本发明专利技术提供了一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法及其使用的试剂所组成的试剂盒，其中，该方法所使用的试剂特别包括，选自以下物质中的一种和几种的稳定剂：乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)、1，2-环己二醇缩水甘油、二乙烯三胺五乙酸钠和六聚甘油二油酸酯；以及选自以下物质中的一种和几种的高分子加速剂：脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠和聚丙烯酸钠。本发明专利技术提供的方法可以批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力强。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定载脂蛋白A2的方法及所述方法使用的试剂盒，具体地本专利技术涉及一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法及所述方法使用的试剂盒。
技术介绍
载脂蛋白A II (ApoA II)是高密度脂蛋白(HDL)中第二种含量多的载脂蛋白。ApoA II由两条多肽链的77个氨基酸残基组成，在不加还原剂的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中测出其分子量是17000D，在人血浆中以二聚体形式存在。ApoA II的单体分子量为8700D。人ApoA II蛋白C端氨基酸残基为谷氨酸，N端为吡咯烷酮酸，缺乏组氨酸，精氨酸及色氨酸。ApoA II有多态性存在，最主要的多态型等电点为4. 9，而含量较少的多态型的等电点为5. 17,4. 68,4. 42和4. 20。ApoA II的生理功能之一是维持HDL结构，ApoA II肽段12-31和肽段50-77具有与磷脂的结合能力，经二级结构分析认为，残基17-30和51-62形成的双性螺旋结构是人 ApoA II与脂质结合的分子基础，也可能参与HDL受体的识别，在HDL的代谢中具有重要作用；其二是激活肝脂酶，用以水解乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯 (TG)和磷脂(PL)。体外实验表明，它可能具有抑制卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)和肝磷脂的作用。测定人血浆中ApoA II的含量对研究HDL代谢，探讨动脉粥样硬化、冠心病的发病机理及临床诊断有重要意义。流行病学及临床研究表明，ApoA II含量与冠心病呈负相关，与心肌梗塞呈高度负相关。测定血浆ApoA II, ApoA I及Ap0BlOO含量，可替代血脂的测定作为冠心病诊断的参考指标。目前一般采用酶联免疫法测定血清脂蛋白Apoa II。酶联免疫法的原理是将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体；洗涤除去未结合的抗体及杂质。加待测样品，使之与固相抗体接触反应一段时间，让样品中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与样品中待测物质的量正相关。加底物，夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。现有的测定血清脂蛋白Apoa II的方法存在着操作繁琐，设备要求高，样品预处理复杂，不能直接在全自动生化分析仪上进行批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差的缺点。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是克服现有的测定载脂蛋白A2的方法操作繁琐，设备要求高， 样品预处理复杂，不能直接在全自动生化分析仪上进行批量检测分析，对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差的缺点，提供一种操作以及预处理过程简单、能直接在全自动生化分析仪上批量检测分析，且对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力强的用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法。现有技术没有使用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的先例，本专利技术的专利技术人付出了大量地创造性劳动，大胆地采用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，并且摸索出了该方法实现测量的条件和使用的试剂所组成的试剂盒。本专利技术提供了一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，其包括向待测样品中加入反应剂，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露；向待测样品中加入抗ApoA II抗体溶液，形成不溶性的抗原-抗体复合物；测定所述不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知ApoA II抗原浓度的校准液的吸光度值比较；通过以下公式计算出样本中ApoA II的含量Mu _X ( SApoA II 含量(g/L ) = ^As (g/L)式中ΔΑιι为以空白管吸光度为对照的待测样品的吸光度值AAs为以空白管吸光度为对照的校准品的吸光度值Cs为校准品中ApoA II的浓度；其中，所述反应剂包括防腐剂0. 2-1. 5g/L、稳定剂0. 5_3g/L、电解质0. l_6g/L、 表面活性剂l-10g/L，高分子加速剂2-5g/L和反应促进剂0. 1-0. 5g/L，其余是10-200mmol/ L的缓冲液；所述抗ApoA II抗体溶液包括抗ApoA II抗体5_60g/L、抗氧化剂0. 01-0. 8g/L、 稳定剂l_30g/L，防腐剂0. 01-5g/L、电解质0. l_6g/L、高分子加速剂2_5g/L和表面活性剂 0. l-10g/L，其余是 10-200mmol/L 的缓冲液；其中，所述稳定剂选自以下物质中的一种和几种乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠 (AES)、1，2_环己二醇缩水甘油、二乙烯三胺五乙酸钠和六聚甘油二油酸酯；所述的高分子加速剂选自以下物质中的一种和几种脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素钠和聚丙烯酸钠。本专利技术还提供了上述方法使用的试剂所形成的试剂盒。本专利技术所述的方法由于使用了特定的稳定剂和高分子加速剂，使利用免疫透射比浊法测定载脂蛋白Α2成为可能，并且本专利技术的方法操作以及预处理过程简单、能直接在全自动生化分析仪上批量检测分析，且对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力强。具体实施方式本专利技术提供了一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白Α2的方法，其包括向待测样品中加入反应剂，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露；向待测样品中加入抗ApoA II抗体溶液，形成不溶性的抗原-抗体复合物；测定所述不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知ApoA II抗原浓度的校准液的吸光度值比较；通过以下公式计算出样本中ApoA II的含量权利要求1.一种用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A2的方法，其特征在于，该方法包括向待测样品中加入反应剂，解除样本中抗原周围的电子层和水化层，使抗原位点充分暴露；向待测样品中加入抗ApoA II抗体溶液，形成不溶性的抗原-抗体复合物； 测定所述不溶性抗原-抗体复合物的吸光度值，与已知ApoA II抗原浓度的校准液的吸光度值比较；通过以下公式计算出样本中ApoA II的含量Mu _X ( SApoA II 含量(g/L ) = Ms (g/L)式中Δ Au为以空白管吸光度为对照的待测样品的吸光度值 AAs为以空白管吸光度为对照的校准品的吸光度值 Cs为校准品中ApoA II的浓度；其中，所述反应剂包括防腐剂0. 2-1. 5g/L、稳定剂0. 5-3g/L、电解质0. l_6g/L、表面活性剂l-10g/L，高分子加速剂2-5g/L和反应促进剂0. 1-0. 5g/L，其余是10-200mmol/L的缓冲液；所述抗ApoA II抗体溶液包括抗ApoA II抗体5_60g/L、抗氧化剂0. 01-0. 8g/L、稳定剂l-30g/L，防腐剂0. 01-5g/L、电解质0. l_6g/L、高分子加速剂2_5g/L和表面活性剂 0. l-10g/L，其余是 10-200mmol/L 的缓冲液；其中，所述稳定剂选自以下物质中的一种和几种乙二醇(α-氨基乙基)醚四乙酸、亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、1，2_环己二醇缩水甘油、二乙烯三胺五乙酸钠和六聚甘油二油酸酯； 所述的高分子加速剂选自以下物质中的一种和本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：北京利德曼生化股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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