抑制性的抗因子XII/XIIA单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抑制性抗因子XII/FXIIA抗体及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制性的抗因子XII/XIIA单克隆抗体及其用途本专利技术涉及抑制性抗因子XII/FXIIa抗体及其使用方法。因子XII(Hageman因子)是具有约80kDa分子量的血清糖蛋白。除了通过暴露于带负电荷的表面进行自体激活(autoactivation)外，因子XII还通过激肽释放酶经蛋白水解切割形成α-因子XIIa、随后所述α-因子XIIa通过例如胰蛋白酶进一步转化成β-因子XIIa(FXIIa-β)而被另外地激活。α-因子XIIa由约50kDa的N末端重链和约28kDa的C末端轻链组成，所述N末端重链包含接触结合结构域，所述C末端轻链包含催化中心。重链和轻链通过二硫键连接。FXIIa-β是约30kDa的FXII的活性形式，其由通过二硫键连接的完整轻链和2000Da的重链片段组成。血管壁损伤触发突然的血小板附着和聚集，随后是血浆凝固系统的活化和含血纤蛋白的血栓形成，其阻塞损伤的部位。这些事件对于限制创伤后失血是至关重要，但也可阻塞患病血管，从而导致极其重要的器官的缺血和梗塞。在瀑布模型(waterfallmodel)中，血液凝固通过一系列反应进行，所述反应包括通过在凝血酶的产生中达到顶点的限制性蛋白水解对酶原的活化,将血浆血纤蛋白原转化成血纤蛋白并且活化血小板。胶原或血纤蛋白附着性的血小板继而通过在它们外表面上暴露促凝血磷脂(procoagulantphospholipid)(主要地磷脂酰丝氨酸)(这增加了凝血蛋白酶复合物的装配和活化)和通过血小板受体与凝血因子之间的直接相互作用使凝血酶的产生提高数个数量级。存在由脉管系统的外源性(血管壁)或内源性(血液传播)组分触发的两个凝固趋同途径。"外源性"途径由血浆因子VII(FVII)与膜内在蛋白质组织因子(TF)(不存在于腔表面上但在血管的内皮下层中强劲表达的并且是易接近的或通过组织损伤释放的基本凝血辅因子)的复合物启动。在循环微囊泡中表达的TF还可能通过在活化血小板的表面上维持凝血酶产生来促成血栓蔓延。当因子XII(FXII,Hageman因子)与带负电荷的表面在反应(牵涉高分子量激肽原和血浆激肽释放酶)中接触时，"内源性"或接触活化途径被启动。FXll可被内下皮基质的大分子组成例如葡萄糖氨基聚糖和胶原、硫苷脂、核苷酸、多磷酸盐和其它可溶性多聚阴离子或非生理材料例如玻璃或聚合物所激活。最具效力的接触激活物之一是高岭土，并且该反应用作主要临床凝血测试，测量通过“内源性”途径的凝血能力的激活部分凝血酶原激酶时间(aPTT)的机制基础。在通过血小板蔓延的反应中，激活的FXII随后将FXI活化成FXla，随后FXla激活因子IX。FVllla(所述FVllla先前已被痕量FXa和/或凝血酶激活)与FlXa的复合物(tenase复合物)随后激活FX。尽管其在体外诱导血液凝固的高效力，但FXII-触发的内源性凝血途径的(病理-)生理意义受到这样的事实质疑：FXII以及高分子量激肽原和血浆激肽释放酶的遗传性缺乏与出血并发征无关。结合缺乏外来途径组分例如TF和FVll的人和小鼠遭受严重出血的观察结果，得出了当前的假说：体内出血的停止专有地需要外部级联(Mackman,N.2004.Roleoftissuefactorinhemostasis,thrombosis,andvasculardevelopment.Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24,1015-1022)。在病理条件下，凝血级联可被不适当地活化，这随后导致在血管内形成止血塞。因此，血管可被阻塞并且向远端器官的血液提供受到限制。此过程被称为血栓形成，并且，如果血栓发生栓塞，则称为与高死亡率相关的血栓栓塞。此外，由于内源性凝血级联的活化，与血液接触的假体器官装置的使用受到严重限制。假体表面的适当涂覆可在一些情况下避免所述问题，但可在其它方面削弱其功能。这样的假体器官装置的实例是血液透析器、心肺旁路循环、心脏瓣膜、血管支架和留置导管。在其中使用这样的装置的情况下，施用抗凝剂例如肝素以防止血纤蛋白在表面上形成。然而，一些患者不耐受肝素，其可引起肝素诱导的血小板减少症(HIT)，从而导致血小板聚集和威胁生命的血栓形成。此外，临床中使用的所有抗凝剂的固有不利方面是严重出血事件的风险增加。因此，强烈需要有新型抗凝剂，所述抗凝剂与这样的并发症无关并且可用于受累患者或用作防止血栓形成而出血风险不会增加的优良的预防/治疗概念。50多年来，已知凝血因子XII的缺乏与增加的自发或损伤相关出血并发症并不相关(RatnoffOD&ColopyJE1955.Afamilialhemorrhagictraitassociatedwithadeficiencyofaclot-promotingfractionofplasma.JClinInvest34:602-613)。事实上，虽然可容易地通过aPTT(阐明内源凝血途径的临床凝血测试)中测量的病理值来检测，但缺乏FXII的人即使在主要外科手术过程中也未遭受异常出血(ColmanRW.HemostasisandThrombosis.Basicprinciples&clinicalpractice(eds.ColmanRW,HirschJ,MaderVJ,ClowesAW,&GeorgeJ)103-122(LippincottWilliams&Wilkins,Philadelphia,2001))。相反地，已将FXII的缺乏与静脉血栓形成的风险增加相关(KuhliC等人2004.FactorXIIdeficiency：athrombophilicriskfactorforretinalveinocclusion.Am.J.Ophthalmol.137:459-464；HalbmayerWM等人1993.FactorXII(Hagemanfactor)deficiency：ariskfactorfordevelopmentofthromboembolism.IncidenceofFXlldeficiencyinpatientsafterrecurrentvenousorarterialthromboembolismandmyocardialinfarction.Wien.Med.Wochenschr.143:43-50)。支持该想法的研究和病例报告是指FXII缺乏的指标症例，Mr.JohnHageman，他死于肺栓塞。FXII缺乏与增加的血栓前风险相关的假说受到几个病例报告的最近再评价质疑，其最初的报告将FXII缺乏与血栓形成关联起来(GirolamiA等人2004.Theoccasionalvenousthrombosesseeninpatientswithsevere(homozygous)FXlldeficiencyareprobablyduetoassociatedriskfactors：Astudyofprevalencein21patientsandreviewoftheliterature.J.Thromb.Thrombolysis17:139-143)。在大多数情况下，作者鉴定了与因子FXll缺乏组合的伴随的先本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗因子XII/XIIa单克隆抗体或其抗原结合片段，其对人因子XIIa‑β的结合亲和力为对人因子XII的2倍以上，并且能够完全抑制人因子XIIa的酰胺裂解活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.07.22 EP 11175105.3;2012.01.31 EP 12153310.3;1.抗因子XII/XIIa单克隆抗体或其抗原结合片段，其中：a.所述抗体包含SEQIDNO:6所示序列的重链CDR1、SEQIDNO:7所示序列的重链CDR2和SEQIDNO:9所示序列的重链CDR3，以及SEQIDNO:11所示序列的轻链CDR1、SEQIDNO:12所示序列的轻链CDR2和SEQIDNO:13所示序列的轻链CDR3；b.所述抗体包含SEQIDNO:6所示序列的重链CDR1、SEQIDNO:29所示序列的重链CDR2和SEQIDNO:9所示序列的重链CDR3，以及SEQIDNO:11所示序列的轻链CDR1、SEQIDNO:12所示序列的轻链CDR2和SEQIDNO:13所示序列的轻链CDR3；c.所述抗体包含SEQIDNO:6所示序列的重链CDR1、SEQIDNO:30所示序列的重链CDR2和SEQIDNO:9所示序列的重链CDR3，以及SEQIDNO:11所示序列的轻链CDR1、SEQIDNO:12所示序列的轻链CDR2和SEQIDNO:13所示序列的轻链CDR3；d.所述抗体包含SEQIDNO:6所示序列的重链CDR1、SEQIDNO:31所示序列的重链CDR2和SEQIDNO:9所示序列的重链CDR3，以及SEQIDNO:11所示序列的轻链CDR1、SEQIDNO:12所示序列的轻链CDR2和SEQIDNO:13所示序列的轻链CDR3；e.所述抗体包含SEQIDNO:6所示序列的重链CDR1、SEQIDNO:7所示序列的重链CDR2和SEQIDNO:9所示序列的重链CDR3，以及SEQIDNO:44所示序列的轻链CDR1、SEQIDNO:12所示序列的轻链CDR2和SEQIDNO:13所示序列的轻链CDR3；或f.所述抗体包含SEQIDNO:6所示序列的重链CDR1、SEQIDNO:32所示序列的重链CDR2和SEQIDNO:9所示序列的重链CDR3，以及SEQIDNO:11所示序列的轻链CDR1、SEQIDNO:12所示序列的轻链CDR2和SEQIDNO:13所示序列的轻链CDR3。2.权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中包含：a.SEQIDNO:4所示序列的重链可变区和SEQIDNO:5所示序列的轻链可变区；b.SEQIDNO:77所示序列的重链可变区和SEQIDNO:5所示序列的轻链可变区；c.SEQIDNO:74所示序列的重链可变区和SEQIDNO:5所示序列的轻链可变区；d.SEQIDNO:73所示序列的重链可变区和SEQIDNO:5所示序列的轻链可变区；e.SEQIDNO:4所示序列的重链可变区和SEQIDNO:75所示序列的轻链可变区；或f.SEQIDNO:76所示序列的重链可变区和SEQIDNO:5所示序列的轻链可变区。3.权利要求1或2所述抗体或其抗原结合片段的种系化形式。4.权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其对人因子XIIa-β的结合亲和力为对人因子XII的2倍以上，并且能够完全抑制人因子XIIa的酰胺裂解活性，其中结合亲和力是通过基于表面等离子体共振的技术测量的，并且其中完全抑制人因子XIIa的酰胺裂解活性是指抑制无任何抑制剂存在下的对照实验中观察到的活性的至少80％。5.权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其在以1:0.2的FXIIa-α对抗体摩尔比使用时，其抑制因子XIIa-α超过50％。6.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·帕努西斯，V·瑞兹曼，A·纳什，M·威尔逊，S·施密德鲍尔，M·诺尔蒂，
申请(专利权)人：德国杰特贝林生物制品有限公司， CSL有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE