一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及化学分析技术领域，具体涉及一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及其使用方法。所述试剂盒包括包被有过敏原的酶标板、洗涤液、样品稀释液、阴性质控品、阳性质控品、生物素标记的抗人IgE抗体溶液、酶标记的链霉亲和素溶液、底物显色液和终止液，所述底物显色液包括3,3',5,5'

【技术实现步骤摘要】
一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及化学分析
，具体涉及一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]过敏反应，医学上称为“变态反应性疾病”，是一种免疫功能失调症，其作用原理是患者吸入或摄入含有致敏成分的物质(称为过敏原或变应原，llergen)后触发机体的B细胞产生过量的免疫球蛋白E(immunoglobulin E，IgE)，当机体再次接受相同抗原刺激时所发生的组织损伤或功能紊乱的反应。
[0003]过敏性疾病已被列为全球第六大疾病，常见的过敏性疾病主要有食物药物过敏、过敏性鼻炎、过敏性哮喘和过敏性皮炎等，据统计，全球约有30
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40％人口受到过敏性疾病的困扰，已经成为21世纪需要重点防治的疾病之一。过敏性疾病不但会给患者带来健康上的困扰，还会严重影响个人及家庭的生活质量，给个人及社会带来沉重的经济负担。因此，早期的预防和诊断对于保障人体健康来讲至关重要。
[0004]过敏性疾病的诊断方法有体内(invivo)和体外(in vitro)检测两种。
[0005]体内检测，包括皮内试验、皮肤点刺、斑贴实验和激发试验。上述方法的主要特点是均在人体内部进行过敏验证，从而指示何种过敏原激发的阳性过敏反应。由于体内检测直接观察患者的生物学影响，该方法会对人体产生创口或者生理刺激，主要针对成人检测，幼童和婴儿难以配合，存在一定的风险，且容易受到药物或汗液等因素的干扰，影响检测结果；同时观察的时间较久，易造成严重的过敏反应，危及人体健康。
[0006]体外过敏原的检测是指对过敏性疾病患者进行过敏原检测，找到引发过敏的真正原因，从而进行有针对性的预防和治疗，包括血清检测和细胞检测。其中，细胞检测是指嗜碱性粒细胞活化试验(BAT)，但目前BAT的标准化、统一性及对结果的解释尚未统一。血清检测主要包括总IgE(tIgE)检测和特异性IgE(sIgE)检测，其中sIgE检测与临床症状相结合，通过阳性结果客观地反映了患者不同的致敏状态，是过敏性疾病预防、诊断、疾病严重程度和诊疗效果评估的关键技术之一。目前体外过敏原检测应用到的技术有待优化，免疫荧光分析对人员和仪器的要求程度高，检测成本大；化学发光缺乏全自动操作选项；胶体金法手工操作，通量小。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及其使用方法，本专利技术操作简便易懂易上手，可结合全自动设备完成检测，可同时进行多个样本的检测，省时高效。具体原理为将已知过敏原连接在酶标板上，待测抗体与抗原结合后再与酶标二抗结合，形成抗原
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待测抗体
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酶标二抗的复合物，复合物的形成量与待测抗体量成正比，通过优化的TMB底物显色完成检测过程。该试剂盒可利用肉眼观察颜色深浅，定性判读结果；同时可以测定OD值，结合标准曲线，定量判读结果。
[0008]本专利技术提供一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒，所述试剂盒包括包被有过敏原的酶标板、洗涤液、样品稀释液、阴性质控品、阳性质控品、生物素标记的抗人IgE抗体溶液、酶标记的链霉亲和素溶液、底物显色液和终止液，所述底物显色液包括3,3',5,5'
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四甲基联苯胺、EDTA、柠檬酸、H2O2和防腐剂。
[0009]进一步地，所述底物显色液还包括醋酸钠和/或磷酸氢二钠。
[0010]进一步地，所述底物显色液还包括甘油和氯化钠。
[0011]进一步地，所述底物显色液由以下组分及含量组成：0.01g/L
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1g/L的3,3',5,5'
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四甲基联苯胺、0.001g/L
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1g/L EDTA、0.01M
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1M柠檬酸、0.01％
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1％H2O2、0.1M
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1M磷酸氢二钠、1％
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10％甘油、0.1％
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10％的氯化钠、0.1％
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10％二甲基亚砜。
[0012]进一步地，所述底物显色液由以下组分及含量组成：0.01g/L
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1g/L的3,3',5,5'
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四甲基联苯胺、0.001g/L
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1g/L EDTA、0.01M
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1M柠檬酸、0.01％
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1％H2O2、0.1M
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1M醋酸钠、1％
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10％甘油、0.1％
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10％的氯化钠、0.1％
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10％Proclin300。
[0013]进一步地，所述洗涤液为pH7.0的PBS缓冲液，所述洗涤液包括6g/L氯化钠、0.5g/L氯化钾、0.5g/L磷酸二氢钾、2.6g/L磷酸氢二钠和0.1％Proclin300。
[0014]进一步地，所述终止液为2M硫酸。
[0015]进一步地，所述样品稀释液为pH7.0的PBS、5％BSA和0.1％Proclin300。
[0016]一种试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
[0017]S1，使用样本稀释液两倍稀释血清样本，阴性质控孔加入100μL IgE阴性质控品，阳性质控孔加入100μL IgE阳性质控品，其它检测孔均加入100μL稀释后的血清样本；S2，轻轻摇动微孔板，使用不干胶纸密封已加样的微孔板，并将其置于37℃水浴箱中孵育1h；S3，甩干液体，用洗涤缓冲液洗涤微孔板板条，每孔加200～300μL洗涤液洗涤，至少洗涤三次，清洗完毕后，将微孔板倒置，用吸水纸将剩余的水吸干；S4，往所有反应孔中加入100μL生物素标记抗人IgE抗体，置37℃孵育1h，至少洗涤三次；S5，往反应孔中加入100μL)辣根过氧化物酶
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链亲和素结合物，置37℃孵育30分钟，至少洗涤三次，；S6，往反应孔中加底物显色液各50μL,置37℃孵育10分钟，每孔加入50μL终止液终止反应；S7，用酶标仪选双波长450nm和630nm读取吸光度值，在加入终止液后，20分钟内必须用酶标仪读取完所有反应孔的吸光度值。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]本专利技术简化了传统试剂盒所需的两种底物显色液，省时省力，操作简便；同时，可利用全自动设备上机测试，同时完成多个样本检测，节约人力成本。
[0020]特异性强：本专利技术针对过敏反应产生的特异性IgE进行检测，对于IgA、Ig G、IgD和IgM无明显反应。
[0021]稳定性好：本专利技术在效期内针对同一类型样本进行检测，相对偏差小，数据稳定，结果重现性好。
[0022]抗干扰效果好：溶血(血红蛋白浓度≦10mg/mL)、脂血(甘油三酯浓度≦20mg/mL)、脂血(胆固醇浓度≦5mg/mL)、黄疸(胆红素浓度≦0.4mg/mL)对检测结果没有干扰。
附图说明
[0023]图1为过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒(酶联免疫法)的标准本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包被有过敏原的酶标板、洗涤液、样品稀释液、阴性质控品、阳性质控品、生物素标记的抗人IgE抗体溶液、酶标记的链霉亲和素溶液、底物显色液和终止液，所述底物显色液包括3,3',5,5'
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四甲基联苯胺、EDTA、柠檬酸、H2O2和防腐剂。2.根据权利要求1所述的一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液还包括醋酸钠和/或磷酸氢二钠。3.根据权利要求2所述的一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液还包括甘油和氯化钠。4.根据权利要求3所述的一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液由以下组分及含量组成：0.01g/L
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1g/L的3,3',5,5'
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四甲基联苯胺、0.001g/L
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1g/L EDTA、0.01M
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1M柠檬酸、0.01％
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1％H2O2、0.1M
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1M磷酸氢二钠、1％
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10％甘油、0.1％
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10％的氯化钠、0.1％
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10％二甲基亚砜。5.根据权利要求3所述的一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述底物显色液由以下组分及含量组成：0.01g/L
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1g/L的3,3',5,5'
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四甲基联苯胺、0.001g/L
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1g/L EDTA、0.01M
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1M柠檬酸、0.01％
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1％H2O2、0.1M
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1M醋酸钠、1％...

【专利技术属性】
技术研发人员：董雯，谢清华，赵敏，胡晓飞，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：