本发明专利技术涉及一种检测载脂蛋白A5(ApoA5)以诊断高甘油三酯血症的试剂盒，包含有二株未标记抗ApoA5的单克隆抗体和酶标抗ApoA5的单克隆抗体、封闭液、酶底物溶液、包被缓冲液、终止液、洗涤液、酶标板；二株未标记抗ApoA5单克隆抗体包被于酶标板作捕获抗体，酶标抗ApoA5单克隆抗体为检测抗体，包被缓冲液为0.05mol/l、pH9.6的碳酸盐缓冲液，其中1升溶液中含1.59g Na2CO3和2.93g NaHCO3，封闭液为质量浓度1％牛血清白蛋白；酶底物溶液为60μg/ml的3，3’，5，5’四甲替联苯胺和质量浓度为0.05％H2O2的0.1mol/l、pH6.0磷酸盐缓冲液；终止液为1mol/lH2SO4溶液。本发明专利技术用二株单克隆抗体包被于酶标板以捕捉人体血液中的ApoA5，提高抗体捕获能力，提高测定的灵敏度和准确度及线性范围，达到检验与临床要求。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种检测载脂蛋白A5(ApoA5)以诊断高甘油三酯血症的试剂盒，包含有二株未标记抗ApoA5的单克隆抗体和酶标抗ApoA5的单克隆抗体、封闭液、酶底物溶液、包被缓冲液、终止液、洗涤液、酶标板；二株未标记抗ApoA5单克隆抗体包被于酶标板作捕获抗体，酶标抗ApoA5单克隆抗体为检测抗体，包被缓冲液为0.05mol/l、pH9.6的碳酸盐缓冲液，其中1升溶液中含1.59g?Na2CO3和2.93g?NaHCO3，封闭液为质量浓度1％牛血清白蛋白；酶底物溶液为60μg/ml的3，3’，5，5’四甲替联苯胺和质量浓度为0.05％H2O2的0.1mol/l、pH6.0磷酸盐缓冲液；终止液为1mol/lH2SO4溶液。本专利技术用二株单克隆抗体包被于酶标板以捕捉人体血液中的ApoA5，提高抗体捕获能力，提高测定的灵敏度和准确度及线性范围，达到检验与临床要求。【专利说明】一种检测载脂蛋白A5以诊断高甘油三酯血症的试剂盒
本专利技术涉及载脂蛋白A5(ApoA5)作为高甘油三酯血症(HTG)诊断的生化指标，抗ApoA5抗体对的制备技术，酶标记显色免疫反应技术和利用ApoA5的抗体来诊断高甘油三酯血症(HTG)的
，特别涉及一种定量检测ApoA5以诊断高甘油三酯血症(HTG)的试剂盒。
技术介绍
临床上检测血脂的项目有很多，各医院普遍检查的基本项目有总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、载脂蛋白(Apo)B、Apo Al、脂蛋白(a) 等。调查资料研究表明，高甘油三酯、高胆固醇、低的高密度脂蛋白-C(HDL-C)和高的低密度脂蛋白-C(LDL-C)共同构成了冠心病的危险因素。载脂蛋白(Apo)异常与冠心病和中风密切相关。尽早进行正确诊断，有利于早期防治这些严重的疾病。载脂蛋白检测试剂的开发，有助于冠心病和中风的有效防治。 血清ApoAI可以代表HDL水平，与HDL-C呈正相关，其临床意义也大体相似。但是，HDL是一系列颗粒大小与组成不均一的脂蛋白，病理状态下HDL亚类与组成往往会发生变化，故ApoAI的升降不一定与HDL-C变化完全成比例。Ap0BlOO大约有有90%的比例分布在LDL中，所以血清ApoB主要代表LDL水平，它与血清LDL-C水平呈明显正相关，ApoB水平高低的临床意义也与LDL-C相似。但是，在少数情况下，可出现高ΑροΒΙΟΟ血症而LDL-C浓度正常的情况，所以这两种载脂蛋白可靠性和准确性都不十分令人满意。 ApoA5属于ApoAI/CIII/AIV基因群，在肝脏表达，与HDL/VLDL有关。ApoA5基因启动子的单核苷酸变异(SNP)直接影响甘油三酯水平。实验研究表明，在表达人类ApoA5转基因的小鼠的血浆中甘油三酯的浓度下降为对照鼠的三分之一，而在缺少该基因的小鼠中却增加了 4倍。ApoA5作为高甘油三酯血症的病因诊断指标具有很高的敏感性和特异性。 高水平甘油三酯可使小密低密度脂蛋白(sLDL)浓度升高，具有较强的致动脉粥样硬化作用。甘油三酯水平越高，低密度脂蛋白中的胆固醇酯越多。人们已经证实，动脉粥样硬化斑块中的胆固醇主要来自于低密度脂蛋白，低密度脂蛋白既是血浆中含胆固醇最多的，也是致动脉粥样硬化性最强的脂蛋白。另外，流行病学研究表明，高水平甘油三酯使高密度脂蛋白浓度下降，高密度脂蛋白浓度受甘油三酯水平的影响，两者呈负相关。近来研究表明，血甘油三酯水平异常与体内凝血因子异常密切相关，血浆甘油三酯水平升高可以导致体内凝血因子水平升高，从而促进血凝，并可使组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)合成增加，抑制纤维蛋白溶解，形成高凝状态，促进冠心病的发生。有实验结果表明，甘油三酯浓度上升lmmol/L，心血管意外发生率男性上升32 %，女性为76 %。在校正高密度脂蛋白的影响后，危险率男性上升14%，女性为37%。这些结果表明血清甘油三酯浓度升高是心血管疾病的重要危险因素。 高甘油三酯血症患者常同时有高血压和胰岛素抵抗。胰岛素抵抗通常指患者有倾向于非胰岛素依赖糖代谢异常，该类患者常较早地形成冠状动脉疾病。通常将脂质三联症、高凝状态、高血压、胰岛素抵抗称为代谢综合征。已证实高甘油三酯血症患者常合并有代谢综合征中的其它异常。高甘油三酯血症的临床意义在于此。而作为直接影响甘油三酯水平的指标ApoA5显得尤为重要，ApoA5的单核苷酸多态性有望作为风险指示标和降低血脂浓度的治疗靶点。 本专利技术就是将ApoA5通过ELISA实验应用于临床实践以达到高甘油三酯血症的病因诊断，以及冠心病和中风等心血管疾病有效防治的目的。 ApoA5的酶联免疫定量测定，绝大部分运用了二株抗体，如专利200610018747.5，一株单克隆抗体为捕获抗体，另一株单克隆抗体(或多克隆抗体)为标记抗体，形成酶联夹心法测定ApoA5。但这一方法测定ApoA5的线性范围窄，因此其测定灵敏度和准确度都受到限制。
技术实现思路
本专利技术的目的为了克服现有ApoA5的酶联免疫定量测定运用二株抗体存在的缺点，而提供一种检测ApoA5以诊断高甘油三酯血症的试剂盒，本专利技术结合三明治抗体技术以及针对ApoA5的抗体对开发技术研制出了三抗法定量测定ApoA5试剂盒，用二株单克隆抗体替代传统方法中的一株单克隆抗体为捕获抗体，提高了抗体捕获能力，提高了测定的灵敏度和准确度，以及线性范围，使在普通酶标仪上定量检测ApoA5，达到检验与临床要求。本专利技术利用ApoA5作为HTG诊断的生化指标，制备抗ApoA5的单克隆抗体对，以及利用改进了的酶联免疫法(ELISA)定量测定人血清中ApoA5的浓度，而对高甘油三酯血症进行病因诊断，从而达到冠心病和中风等心血管疾病的有效防治。 本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的: —种检测ApoA5以诊断高甘油三酯血症的试剂盒,试剂盒内包含有二株未标记抗ApoA5的单克隆抗体和另一株酶标抗ApoA5的单克隆抗体、封闭液、酶底物溶液、包被缓冲液、终止液、洗涤液、酶标板；其特征在于:以二株未标记抗ApoA5的单克隆抗体均匀包被于单位面积的酶标板上作为捕获抗体，以另一株酶标抗ApoA5的单克隆抗体为检测抗体，包被缓冲液为0.05mol/l、pH9.6的碳酸盐缓冲液，其中I升溶液中含1.59gNa2C03和2.93gNaHCO3,封闭液为质量浓度I %牛血清白蛋白；酶底物溶液为60 μ g/ml的3，3’，5，5’四甲替联苯胺(TMB)和质量浓度为0.05% H2O2的0.lmol/1、pH6.0磷酸盐缓冲液；终止液为Imol/IH2SO4 溶液。 所述的二株未标记抗ApoA5单抗隆抗体按1:0.1 一 9混匀，同时均匀包被于单位面积的酶标板孔上。 所述的二株未标记抗ApoA5的单克隆抗体记为Abl+Ab2 ;另一株抗ApoA5的单克隆抗体记为Ab3，Ab3标记辣根过氧化物酶HRP后记为Ab3-HRP ;从而有Abl+Ab2与ApoA5结合，ApoA5与Ab3-HRP结合，先后形成Abl+Ab2?ApoA5?Ab3_HRP反应链，此为本专利技术三抗法定量测定ApoA5试剂盒的核心。Abl、Ab2、Ab3要求作用于ApoA5抗原的不同位点，Abl+Ab2与Ab3分别配对后本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测载脂蛋白A5(ApoA5)以诊断高甘油三酯血症的试剂盒，试剂盒内包含有二株未标记抗ApoA5的单克隆抗体和另一株酶标抗ApoA5的单克隆抗体、封闭液、酶底物溶液、包被缓冲液、终止液、洗涤液、酶标板；其特征在于：以二株未标记抗ApoA5的单克隆抗体均匀包被于单位面积的酶标板上作为捕获抗体，以另一株酶标抗ApoA5的单克隆抗体为检测抗体，包被缓冲液为0.05mol/l、pH9.6的碳酸盐缓冲液,其中1升溶液中含1.59g Na2CO3和2.93g NaHCO3，封闭液为质量浓度1％牛血清白蛋白；酶底物溶液为60μg/ml的3，3’，5，5’四甲替联苯胺(TMB)和质量浓度为0.05％H2O2的0.1mol/l、pH6.0磷酸盐缓冲液；终止液为1mol/lH2SO4溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：钱金宏，廖园园，廖伟，
申请(专利权)人：武汉璟泓万方堂医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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