一种LncRNA在糖尿病预后评估和反复流产预警中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种LncRNA在糖尿病预后评估和反复流产预警中的应用。本发明专利技术提供了用于检测LncRNA EPB41L4A‑AS1的物质在如下(A1)或(A2)中的应用：(A1)制备用于糖尿病预后评估的产品，或糖尿病预后评估；(A2)制备用于反复流产预警的产品，或反复流产预警。其中，所述LncRNA EPB41L4A‑AS1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。本发明专利技术提示lncRNA EPB41l4A‑AS1对于糖尿病预后评估和反复流产预警具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种LncRNA在糖尿病预后评估和反复流产预警中的应用
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种LncRNA在糖尿病预后评估和反复流产预警中的应用。
技术介绍
人类基因组存在大量的不编码蛋白的DNA序列，其中80％以上的非编码序列会转录出非编码蛋白的RNA转录本被称为非编码核酸(ncRNA)。分子量大于200核苷酸的称为长非编码核酸(lncRNA)。近年来的研究发现lncRNA在调节机体的生理和病理过程中发挥重要作用。糖尿病是一种常见的代谢性疾病，近年来随着社会经济的发展糖尿病的发病率进一步攀升。国际糖尿病联盟公布2017年全球糖尿病患者已达到4.25亿，到2045年预计可能达到6.29亿，其中中国糖尿病患者可能达到1.144亿，成为患者数量最多的国家。所以糖尿病的预防，诊断和治疗，已成为急需解决的重大社会问题。反复性流产为自然流产连续3次以上者，每次流产往往发生在同一妊娠月份。引起反复性流产的病因复杂，临床上竟有43种疾病最终可导致反复性流产的发生，有免疫性因素、遗传性因素、感染性因素、内分泌性因素、解剖因素等，而其中免疫性因素导致的流产占反复性流产的67％之多。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种LncRNA在糖尿病预后评估和反复流产预警中的应用。第一方面，本专利技术要求保护用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在如下(A1)或(A2)中的应用：(A1)制备用于糖尿病预后评估的产品，或糖尿病预后评估；(A2)制备用于反复流产预警的产品，或反复流产预警。第二方面，本专利技术要求保护用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在如下任一中的应用：(a1)制备用于诊断高血糖刺激的无菌性炎症是否存在的产品，或诊断高血糖刺激的无菌性炎症是否存在；(a2)制备用于对糖尿病的加重进行预警的产品，或对糖尿病的加重进行预警；(a3)制备用于对糖尿病的血管并发症进行预警的产品，或对糖尿病的血管并发症进行预警；(a4)制备用于对糖尿病的血管内皮氧化损伤进行预警的产品，或对糖尿病的血管内皮氧化损伤进行预警。糖尿病患者，长期的血管内皮损伤会引起血管内皮并发症进而加重糖尿病病情。在前述第一方面和第二方面中，所述用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质可为引物对或试剂盒等。其中，所述引物对可为如下任一引物对：(b1)由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链DNA组成的引物对；(b2)由将SEQIDNo.1和SEQIDNo.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的两条单链DNA分子组成的，且与(b1)中所述引物对功能相同的引物对。在本专利技术的具体实施方式中，所述试剂盒具体为用于检测所述LncRNAEPB41L4A-AS1的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，含有所述引物对。具体的，所述试剂盒含有荧光RT-PCR反应液A和荧光RT-PCR反应液B；所述荧光RT-PCR反应液A中含有DNA聚合酶、dNTP、镁离子及缓冲体系等；所述荧光RT-PCR反应液B中含有所述引物对和荧光探针等。第三方面，本专利技术要求保护用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在如下任一中的应用：(c1)制备用于检测糖尿病患者(如二型糖尿病患者)外周血中炎症性因子表达水平的产品，或者检测糖尿病患者外周血中炎症性因子表达水平(如外周血单核细胞中炎症性因子表达水平)；(c2)制备用于检测经高糖(如30mM的D-葡萄糖)或LPS诱导(如1μg/ml的LPS)处理的免疫细胞中炎症性因子表达水平的产品，或者检测经高糖处理的免疫细胞中炎症性因子表达水平。进一步地，所述免疫细胞可为单核细胞或淋巴细胞。在本专利技术的具体实施方式中，所述单核细胞为THP-1细胞；所述淋巴细胞为JURKAT细胞。在(c1)和(c2)中，如果测得所述LncRNAEPB41L4A-AS1的表达水平低于正常对照组，则所述炎症性因子表达水平高于或候选高于正常对照组。其中，所述正常对照组可如未患有糖尿病的健康人或者未经高糖(或LPS诱导)处理的免疫细胞。第四方面，本专利技术要求保护用于抑制LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在制备具有如下表型的细胞模型中的应用：经高糖(如30mM的D-葡萄糖)或LPS诱导(如1μg/ml的LPS)处理后，胞内炎症性因子表达水平升高。进一步地，所述细胞可为免疫细胞；更进一步地，所述免疫细胞可为单核细胞；更加具体地，所述单核细胞可为THP-1细胞。第五方面，本专利技术要求保护用于抑制LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在制备用于增强因炎症反应所致的细胞内氧化损伤的产品，或增强因炎症反应所致的细胞内氧化损伤中的应用。其中，所述产品可为细胞模型或动物模型。可用于药物筛选等。进一步地，所述细胞可为绒毛细胞(如HTR-8/SVneo细胞)或胰岛细胞(如Beta-TC-6细胞)或血管内皮细胞(如HUV-EC-C[HUVEC]细胞)。第六方面，本专利技术要求保护LncRNAEPB41L4A-AS1表达水平降低的免疫细胞制备用于增强因炎症反应所致的细胞内氧化损伤的产品，或增强因炎症反应所致的细胞内氧化损伤中的应用。其中，所述产品可为细胞模型或动物模型。可用于药物筛选等。在本专利技术具体实施方式中，所述免疫细胞具体为THP-1细胞。相应的，所述LncRNAEPB41L4A-AS1表达水平降低的免疫细胞具体为向THP-1细胞中导入siEPB41L4A-AS1后获得的；所述siEPB41L4A-AS1由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的两条单链退火形成。在前文第四方面和第五方面中，所述用于抑制LncRNAEPB41L4A-AS1的物质具体可为siEPB41L4A-AS1；所述siEPB41L4A-AS1由SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的两条单链RNA退火形成。在前文第五方面和第六方面中，所述增强因炎症反应所致的细胞内氧化损伤具体可体现为增加因炎症反应所致的细胞内ROS水平。在本专利技术的具体实施方式中，所述炎症反应具体为由高糖(如30mMD-葡萄糖)或LPS诱导所致(LPS的诱导浓度可为100-200ng/ml)。第七方面，本专利技术还要求保护前文所述引物对或所述试剂盒。在前文各方面中，所述LncRNAEPB41L4A-AS1均可为如下任一：(B1)SEQIDNo.5所示的RNA；(B2)将SEQIDNo.5所示的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的RNA；(B3)与(B1)或(B2)所限定的核苷酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的RNA。在前文各方面中，所述炎症性因子均可为如下：IL1β，IL-8、TNF-α和/或IL-16。本专利技术研究发现：lncRN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测LncRNA EPB41L4A-AS1的物质在如下(A1)或(A2)中的应用：/n(A1)制备用于糖尿病预后评估的产品，或糖尿病预后评估；/n(A2)制备用于反复流产预警的产品，或反复流产预警。/n

【技术特征摘要】
1.用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在如下(A1)或(A2)中的应用：
(A1)制备用于糖尿病预后评估的产品，或糖尿病预后评估；
(A2)制备用于反复流产预警的产品，或反复流产预警。


2.用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在如下任一中的应用：
(a1)制备用于诊断高血糖刺激的无菌性炎症是否存在的产品，或诊断高血糖刺激的无菌性炎症是否存在；
(a2)制备用于对糖尿病的加重进行预警的产品，或对糖尿病的加重进行预警；
(a3)制备用于对糖尿病的血管并发症进行预警的产品，或对糖尿病的血管并发症进行预警；
(a4)制备用于对糖尿病的血管内皮氧化损伤进行预警的产品，或对糖尿病的血管内皮氧化损伤进行预警。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质为引物对或试剂盒；
所述引物对为如下任一引物对：
(b1)由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链DNA组成的引物对；
(b2)由将SEQIDNo.1和SEQIDNo.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的两条单链DNA分子组成的，且与(b1)中所述引物对功能相同的引物对；
所述试剂盒为用于检测所述LncRNAEPB41L4A-AS1的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，含有所述引物对。


4.用于检测LncRNAEPB41L4A-AS1的物质在如下任一中的应用：
(c1)制备用于检测糖尿病患者外周血中炎症性因子表达水平的产品，或者检测糖尿病患者外周血中炎症性因子表达水平；
(c2)制备用于检测经高糖或LPS诱导处理的免疫细胞中炎症性因子表达水平的产品，或者检测经高糖或LPS诱导处理的免疫细胞中炎症性因子表达水平；
进一步地，所述免疫细胞为单核细胞或淋巴细胞；
更进一步地，所述单核细胞为THP-1细胞；所述淋巴细胞为JURKAT细胞。

【专利技术属性】
技术研发人员：张雅鸥，廖卫捷，刘福海，王紫晴，胡绍良，许乃寒，谢伟东，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，深圳市康百得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44