本发明专利技术公开了一种TYR基因突变检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：针对G6895A位点的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10，针对C1205T位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12，针对C575A位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14，和/或针对A99214C位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种TYR基因突变检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：针对G6895A位点的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，针对C1205T位点的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12，针对C575A位点的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，和/或针对A99214C位点的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。【专利说明】TYR基因突变检测特异性引物和液相芯片
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种TYR基因突变检测特异性引物和液相芯片。
技术介绍
酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)位于11号染色体llql4.3长臂上,具体位于11号染色体88911039到89028926碱基对之间。酪氨酸酶(TYR)是一种75kD含铜酶，来源于胚胎神经峭细胞，是黑素代谢和儿茶酚胺的关键酶。有研究发现，眼皮肤白化病I型患者身上可以发现TYR基因100多种突变，这些突变破坏了黑色素的正常生成，从而降低了头发、皮肤和眼睛的着色。另外，酪氨酸酶可能是白癜风自身免疫的重要抗原。最近发现部分白癜风患者血清中有酪氨酸酶抗体，且与白癜风临床类型和分期密切相关。自身免疫性白癜风发病机制与酪氨酸酶抗体水平有关，为其免疫治疗提供依据。酪氨酸酶抗体可以作为白癜风活动性的一个指标。目前，TYR基因突变检测方法主要有=Illumina光纤微珠芯片技术、基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术(MALD1-T0F-MS)和荧光定量PCR技术，虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但也存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型，同样不能满足实际应用的需要，基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术是一种软电离技术，在蛋白质等生物大分子的检测中有着强大而成熟的功能，但是在核酸检测领域，由于核酸分子本身的特殊性，检测受到一定的限制，也难以满足实际应用的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种TYR基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测TYR基因四种常见基因型G6895A、C1205T、C575A和A99214C的野生型和突变型。实现上述目的的技术方案如下。一种TYR基因突变检测液相芯片，包括有:(A).针对TYR基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对:每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为:针对G6895A位点的SEQ ID N0.9及SEQ ID N0.10，针对C1205T位点的 SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12，针对 C575A 位点的 SEQ ID` N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 /或针对A99214C位点的SEQ ID N0.15及SEQ ID N0.16 ;所述tag序列选自SEQ ID N0.1~SEQ ID N0.8 ；(B).有不同ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID N0.17~SEQ IDN0.24,且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；( C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。在其中一个实施例中，所述扩增引物为:针对G6895A位点的SEQ ID N0.25及SEQID N0.26，针对 C1205T 位点的 SEQ ID N0.27 及 SEQ ID N0.28，针对 C575A 位点的 SEQ IDN0.29 及 SEQ IDN0.30，和 / 或针对 A99214C 位点的 SEQ ID N0.31 及 SEQ ID N0.32。在其中一个实施例中，所述ASPE引物对为:针对G6895A位点的由SEQ ID N0.1和SEQ IDN0.9组成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.10组成的序列，针对C1205T位点的由SEQ IDN0.3和SEQ ID N0.11组成的序列及由SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.12组成的序列，针对C575A位点的由SEQ ID N0.5和SEQ ID N0.13组成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.14组成的序列，和/或针对A99214C位点的由SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.15组成的序列及由SEQ ID N0.8和SEQ IDN0.16组成的序列。本专利技术的另一目的是提供用于TYR基因突变检测的特异性引物。实现该目的的技术方案如下。用于TYR基因突变检测的特异性引物，所述特异性引物为:针对G6895A位点的SEQIDN0.9 及 SEQ ID N0.10，针对 C1205T 位点的 SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12，针对 C575A位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或针对 A99214C 位点的 SEQ ID N0.15 及 SEQID N0.16。实现上述目的的技术方案如下。本专利技术的主要优点在于:1.本专利技术所提供的TYR基因突变检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100%，且检测所需要的时间远远低于常用的测序技术，特别符合实际应用需要。所制备的TYR基因突变检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的探针以及ant1-tag序列之间基本上不存在交叉反应，tag标签序列、ant1-tag标签序列的选取以及tag标签序列与具体ASPE引物的结合，能够避免交叉反应，实现多个突变位点的并行检测。2.本专利技术通过专利技术人长期积累的设计经验和大量的实验操作，从众多的特异性引物中选取了最优的组合。本专利技术设计的ASPE引物特异性引物能够灵敏特异地识别目标检测的突变位点，准确区分各种型别的基因型；在同一个反应体系中，不同的特异性引物之间、特异性引物与非目标检测的PCR扩增产物之间基本上不存在交叉反应，检测特异性好，交叉反应率低于3% ;除了能够检测单个位点突变情况，也能够同时并行检测多个突变位点的突变情况，检测效果一致。3.本专利技术的检测方法步骤简单，4种突变位点检测可通过一步PCR即可完成4条含有突变位点的目标序列的扩增，避免了反复多次PCR等复杂操作过程中存在的诸多不确定因素，因而可大大提高检测准确率，体现了精确的同时定性、定量分析特征。 4.本专利技术不仅克服了传统固相芯片敏感性不高，检测结果的可重复性差的缺陷，同时对现有的液相芯片技术进行改进，使得所制备微球能适用于不同的检测项目，具有很强的拓展性。检测的荧光信号值大大提高，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种TYR基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有：（A）.针对TYR基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对G6895A位点的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10，针对C1205T位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12，针对C575A位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14，和/或针对A99214C位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.8；（B）.有不同anti‑tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti‑tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti‑tag序列选自SEQ ID NO.17～SEQ ID NO.24，且所述anti‑tag序列能相应地与（A）中所选的tag序列互补配对；（C）.用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴诗扬，陈昌华，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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