一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及体外诊断试剂盒，特别是涉及一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒。本发明专利技术提供一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2两种组分，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、促凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由缓冲液2、两种交联不同D二聚体单克隆抗体的聚苯乙烯胶乳微球、稳定剂2、保护剂2、防腐剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与D二聚体抗体之间以共价交联或物理吸附方式连接，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基。与现有技术相比，本发明专利技术采用胶乳增强免疫比浊法，可以在400～800nm的波长下进行检测，检测更为方便，容易在临床中应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外诊断试剂盒，特别是涉及一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒。
技术介绍
纤维蛋白溶解系统是人体最重要的抗凝系统，由4种主要部分组成：纤溶酶原、纤溶酶原激活剂、纤溶酶、纤溶酶抑制物。当纤维蛋白凝结块形成时，在纤溶酶原激活剂的存在下，纤溶酶原激活转化为纤溶酶，纤维蛋白溶解过程开始，纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段，形成纤维蛋白产物(FDP)，FDP由X-寡聚体、D-二聚体、中间片段及片段E(Fragment E)组成。其中，X-寡聚体和D-聚体均含D-二聚体单位。人体纤溶系统，它对保持血管壁的正常通透性，维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用。D-二聚体血浆中水平增高说明存在继发性纤溶过程，而先产生凝血酶，后又有纤溶系活化；并且也反映在血栓形成的局部纤溶酶活性或浓度超过血浆2‰—抗纤溶酶活性或浓度。溶栓治疗是指用药物来活化纤维蛋白溶解系统。一般为投入一种纤溶酶原活化物如尿液酶、链激酶或组织型纤溶酶原活化物(tpA)，使大量纤溶酶生成，从而加速已形成血栓的溶解。FDP或D-二聚体生成，表明达到溶栓效果。纤溶蛋白降解产物中，唯D-二聚体交联碎片可反映血栓形成后的溶栓活性。因此，理论上，D-二聚体的定量检测可定量反映药物的溶栓效果、及可用于诊断、筛选新形成的血栓。因此，纤维D-二聚体是深静脉血栓(DVT)，肺栓塞(PE)，弥漫性血管内凝血(DIC)的关键指标。临床上对D-二聚体含量的检测可用于以下疾病的诊断：脑血管疾病、肝脏疾病、外科手术患者、溶栓治疗的监测等。D-二聚体的测定方法很多，有ELISA、TRIFMA、胶体金，胶乳增强免疫比浊法等。目前在临床上应用较为广泛的是胶体金法，ELISA操作要求严格，比较费时，胶体金作为定性或半定量方法，对于定量，稍有不足。而胶乳增强免疫比浊法有快速，定量和成本低的优势，越来越受到临床医生的关注。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种稳定性好，检测灵敏度高，线性范围广的的D二聚体检测试剂盒，以及D二聚体检测试剂盒的制备方法，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2两种组分，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、促凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由缓冲液2、交联D二聚体单克隆抗体的聚苯乙烯胶乳微球、稳定剂2、保护剂2、防腐剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与D二聚体抗体之间以共价交联或物理吸附方式连接。优选的，本专利技术中聚苯乙烯胶乳微球交联两种不同的D二聚体单克隆抗体。本技术方案中的D二聚体胶乳增强免疫比浊试剂盒，将D二聚体抗体交联在聚苯乙烯胶乳微球表面，当血液中的D二聚体与D二聚体抗体反应时，带动聚苯乙烯胶乳微球聚集产生一定浊度，而浊度与血液中的D二聚体含量在一定范围成正比，可以用全自动生化仪在400-800nm波长下检测血液中D二聚体的含量。优选的，所述试剂R1中的缓冲液1选自Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种，其pH为6.0～9.0，浓度为25～500mmol/L；所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种，其pH为7.0～9.0，浓度为25～500mmol/L。本专利技术试剂R1中的缓冲液1可使用上述本领域各种常用的缓冲液，但为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本专利技术中所述试剂R1中缓冲液1优选为包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸的水溶液，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，缓冲液的pH值为7.2－7.6。优选的，各组分在缓冲液1中的浓度为：所述缓冲液1的溶剂为水。所述缓冲液1可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。优选的，所述试剂R1中的稳定剂1选自KCl、NaCl、CaCl中的一种或者几种，其质量浓度为0.5％～10％；所述试剂R2中的稳定剂2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子稳定剂为NaCl、KCl、Na2CO3、Na2SO4或者K2SO4，悬浮稳定剂为PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖。优选的，所述试剂R1中的防腐剂1为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300；所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300。优选的，所述试剂R1中的促凝剂为PEG8000或者葡聚糖。优选PEG8000，是由于PEG8000属于非离子型水溶性聚合物，在水中的溶解性比较大，可以调节试剂R1的粘度，促进抗原和抗体分子结合为复合物。优选的，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径在100～500nm。优选表面官能团为羧基的聚苯乙烯胶乳微球，这是由于聚苯乙烯胶乳微球表面为羧基的官能团很容易被EDC活化增加偶联效果，保证测试结果的灵敏度及准确性。优选的，所述试剂R2中的D二聚体抗体为兔抗人D二聚体单克隆抗体、鼠抗人D二聚体单克隆抗体一种或者几种。优选两种鼠单克隆抗体，不要求是配对单抗。优选的，所述试剂R1中的保护剂1为EDTA，所述EDTA的浓度为10～100mmol/L；所述试剂R2中的保护剂2为牛血清白蛋白。本专利技术第二方面提供所述利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)试剂R1的制备：在缓冲液1中加入稳定剂1、促凝剂、防腐剂1、保护剂1，搅拌混合均匀，即得试剂R1；(2)试剂R2的制备：用标记缓冲液将聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％，再加入质量浓度为0.01％-0.1％的EDC，在室温下搅拌反应60min，反应结束后15000rpm离心洗涤以除去未反应的EDC，然后加入D二聚体单克隆抗体，37℃下搅拌反应4h，再加入终止液4h终止反应，将得到的反应液15000rpm离心、洗涤，最后用包括、稳定剂2、保护剂2、防腐剂2的缓冲液2将胶乳重悬。同样操作标记另一株单抗，两者按1:1混合后超声后即得R2。本专利技术第三方面提供所述利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒在D二聚体检测领域的用途。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：1.采用胶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2两种组分，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、促凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由缓冲液2、交联D二聚体单克隆抗体的聚苯乙烯胶乳微球、稳定剂2、保护剂2、防腐剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与D二聚体抗体之间以共价交联或物理吸附方式连接，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径在100～500nm。

【技术特征摘要】
1.一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2
两种组分，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、促凝剂和保护剂1组成；
所述试剂R2主要由缓冲液2、交联D二聚体单克隆抗体的聚苯乙烯胶乳微球、稳定剂2、
保护剂2、防腐剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与D二聚体抗体之间以共价交联或物理
吸附方式连接，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、
醛基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的粒径在100～500nm。
2.如权利要求1所述的一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其
特征在于，所述试剂R1中的缓冲液1选自Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲
液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种，其pH为
6.0～9.0，浓度为25～500mmol/L。
3.如权利要求1所述的一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其
特征在于，所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、
Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中的一种或几种，其pH为7.0～9.0，浓度
为25～500mmol/L。
4.如权利要求1所述的一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其
特征在于，所述试剂R1中的稳定剂1选自KCl、NaCl、CaCl中的一种或者几种，其质量
浓度为0.5％～10％。
5.如权利要求1所述的一种利用表面官能团的D二聚体乳胶增强免疫比浊检测试剂盒，其
特征在于，所述试剂R2中的稳定剂2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子
稳定剂为NaCl、KCl、Na2CO3、Na2SO4或者K2SO4，悬浮稳定剂为...

【专利技术属性】
技术研发人员：高昂，
申请(专利权)人：重庆中元生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85