一种α1-蛋白酶抑制剂的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种从低温乙醇分离法分离血浆蛋白产生的废弃组分——组分IV沉淀中制备α1-蛋白酶抑制剂的方法，采用的原料为废弃组分，生产成本低，提高了血资源的综合利用率，具有明显的经济效益；在纯化过程中采用PEG沉淀、氯化锌沉淀，羟基磷灰石层析和疏水层析两步层析法，可获得高纯度与高比活的α1-PI；在生产过程中采用具有高度成熟性、简便性与经济性的巴氏灭活法进行病毒灭活，保证了制品的安全性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种α1-蛋白酶抑制剂的制备方法。
技术介绍
先天性α1-抗胰蛋白酶缺乏症是世界范围内最常见的致死性遗传性疾病之一，以血清α1-蛋白酶抑制剂水平下降为特征，α1-蛋白酶抑制剂缺乏严重者的个体血浆中的α1-蛋白酶抑制剂浓度仅为正常人的15-20％，由于失去了α1-蛋白酶抑制剂的保护，肺泡结构中的弹性蛋白酶进行性破坏，从而使患者早年发生肺气肿的危险性增加。α1-蛋白酶抑制剂作为20世纪80年代才出现的一种人血浆制品，主要用于因先天性α1-抗胰蛋白酶缺乏引起的肺气肿患者的终身替补治疗和肺部炎症性疾病的防治，如慢性阻塞性肺气肿、肺囊性纤维化、急性肺损伤、成人呼吸窘迫综合症等。它还能与抗凝血酶III联合使用，治疗弥漫性血管内凝血，在临床上有广泛的应用前景。1988年α1-蛋白酶抑制剂替代治疗方法矫正α1-抗胰蛋白酶缺乏症获得美国卫生机构批准，多年的临床应用结果表明：对先天性α1-抗胰蛋白酶缺乏性肺气肿患者每周注射60mg/kg的α1-蛋白酶抑制剂进行补充治疗，对肺气肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备α1‑蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）称取组份IV沉淀，加入3‑6倍重量体积比的注射用水，控制pH值在5.0‑6.0之间，18‑25℃搅拌0.5‑1.5小时，固液分离，弃上清液；所述组份IV沉淀为低温乙醇分离法分离血浆蛋白产生的废弃组分。（2）收集步骤（1）所得沉淀，加入8‑12倍重量体积比注射用水，加入终浓度为0.02M‑0.08M的Tris碱粉、终浓度为0.005M‑0.015M的氯化钠，得到反应液，控制反应液的pH值在9.0‑9.5之间，18‑25℃下搅拌1‑3小时；（3）向步骤（2）所得反应液中加入终浓度为10％‑15％的PEG4000，调整pH值在4.8‑5...

【技术特征摘要】
1.一种制备α1-蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于包含以下步骤：
（1）称取组份IV沉淀，加入3-6倍重量体积比的注射用水，控制pH值在5.0-6.0
之间，18-25℃搅拌0.5-1.5小时，固液分离，弃上清液；所述组份IV沉淀为低温
乙醇分离法分离血浆蛋白产生的废弃组分。
（2）收集步骤（1）所得沉淀，加入8-12倍重量体积比注射用水，加入终浓度
为0.02M-0.08M的Tris碱粉、终浓度为0.005M-0.015M的氯化钠，得到反应液，
控制反应液的pH值在9.0-9.5之间，18-25℃下搅拌1-3小时；
（3）向步骤（2）所得反应液中加入终浓度为10％-15％的PEG4000，调整pH值
在4.8-5.6之间，18-25℃搅拌0.5-1.5小时，固液分离，取上清液；
（4）向步骤（3）所得上清液中加入氯化锌溶液，至氯化锌在上清液中的终浓度
为0.005-0.010M，用氢氧化钠调pH值至7.0-8.0，18-25℃搅拌1-3小时，固液分
离，取氯化锌沉淀；
（5）将步骤（4）所得氯化锌沉淀，用浓度为0.01-0.02M、pH值在6.5-7.0之
间，并且含有浓度为0.01M EDTA的磷酸盐缓冲液溶解后，上样，进行羟基磷灰
石柱层析：首先用浓度为0.01-0.02M、pH值在6.5-7.0之间的磷酸盐缓冲液进行
洗涤，然后再用浓度为0.04-0.10M、pH值在6.5-7.0之间的磷酸盐缓冲液进行洗
脱，并收集羟基磷灰石层析洗脱液；
（6）在羟基磷灰石层析洗脱液中加入硫酸铵，至终浓度为0.8-1.2M后，将其通
过苯基琼脂糖凝胶疏水层析柱，再用浓度为0.04-0.10M、pH值在6.5-7.0之间，
含质量为0.8-1.2M的硫酸铵的磷酸盐缓冲液洗涤，收集穿透峰；
（7）将疏水层析穿透峰收集液用10Kd分子截留量的膜包超滤浓缩至蛋白含量
1-2％，加入保护剂，进行巴氏消毒（60℃孵育10小时），所述保护剂为盐、糖、
氨基酸或其混合物；
（8）...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海，黄荣强，李振江，
申请(专利权)人：广东双林生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44