本发明专利技术提供一种人脐带间充质干细胞的无血清培养基，属于干细胞技术领域，包括DMEM基础培养基，还包括如下组分：重组人胰岛素、人血清白蛋白、转铁蛋白、纤维连接蛋白、维生素C、生物素、干细胞生长因子和干细胞因子。本发明专利技术提供的人脐带间充质干细胞的无血清培养基无需进行培养瓶包被，操作简便，细胞增殖速率高，且保持了良好的干细胞幼稚形态和干细胞特性，具有良好的细胞诱导分化潜能，降低了成本。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于干细胞
，涉及一种人脐带间充质干细胞的无血清培养基及其 制备方法。
技术介绍
人脐带间充质干细胞源自脐带华尔氏通胶，是具有明显可塑性和多向分化潜能的 一种成体干细胞，在不同生长因子的调节下，可分化成来源于3个胚层的不同组织细胞类 型，如脂肪细胞、成骨细胞、肝样细胞、心肌样细胞、神经胶质细胞、神经元细胞和胰岛样细 胞等。 干细胞生长因子（SCGF)是一种在骨髓造血微环境中起作用的早期造血刺激因子， 具有多种生物学活性，在组织的损伤修复和伤口愈合过程中有显著的作用。现有的人干细 胞生长因子有2种形式，即全长分子hSCGF-a和截短型分子hSCGF-P。市场上销售的重组 hSCGF-a和重组hSCGF-0主要由P印roTech公司生产。 干细胞因子（SCF)是重要造血细胞因子，是酪氨酸激酶受体C一Kit的配体。SCF 主要作用于早期造血干细胞、原始造血祖细胞，并且诱导这些细胞的存活、增殖和分化。 传统的含动物血清的干细胞培养基给干细胞的生产与科研带来多种不利因素。血 清能为干细胞提供生长增殖所需的激素、生长因子、转移蛋白和其它营养物质，但其存在诸 多缺点：批间差异较大，来源不稳定，需要大量验证工作，价格昂贵，成分不明确，不利于疫 苗和单克隆抗体等目的产品的分离纯化，容易被病毒和支原体感染等。 无血清培养基是在基础培养基的基础上，加入成分明确的血清替代成分，既能满 足干细胞的培养要求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素。因此，发展无血清培 养基是干细胞走向临床应用的重要条件。目前已有一些市售人脐带间充质干细胞无血清 培养基，但是现有市售无血清培养基存在细胞贴壁性差、细胞增殖不够理想、价格昂贵等缺 陷。比如Gibco无血清培养基、StemCELL无血清培养基的应用需要进行培养瓶包被，且培 养的细胞增殖速率不够理想。 中国专利申请CN104164404公开了一种人脐带间质干细胞培养基，该培养基以 a-MEM为基础培养基，添加的细胞因子及其他组分多达29种，组分非常复杂。 因此，现有技术存在细胞贴壁性差，组分过于复杂，细胞增殖速率不够理想等问 题。
技术实现思路
为解决现有技术中存在的细胞贴壁性差，组分过于复杂，细胞增殖速率不够理想 等问题，专利技术人通过大量试验筛选，得到一种人脐带间充质干细胞的无血清培养基，该培养 基无需进行培养瓶包被，操作简便，细胞增殖速率高，且保持了良好的干细胞幼稚形态和干 细胞特性，具有良好的细胞诱导分化潜能，降低了成本。 本专利技术的目的将通过下面的详细描述来进一步体现和说明。 本专利技术提供一种人脐带间充质干细胞的无血清培养基，包括DMEM基础培养基，还 包括如下组分及其浓度：重组人胰岛素l~l〇yg/mL、人血清白蛋白0. 2~3mg/mL、转铁蛋白 0? 1~10yg/mL、纤维连接蛋白l~20ng/mL、维生素C1. 5~50yg/mL、生物素 0? 1~10yg/mL、 干细胞生长因子〇. 5~10ng/mL和干细胞因子0. 5~10ng/mL。 上述组分及其浓度是专利技术人经大量试验筛选确定的，采用上述技术方案的人脐带 间充质干细胞的无血清培养基，无需添加动物血清，可以实现人脐带间充质干细胞的快速 增殖，维持良好的干细胞特性，具有良好的细胞诱导分化潜能。上述组分中，重组人胰岛素 可提高合成代谢能力，刺激细胞生长；人血清白蛋白能提供细胞生长所需的营养物质，还可 调节渗透压，保护细胞免受机械损伤；转铁蛋白是血浆中主要的铁传递蛋白，为细胞内化和 细胞代谢提供所需的铁；纤维连接蛋白（fibronectin)增强了人脐带间充质干细胞的贴壁 性能；维生素C和生物素是维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作 用，此外维生素C还可抗氧化；通过干细胞生长因子和细胞生长因子的协同作用则可促进 人脐带间充质干细胞的生长增殖，维持其干细胞特性，延缓老化的发生。 优选地，本专利技术提供的人脐带间充质干细胞的无血清培养基，包括DMEM基础培养 基，还包括如下组分及其浓度：重组人胰岛素2~8iig/mL、人血清白蛋白0.3~lmg/mL、转铁 蛋白2~10yg/mL、纤维连接蛋白5~15ng/mL、维生素C5~20yg/mL、生物素1~8yg/mL、干 细胞生长因子2~8ng/mL和干细胞因子2~8ng/mL。 优选地，本专利技术提供的人脐带间充质干细胞的无血清培养基，包括DMEM基础培养 基，还包括如下组分及其浓度：重组人胰岛素5yg/mL、人血清白蛋白0. 5mg/mL、转铁蛋白 5 1^/1111、纤维连接蛋白1〇1^/1]11、维生素(：1〇118/1]11、生物素3.5 118/1]11、干细胞生长因子 5ng/mL和干细胞因子5ng/mL。 优选地，所述DMEM基础培养基为高糖型DMEM基础培养基或低糖型DMEM基础培养 基。 优选地，本专利技术提供的人脐带间充质干细胞的无血清培养基还包括链霉素，链霉 素的浓度为100yg/mL。 优选地，所述干细胞生长因子为人干细胞生长因子-a。 相应地，本专利技术还提供人脐带间充质干细胞的无血清培养基的制备方法，包括如 下步骤：向DMEM基础培养基中，按所述浓度加入重组人胰岛素、人血清白蛋白、转铁蛋白、 纤维连接蛋白、维生素C、生物素、干细胞生长因子和干细胞因子，混匀，过膜除菌即得。 此外，本专利技术还提供人脐带间充质干细胞的无血清培养基在人脐带间充质干细胞 培养中的用途。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种新的人脐带间充质干 细胞的无血清培养基，与传统的含血清培养基和其他无血清培养基相比，本专利技术提供的培 养基无需进行培养瓶包被，操作简便，细胞增殖速率高，且保持了良好的干细胞幼稚形态和 干细胞特性，具有良好的细胞诱导分化潜能，降低了成本。本专利技术提供的制备方法简单，制 得的人脐带间充质干细胞的无血清培养基培养得到的人脐带间充质干细胞表现出优异的 细胞性能。【附图说明】 图1不同培养基培养得到的P3代人脐带间充质干细胞的形态。 图2不同培养基培养的人脐带间充质干细胞的细胞增殖曲线。图3不同培养基培养的人脐带间充质干细胞的成脂诱导分化染色结果图。图4不同培养基培养的人脐带间充质干细胞的成骨诱导分化染色结果图。【具体实施方式】 下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步详细说明。 本专利技术中的各组分均为常规市售产品，例如人干细胞生长因子-a(hSCGF-a)购 自美国peprotech公司，产品货号100-22A;干细胞因子（SCF)购自以色列ProSpec-Tany 公司，产品货号CYT-255。 本专利技术中，培养基1 :本专利技术实施例一提供的人脐带间充质干细胞的无血清培养 基；培养基2 :DMEM基础培养基+10%体积百分比的FBS;培养基3:LifeTecnology公司的 StemPro?MSCSFM无血清培养基，货号A10332-01。 实施例一人脐带间充质干细胞的无血清培养基 人脐带间充质干细胞的无血清培养基，包括高糖型DMEM基础培养基，还包括如下组分 及其浓度：重组人胰岛素5y当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人脐带间充质干细胞的无血清培养基，其特征在于：包括DMEM基础培养基，还包括如下组分及其浓度：重组人胰岛素 1~10μg/mL、人血清白蛋白 0.2~3mg/mL、转铁蛋白0.1~10μg/mL、纤维连接蛋白1~20ng/mL、维生素C 1.5~50μg/mL、生物素0.1~10μg/mL、干细胞生长因子0.5~10ng/mL和干细胞因子0.5~10ng/mL。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王一飞，廖晓凤，王巧利，刘秋英，
申请(专利权)人：广州暨南生物医药研究开发基地有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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