一种表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌、其构建方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种高效表达重组蛇毒激肽原酶的基因工程菌，其是通过反转录克隆了江浙蝮蛇中的蛇毒激肽原酶基因，构建原核重组表达质粒pET30a/蛇毒激肽原酶基因(pET30a/VK)，转入到大肠杆菌中，从中筛选出高效分泌表达的菌株。该表达系统所表达的外源蛋白的N端具有His蛋白标签，通过Ni柱洗脱的方法进行纯化，极大地简化了重组蛋白的后续纯化工作，获得的重组蛋白纯度高达90％以上，且纯化效率高、成本低，适合目的蛋白的大规模制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种高效表达人源蛇毒激肽原酶的基因工程菌、其构建方法及应用。
技术介绍
激肽原酶是动物体内的一种蛋白水解酶，存在于许多器官的组织中。人们认识最早、研究最为清楚的是蛇毒中的胰激肽原酶。胰激肽原酶(Pancreatic Kallidinogenase)又称为胰激肽释放酶(Pancreatic Kallikrein)是一类内切型蛋白水解酶,存在于哺乳动物体内的多种组织，尤以蛇毒中含量最为丰富。在体内作用于激肽原，使其释放出激肽，从而发挥出一系列的药理作用使微血管扩张，改善外周血液循环；促进前列腺素分泌，扩张小动脉，增加肾血管流量；激活纤溶酶系统，使纤维蛋白水解，降低血液粘度，防止血栓形成，溶解血栓。临床上主要用于微循环障碍引起的肾病变及眼底供血障碍、高血压症、脑动 脉硬化和脑动脉血栓、冠心病及其它闭塞性周围血管性疾病的治疗。目前国内临床上所使用的激肽原酶均为从哺乳动物的胰腺中提取，纯度不高，具有一定的抗原性，进入人体后，可能诱发一系列的抗原抗体反应，已有报道注射胰激肽原酶导致固定性药疹及重症多形红斑药疹，且不能实现静脉注射给药，使药物不能最大限度发挥作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌，其特征在于，该基因工程菌含有蛇毒激肽原酶(VK)基因的表达载体，所述蛇毒激肽原酶基因具有Seq？ID？No：1所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌，其特征在于，该基因工程菌含有蛇毒激肽原酶(VK)基因的表达载体，所述蛇毒激肽原酶基因具有Seq ID No :I所示的核苷酸序列。2.如权利要求I所述的一种表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌，其特征在于，表达载体的出发载体为pET30a。3.如权利要求I所述的一种表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌，其特征在于，表达载体的工程菌为大肠杆菌工程菌。4.如权利要求3所述的一种表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌，其特征在于，出发菌株为大肠杆菌BL21。5.一种构建表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌的方法，其特征在于，其包括步骤 1)从江浙蝮蛇组织中提取总RNA，经RT-PCR扩增得到蛇毒激肽原酶(VK)基因； 2)将步骤I)中得到的VK基因插入到表达载体中； 3)将步骤2)中构建的表达载体转入大肠杆菌，筛选阳性克隆，得到重组大肠杆菌工程菌，并对工程菌进行诱导培养产生目的蛋白。6.如权利要求5所述的一种构建表达蛇毒激肽原酶的基因工程菌的方法，其特征在于，所述的诱导培养方法包括待工程菌于37°C培养至对数生长期后，按3 5v/v%的接种量将菌液接种于LB液体培养基中，当OD6tltl达到O. 5 O. 6时，加入IPTG至终浓度为ImM，在温度37°C，200rpm的条件下诱...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗云波，许文涛，黄昆仑，马骉，张雅楠，宋梦薇，王云鹏，
申请(专利权)人：中国农业大学，北京赛升药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：