本发明专利技术涉及一种体外诊断支气管肺癌尤其是非小细胞支气管癌的方法，其特征在于它包括在来自疑患所述支气管肺癌的患者的生物学样品中检测编码激肽释放酶８的ＫＬＫ８基因的至少一种主要选择性转录物的步骤。这种方法尤其可用于支气管肺癌患者的生存率预测。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过检测编码激肽释放酶8的虹KS基因的主要选择性转录物的体外诊断 支气管肺癌的方法及其预测生存率的用途本专利技术涉及癌学领域。更具体的，本专利技术的主题是通过测定超过预定 阈值的来自所述患者的生物学样品中激肽释放酶8的虹尺S基因的主要转 录物的存在体外诊断患者原发性支气管肺癌的方法。在人类社会以及所有发达国家中，原发性支气管肺癌是癌症死亡的主 要原因。最近的数据显示其在妇女中发病率显著增加。每年新增病例的数 量在法国估计为25000例，在美国超过160000例，导致每年在法国大约 22000例个体的死亡，在美国大约155000例个体的死亡。世界范围内，认 为支气管肺癌每年造成大约卯OOOO例死亡，这相当于癌症导致死亡的大约 18%。支气管肺癌的主要病因是烟草成瘾。男性中大约90%的支气管癌以及女性中大约50%的支气管癌由烟草造成。其他的环境或者职^da素在支气管致癌作用中的作用也是公认的。世界卫生组织(WHO)区分了小细胞支气管癌(SCBC)(代表大约20%的 病例)和非小细胞支气管癌(NSCBC)(尤其包括表皮样癌、腺癌和大细胞 癌，代表大约80%的病例)。表皮样癌和腺癌是最普遍的癌。目前，基本上通过肺部放射照相和胸部扫描进行支气管肺癌的诊断。 支气管内窥镜检查使活检成为可能，然后确诊。令人遗憾的是，指示性症 状是延迟的而且不是非常特异的，在晚期才获得诊断结果，因此极大削弱 了现有疗法的效果和可行性。此外，这种类型的诊断需要代价昂贵的先进 设备和合格人员。现在已有各种治疗方法手术，化疗和放疗。这些治疗可以分别进 行、连续进行或者组合进行。肺癌的存活率很大程度上决定于诊断时肿瘤的扩散程度。5年的总存 活率只有15%。但是，该存活率掩盖了实质上的差异。诊断时癌已经远程 转移的患者的存活率低于5%，而在发现时非小细胞癌(NSCBC)集中的患 者存活率接近50。/。1。后者通过手术切除肿瘤可以基本上治愈，这是代表当5前唯一能治愈这类癌症的解决办法。但是，少于l/3的患者能够接受这种治 疗，而接受手术治疗的患者中有l/2在手术后那个月因为肿瘤复发死亡。最 近在NSCBC的现代化化疗领域的进展使设计辅助或者新-辅助疗法来提高 患者(已经过手术)的预期寿命成为可能2。但是，这种治疗不是那么简单 的，其相关死亡率不能被忽视。由于这个原因，重要的是能够鉴定因为复 发而显示死亡高风险的可行手术的患者，以便易于决定是否给予新-辅助或 者辅助化疗。对于全部癌症尤其是支气管肺癌来说，数年来一直在寻找和研究能够 区分肿瘤细胞和健康细胞的标记。它们将使以下成为可能在早期诊断疾 病，确定其预后和对治疗的敏感度，以及监测其进展。近年来，已经有超 过100种候选物被建议作为支气管肺癌诊断的分子标记。因此所述研究设 想了涉及细胞周期、凋亡或者血管发生的原癌基因、因子的诊断作用。但 是，基于使用的技术(免疫组织化学，免疫分析，利用各种算法的DNA芯 片)和肿瘤的复杂多样性(组织学类型，阶段，分化度)在各个群组的患 者间通过不同的技术和确认得到的结果之间很少存在相关性。也检验了属于丝氨酸蛋白酶的亚家族激肽释放酶(其存在15个成员) 的其他标记。因此在利用DNA芯片的研究中，/2虹《/7基因被鉴定为C2型 内分泌腺癌的标记3。类似的研究证实/2TOX5和/2虹/aO在表皮样癌中过表 达4。类似地，已经证明/7虹《5和/2虹尺7基因(分别编码蛋白hK5和hK7)在 表皮样癌的肿瘤组织中过表达，而在显示腺癌的患者中最常观察到肿瘤组 织中Wa尺7基因的下调。但是，还不能确定这些AXL〖基因的差异表达与支 气管肺癌患者的预后生存率之间的任何联系。15种激肽释放酶的基因显示共同特征，在它们之间存在相同基因的数 种转录物。这些基因的转录物也作为标记被研究。因此，已经显示与非癌 组织比较，/2虹尺/和/2虹^57基因的3种选择性转录物以及/2虹《77基因的一 种转录物在肿瘤和/或卵巢细胞系中过表达。众所周知/z虹《S基因的表达谱产生至少4种不同的转录物，被称为NT1 到NT4。转录物NTl或者neuropsine l型，由Yoshida S.等鉴定8，编码260 个氨基酸的前酶原(pr6proenzyme)，其含有28个氨基酸的分泌信号肽和非常 短的4个残基的前片段，这必须被切除以释放活性形式的激肽释放酶8。6NT1被认为是所述基因的常规表达形式。转录物NT2或者neuropsin-T2由 Mitsui S.等鉴定9，与NT1形式的区别在于在信号肽的羧基末端区域插入一 个编码45个辅助氨基酸的序列。转录物NT3和NT4由Magklara A.等鉴定10， 分别编码包含119和32个残基的蛋白。从NT3预测的蛋白形式只具有激肽释 放酶8的信号肽的一部分，并且不保留后者的切割区。从NT4预测的蛋白由 激肽释放酶8的信号肽的前23个残基和9个辅助残基(与激肽释放酶8没有相 同性)组成。Magklara A.等^已经证明尽管XL尺S基因的常规表达形式NT1 可能在卵巢癌中具有预后价值，但NT3和NT4形式没有任何价值。本申请人现在令人惊讶地显示，对支气管肺癌尤其是非小细胞支气管 癌来说，高水平的编码激肽释放酶8的紅《< 基因的主要选择性转录物(选 自NT3和NT4)是良好的诊断标记，尤其是不良预后的标记。因此，本专利技术的第一个主题是体外诊断支气管肺癌尤其是非小细胞支 气管癌的方法，其特征在于它包括在来自疑患所述支气管肺癌的患者的生 物学样品中检测激肽释放酶8的虹i^基因的至少一种主要选择性转录物的 步骤。 _本专利技术的方法因此能够通过简单试验对支气管肺癌做出诊断，所述简 单试验在于检测尤其是高水平的虹尺S基因的主要选择性转录物。紅ks基因的选择性转录物旨在表示aza:s基因的转录产物。这类转录物是如上所述的那些，特别是被称为NT1、 NT2、 NT3和NT4。在下文中将 见到，本申请人还发现被称为NT5和NT6的两种新转录物。主要转录物旨在表示主要由表达激肽释放酶8的基因产生的转录物。 根据一个实施方案，虹《S基因的主要选择性转录物选自转录物NT3和 NT4。主要转录物的高水平旨在表示大于指定阈值的水平。 众所周知，用于检测分析物的试验结果通常很大程度上依赖于使用的 结合配偶体的性质。因此，例如对通过核苷酸探针杂交检测RNA来说，结 果尤其依赖于以下性质探针的大小、组成和互补百分比，并且这些性质 影响利用这些探针测量得到的值。因此不可能给出准确的阈值，但在所有 情况下可以通过简单的常规试验确定适于所用每种结合配偶体的阈值。必须清楚理解对应于不确定区域的离散值或者值的范围在本文中被称为阈值。显而易见的是，当测量值位于不确定区间内或者在离散值情况下 非常接近阈值，则不能做出明确的结论，应当进行进一步的研究。可以实施本专利技术方法的生物学样品是能够含有虹《S基因的主要选择性转录物的任意生物学样品。作为这类样品的实例，可以列举固体样品如来 自肿瘤、淋巴神经节、患者转移瘤活检的组织，生物学液体如血液、血清、 血浆和痰，以及从这些固体或者液体样品纯化的细胞。转录物尤其是主要选择性转录物的检测旨在表示转录物的直接检测，或者转录物的间接检测，或者本领域技术人员已知的确定样品本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种体外诊断支气管肺癌尤其是非小细胞支气管癌的方法，其特征在于它包括在来自疑患所述支气管肺癌的患者的生物学样品中检测编码激肽释放酶８的基因ＫＬＫ８的至少一种主要选择性转录物的步骤。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】FR 2006-9-28 06539831. 一种体外诊断支气管肺癌尤其是非小细胞支气管癌的方法，其特征在于它包括在来自疑患所述支气管肺癌的患者的生物学样品中检测编码激肽释放酶8的基因KLK8的至少一种主要选择性转录物的步骤。2. 如权利要求l所述的方法，其特征在于AZ^ 基因的主要选择性转录 物选自转录物NT3和NT4。3. 如权利要求1或者2所述的方法，其特征在于所述步骤包括i) 测定生物学样品中主要选择性转录物的量，ii) 将生物学样品中主要选择性转录物的量与预定阈值比较，所述阈 值根据所用分析法的类型选择并代表病理学的检测界限，和iii) 确定诊断结果。4. 如权利要求1或者2所述的方法，其特征在于它还包括检测虹i^基因 的至少一种其他转录物的步骤。5. 如权利要求4所述的方法，其特征在于^/^基因的所述至少一种其 他转录物是编码激肽释放酶KLK8的转录物，还被称为NT1。6. 如权利要求4所述的方法，其特征在于虹《S基因的所述至少一种其 他转录物是选择性转录物。7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于所述选择性转录物选自NT2、 NT3、 NT4、 NT5和NT6。8. 如权利要求4到7任一项所述的方法，其特征在于所述步骤包括i) 测定紅i^基因的主要选择性转录物的量以及相同生物学样品中基 因紅尺S的所述其他转录物的量，和ii) 将获得的量与预定阈值比较，所述阈值根据所用分析法的类型选 择并代表病理学的检测界限，和iii) 确定诊断结果。9. 如权利要求1或者4所述的方法，其特征在于它还包括...
【专利技术属性】
技术研发人员：M艾恩齐布鲁，Y库尔蒂，C若利韦雷诺，C普朗克，
申请(专利权)人：生物梅里埃公司，费朗索瓦拉伯雷大学，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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