一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术还提供了增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因在治疗肾间质纤维化药物制备过程中的应用。所述基因为胶质细胞源性神经营养因子GDNF。GDNF作为一种外源性的大分子蛋白质，难以透过血脑屏障，并且在体内容易降解，故GDNF的基因治疗被认为是最有前途的给药途径之一，为临床治疗肾间质纤维化提供了一种转基因干细胞治疗新途经。

A gene and its application in enhancing the anti oxidative stress of amniotic fluid stem cells

The invention discloses a gene for enhancing the antioxidant stress ability of amniotic fluid stem cells and its application, and its nucleotide sequence is shown as SEQ ID NO:1. The invention also provides the application of genes that enhance the antioxidant stress ability of amniotic fluid stem cells in the preparation of drugs for treating renal interstitial fibrosis. The gene is glial cell line derived neurotrophic factor GDNF. As a exogenous macromolecule protein, it is difficult to penetrate the blood brain barrier and easily degrade in the body. Therefore, the gene therapy of GDNF is considered to be one of the most promising ways of administration, which provides a new route for the treatment of renal interstitial fibrosis in the clinical treatment of renal interstitial fibrosis.

【技术实现步骤摘要】
一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因及其应用
本专利技术属于干细胞与肾脏疾病
，涉及一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因及其应用。
技术介绍
肾间质纤维化是各种原因所引起的肾脏疾病进展的必经通路,也是终末期肾病(ESRD)的共同病理状态.目前ESRD的治疗主要依靠透析和肾移植,但透析治疗并发症多,肾移植供体缺乏及移植后的终生免疫抑制剂治疗都限制了ESRD的治疗.因此探讨肾间质纤维化的治疗,以期延缓甚至阻断慢性肾脏病的进展意义重大.干细胞是一类具有自我更新、多系分化和高度增殖的细胞.近年来,随着对干细胞研究的逐渐深入,人们开始将干细胞应用于心、脑等多种疾病的治疗,而干细胞在肾间质纤维化的研究也为慢性肾脏病的治疗展现了新的方向。研究尚且处于动物实验阶段，干细胞的注射剂量以及疗程时间仍然有待于探索。转基因干细胞冶疗肾间质纤维化的临床应用仍有一个漫长的探索阶段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因及其应用。以慢病毒为载体进行GNDF基因过表达转染的时候，病毒校价、转染浓度进行合理的控制和调整。其技术方案如下：一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因在冶疗肾间质纤维化药物制备过程中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种增强羊水干细胞（AFSCs）抗氧化应激能力的基因，所述基因为胶质细胞源性神经营养因子（GDNF），GDNF作为一种外源性的大分子蛋白质，难以透过血脑屏障，并且在体内容易降解，故GDNF的基因治疗被认为是最有前途的给药途径之一，为临床冶疗肾间质纤维化提供了一种转基因干细胞治疗新途经。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的技术方案。GDNF慢病毒载体的构建(由上海吉凯基因化学技术有限公司完成)。本专利技术将AFSCs和GDNF-AFSCs分别移植到单侧输尿管梗阻的小鼠模型体内（n＝12只），观察到GDNF可以增强AFSCs抗氧化应激能力，更好的促进受损肾脏微血管新生，改善组织的缺血缺氧状态，从而减轻肾间质纤维化。具体如下：（1）GDNF重组慢病毒载体可以高效转染AFSCs;（2）AFSCs在肾小管上皮细胞损伤微环境下可向肾小管上皮细胞分化。（3）GDNF可以增强AFSCs在体外向肾小管上皮细胞分化的能力。（4）GDNF基因修饰的AFSCs可以促进AFSCs的趋向、分化和增殖，使AFSCs更易迁移定位于受损的肾脏。（5）GDNF可以增强AFSCs抗氧化应激的能力（氧化应激指标Nitrotyrosine、UCP2、gp91-phox在GDNF-AFSCs组中的表达较同期AFSCs组表达减少（P<0.05）），从而更好的改善肾间质纤维化（纤维化指标TGFβ1、collagenI在GDNF-AFSCs组中的表达较同期AFSCs组表达减少（P<0.05））本专利技术发现AFSCs也可以通过抗氧化应激的途径来减轻肾间质纤维化，但从AFSCs干预后肾小管上皮细胞的增殖情况来看，AFSCs的肾脏分化能力并不是很强，因此引入GDNF基因，通过对羊水干细胞进行基因修饰，促进干细胞的趋向和分化，使AFSCs更易迁移定位于受损的肾脏，可以促进干细胞增殖，使AFSCs分泌更多的促再生因子，因此GDNF基因能够增强羊水干细胞（AFSCs）抗氧化应激能力，从而加强AFSCs移植对肾脏纤维化的治疗效果，更有利的延缓慢性肾脏病的进展。本专利技术将GDNF修饰的AFSCs通过尾静脉注入单侧输尿管梗阻的裸鼠体内，发现GDNF－AFSCs可以定位于梗阻侧肾脏，通过改善肾脏的低氧状态及减轻氧化应激反应来减轻肾间质纤维化程度。以上所述，仅为本专利技术最佳实施方式，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本专利技术的保护范围内。序列表<110>徐州医科大学附属医院<120>一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因及其应用<160>1<170>SIPOSequenceListing1.0<210>1<211>3810<212>DNA<213>人工序列(ArtificialSequence)<400>1ccgcctccagcgcgcccttgctgccccgcgcgaccccaggattgcgaactcttgcccctg60acctgttgggcggggctccgcgctccagccatcagcccggatgggtctcctggctgggac120ttggggcacctggagttaatgtccaacctagggtctgcggagacccgatccgaggtgccg180ccgccggacgggactttaagatgaagttatgggatgtcgtggctgtctgcctggtgctgc240tccacaccgcgtccgccttcccgctgcccgccggtaagaggcctcccgaggcgcccgccg300aagaccgctccctcggccgccgccgcgcgcccttcgcgctgagcagtgactcaaatatgc360cagaggattatcctgatcagttcgatgatgtcatggattttattcaagccaccattaaaa420gactgaaaaggtcaccagataaacaaatggcagtgcttcctagaagagagcggaatcggc480aggctgcagctgccaacccagagaattccagaggaaaaggtcggagaggccagaggggca540aaaaccggggttgtgtcttaactgcaatacatttaaatgtcactgacttgggtctgggct600atgaaaccaaggaggaactgatttttaggtactgcagcggctcttgcgatgcagctgaga660caacgtacgacaaaatattgaaaaacttatccagaaatagaaggctggtgagtgacaaag720tagggcaggcatgttgcagacccatcgcctttgatgatgacctgtcgtttttagatgata780acctggtttaccatattctaagaaagcattccgctaaaaggtgtggatgtatctgactcc840ggctccagagactgctgtgtattgcattcctgctacagtgcaaagaaagggaccaaggtt900cccaggaaatgtttgcccagaatggaagatgaggaccaaggaggcggaggaggaggaaga960agaagaggaggaggaggaggaggaggaggaggaggaggaaggcagccatcatgggagcct1020ggtagagggagatccagctacagacaactggacaggag本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种增强羊水干细胞抗氧化应激能力的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙东，
申请(专利权)人：徐州医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32