一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术还提供了增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因在治疗肾脏病药物制备过程中的应用。所述基因为胶质细胞源性神经营养因子GDNF。经GDNF修饰的AMSCs能够优化单纯脂肪间充质干细胞对于治疗肾脏纤维化、延缓肾衰竭进展的作用。本发明专利技术首次运用GDNF修饰的AMSCs来进行肾脏病相关研究，优化了干细胞治疗的方法，开拓了传统细胞治疗的新思路。

【技术实现步骤摘要】
一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因及其应用
本专利技术属于干细胞与肾脏疾病
，涉及一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因及其应用。
技术介绍
肾间质纤维化是各种原因所引起的肾脏疾病进展的必经通路,也是终末期肾病(ESRD)的共同病理状态。肾衰竭是各种慢性肾脏疾病发展到后期引起的肾功能部分或者全部丧失的一种病理状态。肾衰竭可分为急性肾衰竭及慢性肾衰竭，急性肾衰竭的病情进展快速，通常是因肾脏血流供应不足（如外伤或烧伤）、肾脏因某种因素阻塞造成功能受损或是受到毒物的伤害，引起急性肾衰竭的产生。而慢性肾衰竭主要原因为长期的肾脏病变，随着时间及疾病的进行，肾脏的功能逐渐下降，造成肾衰竭的发生。目前ESRD的治疗主要依靠透析和肾移植,但透析治疗并发症多,肾移植供体缺乏及移植后的终生免疫抑制剂治疗都限制了ESRD的治疗.因此探讨肾间质纤维化的治疗,以期延缓甚至阻断慢性肾脏病的进展意义重大。干细胞是一类具有自我更新、多系分化和高度增殖的细胞.近年来,随着对干细胞研究的逐渐深入,人们开始将干细胞应用于心、脑等多种疾病的治疗,而干细胞在肾间质纤维化的研究也为慢性肾脏病的治疗展现了新的方向。炎症反应贯穿急性肾衰竭发展至慢性肾脏病进展过程的始终，有效的抑制炎症反应，研究巨噬细胞在急性肾衰竭及慢性肾脏病中的作用及转归，能够促进干细胞治疗肾间质纤维化的研究进展。目前，研究尚且处于动物实验阶段，干细胞的注射剂量以及疗程时间仍然有待于探索。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因及其应用。该基因可以通过改善炎症反应从而达到改善肾纤维化的治疗目的。经GNDF基因修饰人脂肪间充质干细胞可以增强其对炎症反应的调节能力。优化了单纯干细胞治疗的方法，开拓了基因治疗肾脏疾病的新视野。其技术方案如下：一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因在冶疗肾脏病药物制备过程中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种能够增强人脂肪间充质干细胞（AMSCs）抗炎能力的基因——胶质细胞源性神经营养因子GDNF(ID:2668)。经GDNF修饰的AMSCs能够优化单纯脂肪间充质干细胞对于治疗肾脏纤维化、延缓肾衰竭进展的作用。本专利技术首次运用GDNF修饰的AMSCs来进行肾脏病相关研究，优化了干细胞治疗的方法，开拓了传统细胞治疗的新思路。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的技术方案。1.以慢病毒为载体进行GNDF基因过表达转染的时候，病毒校价、转染浓度进行合理的控制和调整。2.THP-1来源的巨噬细胞经过适当浓度的PMA、LPS、INF-γ诱导模拟体内炎症微环境。在巨噬细胞与干细胞进行共培养的时候，transwell上下小室内细胞比例需要不断摸索。3.将GDNF-AMSCs注射至UUO小鼠肾纤维化模型进行治疗时，干细胞注射剂量与治疗时间需要进行调控。(1)干细胞在体外呈一定规模的培养(2)慢病毒载体对干细胞的基因转染和修饰（GDNF慢病毒载体构建由上海吉凯基因化学技术有限公司完成）。(3)GDNF修饰的脂肪间充质干细胞的抗炎能力得到增强。经修饰的人脂肪间充质干细胞同时又能保持干细胞的多元性和重组基因的稳定性和安全性。体外细胞性能检测该专利技术的干细胞具有良好的重建功能，能够促进THP-1来源的巨噬细胞炎症表型的转化作用。通过PMA、LPS和INF-γ模拟人体内炎症微环境，诱导后的THP-1细胞经AMSCs与之的共培养之后，其M1巨噬细胞相关表型（TNF-α、iNOS，P<0.05）显著下降，部分M2相关指标（IL-4、IL-10；P<0.05）明显上升。经GDNF基因修饰后的脂肪间充质干细胞能够强化这种转化作用，使得炎症反应在细胞水平得到显著改善。(4)将AMSCs和GDNF-AMSCs分别移植到UUO(单侧输尿管梗阻)小鼠模型体内（n=6），观察到GDNF基因可以加强AMSCs改善炎症状态的作用（干细胞治疗组炎症指标COX-2、IL-6较UUO组明显减少，GDNF-AMSCs在治疗7天后改善更明显（P<0.05））。1.GDNF-AMSCs经过与THP-1来源的巨噬细胞共培养，可以促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化。2.将经GDNF改造过的AMSCs移植至UUO老鼠体内，发现其可以通过改善炎症反应从而达到治疗肾间质纤维化的目的。本专利技术通过对脂肪间充质干细胞进行基因修饰，能够更有效的改善巨噬细胞在体内所造成的炎症反应，从而更有利的延缓慢性肾脏病的进展。以上所述，仅为本专利技术最佳实施方式，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本专利技术的保护范围内。序列表<110>徐州医科大学附属医院<120>一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因及其应用<160>1<170>SIPOSequenceListing1.0<210>1<211>3810<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>1ccgcctccagcgcgcccttgctgccccgcgcgaccccaggattgcgaactcttgcccctg60acctgttgggcggggctccgcgctccagccatcagcccggatgggtctcctggctgggac120ttggggcacctggagttaatgtccaacctagggtctgcggagacccgatccgaggtgccg180ccgccggacgggactttaagatgaagttatgggatgtcgtggctgtctgcctggtgctgc240tccacaccgcgtccgccttcccgctgcccgccggtaagaggcctcccgaggcgcccgccg300aagaccgctccctcggccgccgccgcgcgcccttcgcgctgagcagtgactcaaatatgc360cagaggattatcctgatcagttcgatgatgtcatggattttattcaagccaccattaaaa420gactgaaaaggtcaccagataaacaaatggcagtgcttcctagaagagagcggaatcggc480aggctgcagctgccaacccagagaattccagaggaaaaggtcggagaggccagaggggca540aaaaccggggttgtgtcttaactgcaatacatttaaatgtcactgacttgggtctgggct600atgaaaccaaggaggaactgatttttaggtactgcagcggctcttgcgatgcagctgaga660caacgtacgacaaaatattgaaaaacttatccagaaatagaa本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种增强人脂肪间充质干细胞抗炎能力的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙东，
申请(专利权)人：徐州医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32