一种抗结核病药物高通量筛选模型的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种抗结核病药物高通量筛选模型的构建方法，其是以内源性表达ESX-1分泌系统的海分枝杆菌为模式生物，选择ESX-1分泌系统中C末端带有信号肽的重要的毒力因子CFP-10蛋白与荧光素酶融合，构建外源表达CFP-10和荧光素酶融合蛋白的重组海分枝杆菌，向含有该重组菌的培养液中加入待筛选的药物化合物，培养一定时间后取上清进行荧光素酶活性测定，以此来评价药物对ESX-1分泌系统的抑制活性；同时，通过测定A600来监测海分枝杆菌的生长状况。将此分析方法发展成高通量药物筛选模型，筛选ESX-1分泌系统抑制剂，获得既能降低结核分枝杆菌的致病性又不抑制其体外生长，即不易诱发耐药的新型抗结核活性化合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物高通量筛选模型的构建方法，具体地说，涉及。
技术介绍
结核病是ー种死亡率较高的感染性疾病，严重威胁着人类健康。全球约有三分之一的人感染了结核分枝杆菌，现有结核病人约2000万，毎年新发生约900万病人，死亡人数高达300万。我国作为22个结核病的高发国家之一，结核病人数仅次于印度，位居世界第ニ，毎年死于结核病的人约25万之多，是各类传染病死亡人数总和的两倍多。此外，感染了HIV的结核分枝杆菌携帯者，由于病毒破坏了机体的免疫功能，发展为活动性结核病的可能 性比未感染HIV者高30 50倍，且结核的病程发展更快，更易致死。结核病加重了 HIV感染者或艾滋病人的疾病负担，成为威胁人类健康的全球性公共卫生问题。由于耐药及耐多药结核分枝杆菌的出现，发展新型抗结核药物，特别是抗耐药结核药物成为研究的重点，寻找抑制细菌生长的活性化合物是目前抗结核药物研发的主要思路。现有的抗结核的一线药物主要有利福平、异烟肼、こ胺丁醇、链霉素和吡嗪酰胺等，这些药物多数是通过抑制结核分枝杆菌细胞壁合成或蛋白合成等细菌生存所必需的环节，直接抑制细菌的生长或者杀死细菌。在药物产生的生存压カ下，结核分枝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗结核病药物高通量筛选模型的构建方法，其特征在于，其是通过构建外源表达来自于结核分枝杆菌(Mycobacterium？tuberculosis)中的CFP？10蛋白和报告蛋白的融合蛋白的重组海分枝杆菌，以该重组菌作为针对ESX？1分泌系统的抗结核病药物高通量筛选模型，向含有该重组菌的培养液中加入待筛选的药物化合物，培养一段时间后离心取上清测定报告蛋白的表达量或活性，以此来评价该药物化合物对ESX？1分泌系统的抑制活性。

【技术特征摘要】
1.一种抗结核病药物高通量筛选模型的构建方法，其特征在于，其是通过构建外源表达来自于结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)中的CFP-10蛋白和报告蛋白的融合蛋白的重组海分枝杆菌，以该重组菌作为针对ESX-I分泌系统的抗结核病药物高通量筛选模型，向含有该重组菌的培养液中加入待筛选的药物化合物，培养一段时间后离心取上清測定报告蛋白的表达量或活性，以此来评价该药物化合物对ESX-I分泌系统的抑制活性。2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述报告蛋白为荧光素酶、氯霉素こ酰基转移酶、3 -半乳糖苷酶、分泌型碱性磷酸酶或荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：岑山，贾平平，张义，李晓宇，周金明，殷霄，
申请(专利权)人：中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：