A型H5亚型流感病毒的检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了A型H5亚型流感病毒的检测试剂盒及其应用。其中，该流感病毒的检测试剂盒包括：基底层；第一包被膜，所述第一包被膜形成在所述基底层上，且包被有荧光标记的第一抗体，所述第一抗体特异性结合所述A型H5亚型流感病毒；第二包被膜，所述第二包被膜形成在所述基底层上，并与所述第一包被膜相连，所述第二包被膜上设置有分离的第一区域和第二区域，且第一区域位于近所述第一包被膜端，其中，所述第一区域包被有第二抗体，所述第二抗体和所述第一抗体能够特异性结合所述A型H5亚型流感病毒，所述第二区域包被有抗抗体，所述抗抗体能够特异性结合所述第一抗体。该试剂盒的检测灵敏度高、特异性强、速度快。

【技术实现步骤摘要】
A型H5亚型流感病毒的检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及病毒检测领域，具体地，涉及A型H5亚型流感病毒的检测试剂盒及其应用，更具体地，涉及A型H5亚型流感病毒的检测试剂盒和检测A型H5亚型流感病毒的方法
技术介绍
A型流感病毒即甲型流感病毒为常见流感病毒，甲型流感病毒容易发生变异，其亚型常被人们称为“禽流感”。禽流感是严重危害世界养禽业的毁灭性疫病，其病原容易突变，具有多个血清型，给该病的防控带来困难，病毒基因变异后能够感染人类，感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡。甲型流感H5亚型对人类致病性高,据WHO统计，人感染H5亚型的死亡率高达60％。目前常见的A型H5亚型流感病毒的检测方法主要有：核酸检测和病毒分离鉴定。核酸检测有RT-PCR检测和real-timeRT-PCR检测方法，核酸检测依赖于样本模板RNA的质与量，操作要求严格，需要大量仪器与设备及专业人员操作，检测时间较长，检测灵敏度高。病毒分离鉴定常用于对阳性样品病毒的亚型鉴定，需要专门实验室才能进行。由此，A型H5亚型流感病毒的检测方法有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种流感病毒的检测试剂盒，该试剂盒的检测灵敏度高、特异性强、能快速、简便地检测A型H5亚型流感病毒。因而，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种流感病毒的检测试剂盒。根据本专利技术的实施例，该试剂盒包括：基底层；第一包被膜，所述第一包被膜形成在所述基底层上，且包被有荧光标记的第一抗体，所述第一抗体特异性结合所述A型H5亚型流感病毒；第二包被膜，所述第二包被膜形成在所述基底层上，并与所述第一包被膜相连，所述第二包被膜上设置有分离的第一区域和第二区域，且第一区域位于近所述第一包被膜端，其中，所述第一区域包被有第二抗体，所述第二抗体和所述第一抗体能够特异性结合所述A型H5亚型流感病毒，所述第二区域包被有抗抗体，所述抗抗体能够特异性结合所述第一抗体。根据本专利技术实施例的试剂盒，专利技术人通过对大量A型H5亚型流感病毒的抗体进行筛选，获得能同时特异性结合于A型H5亚型流感病毒的两种抗体，即本专利技术的两种抗体(即第一抗体和第二抗体)能与抗原的不同表面决定簇特异性结合，从而形成双抗体夹心复合物，基于检测复合物中的第一抗体上带的荧光标记的荧光强度来判断样品中是否存在所说的抗原。该试剂盒的检测灵敏度高、特异性强，检测时间短，检测成本低，易于操作和推广。另外，根据本专利技术上述实施例的流感病毒的检测试剂盒，还可以具有如下附加的技术特征：根据本专利技术的实施例，该方法进一步包括：吸水垫，所述吸水垫与所述第二包被膜的远所述第一包被膜端相连。根据本专利技术的实施例，所述第一抗体和所述第二抗体均为单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，所述第一抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-25的单克隆抗体，所述第二抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-39的单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，所述第一抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-35的单克隆抗体，所述第二抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-71的单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，所述第一抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-39的单克隆抗体，所述第二抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-25的单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，所述第一抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-25的单克隆抗体，所述第二抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-22的单克隆抗体。根据本专利技术的实施例，所述荧光标记为荧光微球标记。根据本专利技术的实施例，所述荧光微球的平均直径为10-500nm。根据本专利技术的优选实施例，所述荧光微球的平均直径为20-300nm。根据本专利技术的更优选实施例，所述荧光微球的平均直径为100-120nm。根据本专利技术的实施例，所述第一抗体与所述荧光微球标记通过肽键共价结合。根据本专利技术的实施例，所述抗抗体为羊抗鼠IgG抗体。根据本专利技术的实施例，所述第一包被膜为玻璃纤维素膜，所述第二包被膜为硝酸纤维素膜。根据本专利技术的另一方面，本专利技术提供了一种检测流感病毒的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括，将待测样本与前述A型H5亚型流感病毒的检测试剂盒中的第一包被膜接触；检测所述试剂盒中的第一区域和第二区域的荧光强度，获得第一区域荧光检测值和第二区域荧光检测值；基于所述第一区域荧光检测值和第二区域荧光检测值，判定所述待测样本中是否存在A型H5亚型流感病毒。由此，利用该方法检测A型H5亚型流感病毒，检测的灵敏度高、特异性强，检测时间短，检测成本低，易于操作和推广。根据本专利技术的实施例，将荧光强度比值与阈值进行比较，判定所述待测样本中是否存在A型H5亚型流感病毒，其中，所述荧光强度比值＝第一区域荧光检测值/第二区域荧光检测值。根据本专利技术的实施例，所述阈值为0.01-0.03。根据本专利技术的优选实施例，所述阈值为0.018。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1显示了根据本专利技术一个实施例的流感病毒的检测试剂盒的主视结构示意图；图2显示了根据本专利技术一个实施例的流感病毒的检测试剂盒的侧视结构示意图；图3显示了根据本专利技术一个实施例的流感病毒的检测试剂盒的主视结构示意图；图4显示了根据本专利技术一个实施例的制备流感病毒的检测试剂盒的方法的流程示意图；图5显示了根据本专利技术一个实施例的流感病毒的检测试剂盒的检测值与浓度的曲线示意图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。在本专利技术的描述中，术语“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术而不是要求本专利技术必须以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本专利技术的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。试剂盒根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种流感病毒的检测试剂盒。专利技术人通过对大量A型H5亚型流感病毒的抗体进行筛选，获得能同时特异性结合于A型H5亚型流感病毒的两种抗体，即本专利技术实施例的两种抗体(即第一抗体和第二抗体)能与抗原的不同表面决定簇特异性结合，从而形成双抗体夹心复合物，基于检测复合物中的第一抗体上带的荧光标记的荧光强度来判断样品中是否存在所说的抗原。该试剂盒的检测灵敏度高、特异性强，检测时间短，检测成本低，易于操作和推广。为了便于理解本专利技术实施例的试剂盒，参考图1和2，根据本专利技术的实施例，对该试剂盒进行解释说明，具体如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种流感病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括：基底层；第一包被膜，所述第一包被膜形成在所述基底层上，且包被有荧光标记的第一抗体，所述第一抗体特异性结合所述A型H5亚型流感病毒；第二包被膜，所述第二包被膜形成在所述基底层上，并与所述第一包被膜相连，所述第二包被膜上设置有分离的第一区域和第二区域，且第一区域位于近所述第一包被膜端，其中，所述第一区域包被有第二抗体，所述第二抗体和所述第一抗体能够特异性结合所述A型H5亚型流感病毒，所述第二区域包被有抗抗体，所述抗抗体能够特异性结合所述第一抗体。

【技术特征摘要】
1.一种流感病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括：基底层；第一包被膜，所述第一包被膜形成在所述基底层上，且包被有荧光标记的第一抗体，所述第一抗体特异性结合所述A型H5亚型流感病毒；第二包被膜，所述第二包被膜形成在所述基底层上，并与所述第一包被膜相连，所述第二包被膜上设置有分离的第一区域和第二区域，且第一区域位于近所述第一包被膜端，其中，所述第一区域包被有第二抗体，所述第二抗体和所述第一抗体能够特异性结合所述A型H5亚型流感病毒，所述第二区域包被有抗抗体，所述抗抗体能够特异性结合所述第一抗体。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，进一步包括：吸水垫，所述吸水垫与所述第二包被膜的远所述第一包被膜端相连。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体和所述第二抗体均为单克隆抗体。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-25的单克隆抗体，所述第二抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-39的单克隆抗体，任选地，所述第一抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-35的单克隆抗体，所述第二抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-71的单克隆抗体，任选地，所述第一抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-39的单克隆抗体，所述第二抗体为购自昆明云大单抗中心的编号为F5-25的单克隆抗体，任...

【专利技术属性】
技术研发人员：马岚，吴峰，岑瑜，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，
类型：发明
国别省市：广东,44