷，但是本方法目前同样具有分析灵敏度低的缺陷，在临床使用过程中针对于低浓度的临床样本，容易出现零值，甚至出现负值，这给临床使用者带来很大不方便，因此根据本问题，作者在胶乳增强免疫比浊法检测血清肌钙蛋白I的基础之上进行优化，专利技术一种分析灵敏度高的胶乳增强免疫比浊法检测血清肌钙蛋白I。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测血清肌钙蛋白I的试剂。检测原理：首先将特异性抗体结合于胶乳颗粒表面，样本与胶乳颗粒在缓冲液中混合，样本中的TnI与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在505nm波长下检测溶液浊度变化，变化程度与样本中的TnI含量成正比：一种准确度高的肌钙蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：试剂R1中含有缓冲液·············································100mmol/L，氯化锌·············································0.1mmol/L-0.5mmol/L，Thesit·············································1ml/L-3ml/LEMULGEN-A90········································1ml/L-5ml/L，氨基三乙酸（NTA）····································0.1g/L-1g/L，防腐剂·············································0.5ml/L-1ml/L；2）试剂R2的组分为：缓冲液·············································100mmol/L，曲拉通-308·········································1ml/L-5ml/L，牛血清白蛋白(BSA)··································1g/L-5g/L，防腐剂·············································0.5ml/L-1ml/L；TnI抗体包被胶乳颗粒································适量所述的肌钙蛋白I检测试剂，试剂R1中缓冲液为25℃，PH=7.6的咪唑缓冲液；所述的肌钙蛋白I检测试剂，试剂R2中缓冲液为25℃，pH=7.6的咪唑缓冲液。所述的肌钙蛋白I检测试剂，所述防腐剂为PC-300。所述的肌钙蛋白I检测试剂，所述TnI抗体包被胶乳颗粒为羊抗人单抗体TnI抗体，抗体所包被的胶乳微球颗粒为50-55nm。所述的肌钙蛋白I检测试剂来检测肌钙蛋白I的检测方法，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。所述的检测方法，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。本专利技术的创新处：1）在试剂R1和R2中分别使用了咪唑缓冲液，咪唑缓冲液在反应中能够有较大的缓冲能力，对在保证缓冲能力的同时，且不会对反应体系产生负面影响；2）在试剂的R1中加入Thesit和EMULGEN-A90两种表面活性剂，这两种表面活性剂的联合使用能有较好的提高试剂的乳化作用，能够较好的提高单抗体和肌钙蛋白I的结合，且能保证在反应过程中均衡稳定，保证反应曲线在仪器上的平滑；3）在试剂R1中加入了氨基三乙酸（NTA），能够有效的螯合重金属离子，去除重金属离子对反应的干扰；4）在R2中所选取的胶乳微球的颗粒粒径为直径相对较小的50-55nm胶乳颗粒，能够较好的增加反映的灵敏度；5）在试剂R2中加入了曲拉通-308和牛血清白蛋白两种物质，能够有效的保护单抗体的活性和效价，且曲拉通-308能特异性的增加抗体和抗原的结合。附图说明图1为实施例2和化学发光相关性曲线图，图2为实施例3和化学发光相关性曲线图。图3为实施例1和化学发光相关性曲线图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明：实施例1一种现有常见的肌钙蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种准确度高的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：一种准确度高的肌钙蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：试剂R1中含有缓冲液················································100mmol/L，氯化锌················································0.1mmol/L，Thesit················································1ml/L，EMULGEN‑A90···········································1ml/L，氨基三乙酸（NTA）·······································0.1g/L，防腐剂················································0.5ml/L；2）试剂R2的组分为：缓冲液················································100mmol/L，曲拉通‑308············································1ml/L，牛血清白蛋白(BSA)·····································1g/L，防腐剂················································0.5ml/L；TnI抗体包被胶乳颗粒···································适量。...

【技术特征摘要】
1.一种准确度高的肌钙蛋白I检测试剂，其特征在于包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1
和试剂R2的组成如下：
一种准确度高的肌钙蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组
成如下：
试剂R1中含有
缓冲液················································100mmol/L，
氯化锌················································0.1mmol/L，
Thesit················································1ml/L，
EMULGEN-A90···········································1ml/L，
氨基三乙酸（NTA）·······································0.1g/L，
防腐剂················································0.5ml/L；
2）试剂R2的组分为：
缓冲液················································100mmol/L，
曲拉通-308············································1ml/L，
牛血清白蛋白(BSA)·····································1g/L，
防腐剂················································0.5ml/L；
TnI抗体包被胶乳颗粒···································适量。
2.一种重要组成部分含量增加的准确度高的肌钙蛋白I检测试剂，包括试剂R1和试剂
R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
1）试剂R1做成成分
缓冲液················································100mmol/L，
氯化锌················································0.5mmol/L，<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王珍，李艳梅，甘宜梧，王绮，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37