本发明专利技术涉及确定样品中总脂蛋白浓度的方法。该方法包括下列步骤：（ｉ）将亲脂性染料加入到所述样品的等分试样中，所述亲脂性染料与所述样品中的脂蛋白结合，并且当其如此结合时在适当激发下发荧光；和（ｉｉ）利用荧光分析确定所述样品中总脂蛋白浓度。本发明专利技术还公开了利用区分不同类型脂蛋白的染料分析样品溶液中脂蛋白含量的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂蛋白测定本专利技术涉及用于确定样品，诸如血浆或血清中的脂蛋白浓度的测定系 统。在本专利技术的一个方面中，该测定系统可以包括可以用于区分样品混合 物中不同类型脂质分子的附加步骤。脂质是有生命生物中存在的多种不同组的有机化合物。它们在水中是 不溶的，但是可溶于有机溶剂。将脂质广泛分类成两个类别(i)复杂脂质；和(ii)简单脂质。复杂脂质是长链脂肪酸的酯并且包括甘油酯类、糖脂类、 磷脂类、胆固醇酯和蜡。不含有脂肪酸的简单脂质，包括类固醇(例如，胆 固醇)和萜类。脂质可以与蛋白质结合形成脂蛋白，其为诸如胆固醇和甘油三酯的脂 质在血液和淋巴中被输送的形式。在血浆中发现的脂蛋白属于三个主要分类(i)高密度脂蛋白(HDL)， (ii)低密度脂蛋白(LDL)，禾叩ii)极低密度的脂 蛋白(VLDL)，以及中间密度脂蛋白(IDL)。充分记载的是，在血液血浆中不同脂蛋白的浓度和动脉粥样硬化风险 之间存在有力的关系，动脉粥样硬化即在血管壁上发展有害斑块，其可以 导致心脏病发作。同样己知，不同类别的脂蛋白(HDL、 LDL禾QVLDL)在 动脉粥样硬化中各自起不同的作用。例如，HDL被认为是抗致动脉粥样化 的(anti-atherogenic)的，而已知LDL是高度致动脉粥样化的(它携带的胆固 醇与动脉粥样硬化的发展密切相关)。因此，关于血液中多种脂质成分(即脂蛋白)的总脂蛋白含量以及多种 脂质成分的每一种的相对浓度的知识，将是有利的，因为这将帮助临床医 生治疗具有不适当的这些脂质血液浓度的患者。应当理解，具有患者脂蛋 白分布的知识对于临床医生将是最有利的。已经开发了用于确定血液中一些脂质成分浓度的测定。这样的测定通 常包括首先从患者取血样，然后将其送到临床实验室进行分析。这样的测 定利用昂贵的装置进行，并且出于计算原因需要相当长的时间以产生结果。这耽误治疗。而且，所述测试是复杂的，并且因此是昂贵的。另外，在实验室中使用的装置不容易便携，并且因此不能由普通医师(GP)或护 士在出诊时使用，或者甚至不能作为家用测试试剂盒使用。最近已经开发 了试图在"治疗点(pointof care)"重现实验室测定的装置，但是已经证明 这些是昂贵的并且需要熟练的使用者操作。因此，存在对于提供用于分析 血液血清中脂蛋白分布的改进方法的需要。血清是多种蛋白质的复杂混合物，并且虽然分离并直接测量不同类别 脂蛋白浓度的方法是己知的，但是这样的方法是复杂而昂贵的。在WO 01/53829A1中公开了用于确定血液血清的脂蛋白浓度的测定的实施例。该 文件涉及特别的有机发光体，4-二甲基氨基-4'-二氟甲基-磺酰-亚苄基-苯乙 酮(DMSBA)，作为荧光探针的使用。所述探针的式，确定为K-37，给定 如下-探针K-37在水中不发光，但是在脂蛋白水溶液诸如血液血清中是高 度发光的。特别是，荧光强度高度依赖于血液血清的脂蛋白含量，并因而 可以将K-37用作荧光探针以测量可能存在的脂蛋白浓度，即当结合到脂 蛋白的脂质上并在适当辐射波长激发时，K-37发荧光。因此，脂蛋白混合 物的时间分辨(time-resoWed)荧光衰减的测量可用于产生关于在所述混合 物中存在的不同脂蛋白(LDL、和VLDL滩对浓度的直接信息。然而，利用K-37时间分辨荧光衰减的问题是它的测量是复杂的并且 需要昂贵的装备。而且，它涉及对所产生的数据的高度专业的计算机分析， 其为了正确解释可能是耗时的。因此，当希望快速决定治疗过程而不是花 费时间使用时间分辨荧光衰减以提供脂蛋白分析时，使用K-37时间分辨的荧光衰减以确定血液中脂质成分的浓度对于临床医生具有严重的局限 性。因此，即使存在通过利用使用探针K-37的时间分辨荧光分析而确定样品中特定脂蛋白浓度的可用方法，应当理解该方法具有许多局限性。因此本专利技术实施方案的目的是排除或减轻现有技术的问题，并且提供 用于确定样品中脂蛋白浓度的改进方法。本专利技术人决定研究他们是否能够开发基于使用荧光染料测量生物样品 中脂蛋白的简化测定。该决定是在考虑针对研究这类测定的技术偏见的条 件下作出的。生物样品，且特别是血样，含有在相对宽的波长范屈内自发 荧光的分子，并且因此认为不可能开发基于简单荧光的测定。为了确定血样中总脂蛋白(即HDL、 LDL、和VLDL)的浓度，本专利技术 人认识到优选地，来自与多种脂蛋白类别结合的染料的荧光响应，对于给 定的总脂蛋白浓度，即总脂蛋白浓度，必须是基本上相同的，而不考虑它 的组成(即样品中HDL丄DL:IDL:VLDL的比例)。因此，本专利技术人相信，优 选地，来自染料物质的荧光强度响应在脂蛋白分子的浓度范围内也应当基 本上是线性的，认为所述脂蛋白分子来自临床测试中遇到的样品。虽然本专利技术人不希望受限于任何假设，但是他们相信来自染料物质的 荧光强度将取决于它对于样品中特定脂蛋白分子(HDL、 LDL、 IDL或 VLDL)的亲合性，依赖于脂蛋白分子络合物内的环境的荧光量子收率，以 及还有由压紧在一起的染料分子之间的能量传递所引起的荧光猝灭的程 度。因此，本专利技术人推断，可以选择适合的染料物质，所述染料物质可以 通过简单的荧光测量，用于进行总脂蛋白的精确测量。本专利技术人因此进行一系列实验(在实施例1-3中论述)以研究是否可以 在真实血清样中遇到的脂蛋白浓度范围内获得许多染料物质和各种脂蛋 白颗粒类型(HDL、LDL和VLDL)的脂蛋白浓度之间的线性和相等的关系。 令他们意外地是，他们发现对于特殊类型的染料，存在荧光和脂蛋白浓度 之间的线性关系。因此，根据本专利技术的第一个方面，提供确定样品中总脂蛋白浓度的方 法，所述方法包含下列步骤-(i)将亲脂性染料加入到样品的等分试样中，所述亲脂性染料与样品中6的脂蛋白结合，并且当其如此结合时在适当激发下发荧光；和(ii)利用荧光分析确定样品中总脂蛋白浓度。由术语"总脂蛋白"，我们指的是样品中VLDL、 HDL、 LDL、 IDL和乳糜微粒的共同浓度。本专利技术人己经确定荧光、亲脂性染料可以有利地用于确定样品的总脂蛋白含量。它们意外地发现所述染料克服了现有技术的缺点，并可以用在基于精确快速简单荧光的测定中，所述测定可以在可在本领域中(例如，在商店，GP手术室或家庭随访中)使用的简单荧光计上操作，并且不需要专业知识进行操作。可以使用广泛多样的亲脂性染料。然而，本专利技术人已经确定按照本专利技术，双酚染料(即，包括两个酚基团的染料)是特别有效的。按照本专利技术第--方面的双酚染料可以包括两个酚基团，其由包括至少3个碳原子的碳链分开。该碳链还优选地包括至少一个不饱和键。应该理解所述染料可以在酚基团和碳链上具有取代。在本专利技术的优选实施方案中，优选地，所述染料物质包括荧光单元(即，荧光化学部分)，其称为查耳酮或benzalideneacetophenone。该单元具有下述通式査耳酮或benzalideneacetophenone染料具有取代到查耳酮基团的酚环上的官能团。这些官能团的性质能够对染料的性质具有大量影响，所述染料的性质包括(a) 使激发和发射波长改变到更长的波长；(b) 赋予这样的优势，即用于激发染料的波长应该产生很少的来自血液血浆的许多紫外(波长〈400nm)可激发成分背景荧光；7(c) 对溶剂(环境)的极性的灵敏性；(本文档来自技高网...
【技术保护点】
确定样品中总脂蛋白浓度的方法，所述方法包括下列步骤： （ｉ）将亲脂性染料加入到所述样品的等分试样中，所述亲脂性染料与所述样品中的脂蛋白结合，并且当其如此结合时在适当激发下发荧光；和 （ｉｉ）利用荧光分析确定所述样品中总脂蛋白浓度 。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴维托马斯克拉克，加雷斯罗伊斯顿琼斯，
申请(专利权)人：L三技术有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]
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