脂蛋白a(Lp(a))测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种脂蛋白a(Lp(a))检测试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为的缓冲液；所述的试剂R2为脂蛋白a(Lp(a))抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒与缓冲液的混合物。1.本发明专利技术的试剂盒具有检测简单而快速、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强及生产成本低的优点。2.本发明专利技术采用的脂蛋白a(Lp(a))检测方法为胶乳增强免疫比浊法，该方法使得脂蛋白a(Lp(a))的检测更为经济、方便和快速，适用于绝大多数医院的自动生化分析仪，特别是对急诊能实现快速定量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是属于医学免疫领域，涉及一种免疫检测试剂，进一步说，本专利技术涉及脂蛋白a(Lp(a))测定试剂盒检测试剂盒。
技术介绍
脂蛋白a测定试剂盒，该产品用于体外定量测定人血清中脂蛋白(a)（Lp(a)）含量，作辅助诊断用。脂蛋白(a)是一种独特的脂蛋白，脂质组成结构与LDL极其相似，因含有特殊的载脂蛋白(a)而得名。1987年发现脂蛋白(a)的一级结构与纤溶酶原具有显著同源性，其增高有导致血栓形成的倾向。Lp(a)体内水平高低与血脂、载脂蛋白不相关，是动脉粥样硬化性心脑疾病的重要的独立危险因素。对冠心病、急性心梗的发病、病程变化以及转归极具诊断价值。诊断方法：Lp(a)的测定一般采用RIA法、ELISA法与CLlA法、乳胶免疫比浊法等，但在临床上多采用乳胶免疫比浊法血清（含Lp(a)）+试剂（乳胶抗人Lp(a)抗体）━━━━抗原抗体复合物产生浊度变化,在一定的波长下检测,其浊度的变化与其含量成正相关。目前抗体与乳胶的连接通常使用化学偶联法，其作为R2试剂，非常容易发生聚结，使得试剂质量随着存放时间的延长而下降。使试剂的稳定性差。
技术实现思路
本专利技术根据R2试剂稳定性不佳，提供了一种方法来克服现有技术的不足，使得其保持质量稳定，提供了一种灵敏度高，稳定性好的脂蛋白a(Lp(a))检测试剂盒。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种脂蛋白a(Lp(a))测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为适当的缓冲液；所述的试剂R2是用Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒置于缓冲液中，所述试剂R2的制备步骤包括：步骤(1)：在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒(胶乳)中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺(EDAC)，得到激活的胶乳颗粒；步骤(2)：将步骤(1)激活的胶乳颗粒和Lp(a)抗体混合，待反应结束后再加入葡萄糖封闭胶乳微球上未反应的基团，得到偶联抗体的胶乳微球即Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于缓冲液中。作为进一步优选：步骤(2)中Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒在试剂R2中的浓度为0.08～0.28克/100ml。作为进一步优选：所述试剂R1中的缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液缓冲液中至少一种。作为进一步优选：所述试剂R2中的缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液缓冲液中至少一种。作为进一步优选：步骤(1)中乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺∶聚苯乙烯胶乳颗粒的重量比为0.2～5∶100。作为进一步优选：所述Lp(a)抗体包括多克隆抗体或单克隆抗体。作为进一步优选：所述步骤（1）中的聚苯乙烯胶乳颗粒其平均粒径在0.01~0.2mm之间。本专利技术所述试剂盒所采用的检测原理为胶乳增强免疫透射比浊法，其原理是Lp(a)抗体的胶乳颗粒，与Lp(a)发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物形成所产生的浊度，即可测出Lp(a)的含量。本专利技术的优点和有益效果：1.本专利技术的试剂盒具有检测简单而快速、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强及生产成本低的优点。2.本专利技术采用的Lp(a)检测方法为胶乳增强免疫比浊法，该方法使得Lp(a)的检测更为经济、方便和快速，适用于绝大多数医院的自动生化分析仪，特别是对急诊能实现快速定量检测。具体实施方式下面通过实施例进一步详细描述本专利技术，但本专利技术不仅仅局限于以下实施例。实施例1：Lp(a)检测试剂盒的制备本专利技术的试剂盒涉及试剂的主要原材料如下：1.Lp(a)抗体：单克隆抗体(市售)。2.胶乳：本专利技术仅示例性的采用直径为80～200nm带羧基基团的聚苯乙烯胶乳颗粒(市售)进行实验。本实施例的主要试剂的配制如下：试剂R1：含1.5％PEG6000(聚乙二醇6000)、95mmol/LNaCl的磷酸盐缓冲液，该试剂为无色透明溶液。试剂R2：用抗人Lp(a)抗体致敏粒径为80nm的聚苯乙烯胶乳颗粒。该试剂为乳白色溶液。具体步骤如下：1.取1ml(100mg/ml)胶乳，用0.02M(mol/L)，pH5.0的MES溶液(2-吗啉乙磺酸缓冲液)洗涤3次，超声分散；2.然后加入0.22ml用0.02M，pH5.0的MES溶液新鲜配制的EDAC(配制的溶液中EDAC的浓度为10mg/ml)混合完全，室温混和15min；3.然后用0.05M，pH5.0的MES溶液洗涤2次，0.1M，pH7.5的磷酸盐溶液洗涤1次，超声分散备用；4.取2ml抗体(5mg/ml)溶液，加入0.3ml用0.02M，pH7.5的磷酸盐溶液配制，室温混合15min，5.然后加入0.32ml10％BSA(小牛血清白蛋白)溶液，4℃混合4h；6.再加入0.4ml10％葡萄糖溶液，4℃混合过夜；7.然后用0.015M，pH7.5的甘氨酸溶液洗涤3次，再加入0.015M，pH7.5的甘氨酸溶液(含1％BSA，0.2％NaN3,15%庶糖，0.01%EDTA-Na2,0.01%trtonX-100的甘氨酸缓冲液)至胶乳(结合抗体以后的胶乳重量)终浓度为0.18％(质量体积比即0.18克/100ml)。实施例2：Lp(a)的测定检测工具：日立7060型自动分析仪。分析方法：两点终点法；主波长：570nm，副波长：700nm：样品量：2ul(微升)；R1：200ul；R2：50ul；反应方向：上升；测定温度：37℃；样品与R1混匀后，于第10秒读取吸光度A1；于3～5min时加入R2，于5min后读取吸光度A2。反应吸光度的计算为A2与A1的差值。计算方法：多点定标，根据吸光度与参考血清的值作剂量/响应曲线，样品含量可根据其吸光度值在剂量/响应曲线上算出。实施例3：Lp(a)检测试剂盒性能评价1.分析灵敏度评估采用5％牛血清白蛋白溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。在生化分析仪上连续检测20次，计算20次结果的均值与标准差SD。以空白均值加两倍标准差(+2SD)作为报告方法的检测限。从表1可见，灵敏度为6.42mg/L。表12.高值线性评估将1份低值血清(10mg/L)和1份高值血清(1000mg/L)按9∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂蛋白a(Lp(a))测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为适当的缓冲液；所述的试剂R2是用Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒置于缓冲液中，所述试剂R2的制备步骤包括：步骤(1)：在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒(胶乳)中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺(EDAC)，得到激活的胶乳颗粒；步骤(2)：将步骤(1)激活的胶乳颗粒和Lp(a)抗体混合，待反应结束后再加入葡萄糖封闭胶乳微球上未反应的基团，得到偶联抗体的胶乳微球即Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒，置于缓冲液中。

【技术特征摘要】
1.一种脂蛋白a(Lp(a))测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1
为适当的缓冲液；
所述的试剂R2是用Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒置于缓冲液中，所述试剂R2的制
备步骤包括：
步骤(1)：在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒(胶乳)中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚
胺(EDAC)，得到激活的胶乳颗粒；
步骤(2)：将步骤(1)激活的胶乳颗粒和Lp(a)抗体混合，待反应结束后再加入葡萄糖封
闭胶乳微球上未反应的基团，得到偶联抗体的胶乳微球即Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗
粒，置于缓冲液中。
2.根据权利要求1所述的脂蛋白a(Lp(a))检测试剂盒，其特征在于：步骤(2)中Lp(a)抗
体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒在试剂R2中的浓度为0.08～0.28克/100ml。
3.根据权利要求1所述的脂蛋白a(Lp(a))检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的缓
冲液为PBS缓冲液、甘...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆雪龙，宋高峰，李清华，周裕国，
申请(专利权)人：宁波天康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33