一种激肽释放酶注射液制造技术

本发明专利技术提供了一种激肽释放酶注射液，所述的注射液中含有：(1)激肽释放酶0.1‑10PNA单位/mL；(2)缓冲液5‑50mM，pH＝6.0‑7.0；(3)渗透压调节剂0.1‑5％，w/v(以注射液制剂的总体积为基准)；(4)蛋白酶保护剂0.001‑10％，w/v(以注射液制剂的总体积为基准)。本发明专利技术提供含有激肽释放酶的注射液中不含防腐剂，不会因为防腐剂的使用使蛋白酶的活性降低，并且得到的注射液稳定性依然很高；本发明专利技术提供的激肽释放酶注射液的制备方法，所用配方简单，操作简便，成本低，不污染环境，使用特定的蛋白酶保护剂并调节各成分的比例，使制备的注射液稳定性高、杂质少、副作用低，安全性高，适合大批量生产。

A kind of kallikrein injection

The invention provides a kallikrein kinin injection, the injection contains: (1) kallikrein 0.1 10PNA /mL; (2) buffer 5 50mM, pH = 6 7; (3) osmotic pressure regulator 0.1 5% w/v (the total injection volume as a benchmark); (4) 0.001 protease protection agent 10%, w/v (in total volume of injection for reference). The invention provides a preservative free injection containing kallikrein, not because of the use of preservatives to reduce the protease activity, stability and injection is still high; preparation method of the invention provides the kinin kallikrein injection, the formula is simple, easy operation, low cost, no pollution to the environment. The use of protease specific protective agent and adjusting the ratio of each component, the preparation of high injection stability, less impurity, low side effect, high safety, suitable for mass production.

【技术实现步骤摘要】
一种激肽释放酶注射液
本专利技术涉及生物制剂领域，更具体地涉及稳定的激肽释放酶注射液。
技术介绍
激肽释放酶是一组存在于多数组织和体液中的丝氨酸蛋白酶，是一种肽链内切酶。它特异性的在碳末端切割底物肽，可裂解激肽原释放具有活性的激肽，由激肽发挥扩张毛细血管、松弛血管平滑肌、改善微循环、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和血压，以及具有治疗不孕不育症等作用。其英文名为Kallikrein与Kininogenase、Kallidinogenase、Kininogenin所描述的都是同一类成分。目前已经从人和动物体的不同组织、器官或尿液中获得许多Kallikrein类成分，其中将含量最高，发现也最早的命名为Kallikrein-1(激肽释放酶-1)。该成分在人或哺乳动物的胰腺和肾脏中含量最高，其代谢后又通过肾脏，随尿排出体外。因此，从人或动物尿中分离出来的早年所称的尿激肽原酶(或尿激肽释放酶)实际上就是新分类中的激肽释放酶(Kallikrein)。不同来源的激肽释放酶，其分子量差别很大。例如，从人尿中或胰腺中分离出的人激肽释放酶，其分子量为33800。而通过基因方法获得的重组人激肽释放酶的分子量从26000-35000不等，这主要取决于采用的表达方式(E.cli、酵母、昆虫细胞、CHO细胞等)以及表达的方式(细胞内或分泌表达)等不同，蛋白糖基化的修饰方式、修饰程度不同以及纯化方式对糖链影响等引起的差异。例如，E.cli或酵母细胞内表达出的激肽释放酶其分子量约为26000，而CHO细胞表达的激肽释放酶可达到35000左右。本专利技术中的激肽释放酶可以使天然提取或重组的，可以是尿激肽原酶或胰激肽原酶，优选地是重组激肽释放酶。目前激肽释放酶制剂主要有两种形式，注射液制剂和冻干粉制剂。这两个形式的制剂各有利弊。冻干粉制剂脱去了水分，活性成分和辅料以干粉状态存在，其稳定性相对于注射液制剂更高，因此易于保存运输。例如，中国专利申请200910131861中公开了一种用甘露醇、柠檬酸钠与人尿激肽原酶制成注射液，已达到保持主药活性的作用。然而注射液制剂在制备过程中需要加入大量辅料，例如赋形剂、防腐剂保护剂等等。一方面大量辅料可能会成为潜在过敏原，引起各种不良反应。按照WHO国际药物监测合作中心的规定，药物不良反应(AdverseDrugReactions，ADR)指正常剂量的药物用于预防、诊断、治疗疾病或调节生理机能时出现的有害的和与用药目的无关的反应。目前关于激肽释放酶注射液不良反应的报告主要为：心脑血管系统不良反应(例如皮肤潮红、血压下降、结膜充血、胸闷、伴发心绞痛等)、神经系统不良反应(头痛、出汗、头晕、乏力)、消化系统不良反应(恶心、呕吐、腹泻、上消化道出血)、全身性不良反应(发热等)以及其他不良反应(剧烈咳嗽、皮疹等)。也曾出现过严重的不良反应报告，例如梗死灶内出血，甚至患者死亡。上述药物不良反应可能会引起用药者的身体不适，甚至致使病情恶化，引发新的疾病。另一方面，注射液制剂在使用时需要进行复溶，复溶需要一定的时间，且复溶效果的好坏直接影响了药物的疗效，因此对于一些需要紧急用药的病例而言，注射液针剂稍显不便。注射液制剂是将活性成分激肽释放酶与少量辅料(例如缓冲液等)溶解于注射用水制成的药物制剂。其优势是一方面不需要复溶即可直接使用，另一方面由于其中没有注射液使用的赋形剂等大量辅料，因此其不良反应报告往往比注射液针剂小。但是目前激肽释放酶注射液以液体形式存在，因此稳定性不如冻干粉制剂，为了提高其稳定性，不得不添加各种保护剂以及防腐剂。例如，中国专利申请200810038422中公开了一种稳定的激肽释放酶-1注射液，该注射液中除含有主药激肽释放酶-1、磷酸盐缓冲液、氯化钠和蛋白酶保护剂，另外还含有一定量的防腐剂，一方面，防腐剂对活性成分激肽释放酶的催化活力有无影响还未可知；另一方面，作为注射药物，存在防腐剂，意味着存在一定程度的致敏风险。因此，为了解决上述技术问题，需要开发出一种辅料成分少、稳定性高、同时不良反应发生率低的激肽释放酶注射液，才能够满足实际临床应用对便捷、安全和稳定的需求。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种辅料成分少、稳定性高、同时不良反应发生率低的激肽释放酶注射液。本专利技术的另一个目的是提供上述激肽释放酶注射液的制备方法。术语：1、激肽释放酶：根据本领域的常规使用惯例，本专利技术中使用的术语″激肽释放酶″，可与″激肽释放酶原″或″激肽原酶″互换使用；在以上名称前冠以来源方式(例如重组激肽释放酶或天然提取激肽释放酶)，或来源代谢产物(如胰激肽释放酶或尿激肽释放酶)等，均与本专利技术中所涉及的激肽释放酶这一术语指代的是同一种成分。它是一种丝氨酸蛋白酶，可作用于激肽原，使之水解释放出激肽，通过激肽发挥扩张毛细血管、松弛血管平滑肌、改善微循环、增加血流量、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和血压等作用。根据本领域的国际惯例，激肽释放酶的英文名可以为Kallikrein、Kininogenase、Kallidinogenase或Kininogenin，不过目前多用Kallikrein一词。2、缓冲液：本专利技术中使用的术语″缓冲液″指由能起pH缓冲作用的一种化合物或多种化合物的组合物配制的溶液，其配置均采用无菌纯化水。定义：1、在本专利技术中，1PNA单位被定义为：在37℃、pH8.0的条件下，1分钟水解1μmolVal-Leu-Arg-PNA所用的激肽释放酶量为1PNA单位。2、w/v：本专利技术中所使用到的″w/v″指重量体积比，具体指某物质的前的百分数或百分数范围为其重量比溶液体积得到的百分数或百分数范围。例如″渗透压调节剂0.9％-5％，w/v；″指渗透压调节剂的重量比溶液体积的百分数范围为0.9％-5％。一方面，本专利技术提供了一种激肽释放酶注射液，所述的激肽释放酶注射液中含有：优选地，所述的激肽释放酶注射液中含有：进一步优选地，所述的激肽释放酶注射液中含有：本专利技术提供的激肽释放酶注射液中，所述的缓冲液选自磷酸盐缓冲液和枸橼酸盐缓冲液中的一种。所述的磷酸盐缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。所述的枸橼酸盐缓冲液为枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液。本专利技术提供的激肽释放酶注射液中，所述的渗透压调节剂可以选自氯化钠、甘露醇或葡萄糖中的一种或几种；优选为氯化钠或葡萄糖中的一种或两种。在本专利技术提供的激肽释放酶注射液中，氯化钠的用量为0.1-0.9％，w/v；优选为0.2-0.9％，w/v；进一步优选为0.3-0.9％，w/v。在本专利技术提供的激肽释放酶注射液中，甘露醇的用量为0.1-2.5％，w/v；优选为1-2.5％，w/v；进一步优选为1.5-2.5％，w/v。在本专利技术提供的激肽释放酶注射液中，葡萄糖的用量为0.1-5％，w/v；优选为1-5％，w/v；进一步优选为2-5％，w/v。在一些优选的实施方案中，上述各种渗透压调节剂在本专利技术提供的激肽释放酶注射液中的重量比为氯化钠∶甘露醇∶葡萄糖＝10∶2∶50。本专利技术提供的激肽释放酶注射液中，所述的蛋白酶保护剂选自甘露醇、右旋糖苷、甘氨酸、蔗糖和海藻糖中的一种或几种。优选为甘露醇、甘氨酸和海藻糖中的一种或几种。甘露醇是山梨糖醇的同分异构体，两种醇类物质的二号碳原子上羟基朝向不同，分子式是C6H1406，分子量为1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种激肽释放酶注射液，其特征在于：所述的激肽释放酶注射液中含有：

【技术特征摘要】
1.一种激肽释放酶注射液，其特征在于：所述的激肽释放酶注射液中含有：2.根据权利要求1中所述的注射液，其特征在于：所述的缓冲液选自磷酸盐缓冲液和枸橼酸盐缓冲液中的一种。3.根据权利要求1中所述的注射液，其特征在于：所述的渗透压调节剂选自氯化钠、甘露醇或葡萄糖中的一种或几种。4.根据权利要求3所述的注射液，其特征在于：所述的渗透压调节剂为氯化钠和葡萄糖，其重量比为氯化钠∶葡萄糖＝10∶50。5.根据权利要求1中所述的注射液，其特征在于：所述的蛋白酶保护剂选自甘露醇、右旋糖苷、甘氨酸、蔗糖和海藻糖中的一种或几种。6.根据权利要求5所述的注射液，其特征在于：所述的蛋白酶保护剂为甘露醇和甘氨酸，其重量比为甘露醇∶甘氨酸＝3∶2。7.根据权利要求1中所述的注射液，其特征在于：所述注射液还包括强化剂，所述强化剂选自甲硫氨酸、精氨酸、烟酰胺和维生素B6中的一种或几种。8.根据权利要求7所述的注射液，其特征在于：所述的强化剂为甲硫氨酸和精氨酸。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：王旭，郑少亮，许文勤，肖益热，
申请(专利权)人：广东天普生化医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44