人源化的嵌合抗因子Bb抗体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种在受试对象中抑制由Bb抑制剂介导的补体激活的方法，该方法向所述的受试对象给药Bb抑制剂，从而抑制Bb与因子B和备解素的结合，抑制C3的切割，抑制嗜中性粒细胞、单核细胞、血小板和内皮细胞的激活，或者抑制C3a、C5a和Mac的形成中的至少一种。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化的嵌合抗因子Bb抗体及其用途相关申请本申请要求2012年4月3日提交的美国临时申请No.61/619,858的优先权，该申请的主题内容以引用方式全文并入本文。
本专利技术涉及效应器功能和免疫源性降低的、人源化嵌合抗体及其抗原结合片段。本申请进一步涉及因子B的抗体用于抑制C3bBb或PC3bBb复合物的活性的用途，这将进一步抑制因子B在C3/C5转化酶中的蛋白水解活性。本专利技术的人源化嵌合单克隆抗体选择性地阻断因子Bb与PC3bB复合物的结合，而不会抑制经典途径的激活。这些抗体不会抑制C3b与因子Bb的相互作用，因此具有独特的功能。此类抗体为疾病指征(其中补体旁路途径起致病作用)的有用疗法。
技术介绍
补体系统是通过3条不同的途径激活的：经典途径、凝集素途径和补体旁路途径(AP)。经典途径是通过抗原-抗体复合物激活的。凝集素途径是经典途径的改变，旁路途径是通过外来物质、人工表面、死亡组织、细菌、死亡酵母细胞来激活的。经典途径的激活产生C3a、C4a、C5a和C5b-9分子，它们响应于宿主防御而激活多种细胞。在致病条件下，作为旁路途径的激活结果，形成过敏毒素C3a、C5a，它们激活细胞和还被称为膜攻击复合物(MAC)C5b-9分子(其破坏组织)。总体而言，这些分子通过细胞激活而介导炎症并释放炎症介质。除了C5b-9作为细胞溶解性孔隙形成复合物的作用，强有力的证据表明亚溶解MAC的沉积在炎症中可以起到重要的作用。经典的补体途径对于宿主防御对抗病原体是重要的。补体旁路途径在病理学炎症中被激活。发现C3a、C5a和C5b-9水平的升高与多种急性和慢性疾病状况有关。因此，抑制疾病诱导的AP激活在疾病中(其中补体激活在疾病病理学中起作用)对于临床益处而言是重要的。补体系统除了在免疫防御中的基本作用以外，其在许多临床状况中会促使组织损伤。补体生物化学级联中所包括的活性对宿主组织呈现潜在的威胁。实例包括不加选择地释放可能导致宿主细胞溶解的破坏性的酶。因此，迫切需要研发防止这些不利作用的治疗有效性的补体抑制剂。在其中AP激活有助于疾病病理学的疾病状况下，在血清、血浆、血液或代表了疾病的其他体液中发现C3a、C5a和C5b-9的水平升高。这些分子的每一种分子通过不同机制的生产和抑制对于疾病都是重要的。用于抑制PC3bBb复合物形成的一种可能的机制是通过使用抗Bb抗体。因此，通过耗尽Bb、中和Bb或使Bb失活来阻断/抑制或阻止AP激活仍为重要的治疗策略。本专利技术涉及研发得到的人源化的嵌合抗体序列，该抗体序列是新型的，并且提供与因子Bb的靶向结合。此类人源化的/嵌合抗体与因子Bb的结合会阻止转化酶的激活。此外，此类抗体还通过与PC3bB复合物的因子B上的因子D切割位点结合而阻止PC3bB转化为PC3bBb。这些抗体不能抑制备解素与C3b的结合。与Bb结合、阻止PC3bBb激活并且阻止新的C3转化酶形成的抗因子Bb剂包括但不限于单克隆和多克隆的抗体，嵌合的、人源化的、全人类、及纳米抗体，全长的及它们的片段，包括IgG、Fab、Fab'、F(ab’)2和IgGs。本专利技术的抗体可以抑制C3a、C5a和C5b-9的形成，这些因子会驱使发炎，还会放大AP激活过程。此外，适体、小分子和SiRNA还可以中和与PC3bB复合物结合的Bb，并阻止AP诱导生产的C3a、C5a和C5b-9的生产。结果，细胞激活、炎症和炎症介质的释放也都被阻止。由于AP激活与多种急性和慢性人类疾病关联，所以使用抗Bb剂进行阻断还将阻断炎症的过程，这可以为使用抗Bb单克隆抗体治疗的哺乳动物提供临床益处。补体是与发病机理有关的多种因子之一，并且可以为临床控制提供有效点的重要的病理机制。越来越多地认识到补体介导的组织损伤在多种疾病状态中的重要性，意味着需要有效的补体抑制药品。尽管如此，目前完全缺乏人类用途的、特异性地靶向及抑制补体激活的批准药品。因子B在旁路途径的放大环中起到重要作用，这是因为其提供用于C3转化酶(PC3bBb)的催化亚基Bb。已经研发出抑制C3b与Ba结合的抗体，但是它们都不具有抑制Bb的活性。因子B本身为不具有已知的催化活性的酵素原。在因子B与PC3b复合物结合后，其被因子D切割，从而释放Ba。已经显示因子B通过在Ba和Bb各个亚基中发现的区域而与C3b结合。因子Bb结合剂的抑制剂会导致选择性地抑制因子B的功能，由此阻止C3a、C5a和C5b-9的形成，这会导致许多有害的结果。根据本专利申请中所述的结果，我们研发了人源化的嵌合抗体，该抗体结合因子B的催化结构域，阻止PC3bBb的活性，结合Bb上因子D的切割位点，并阻止其他的PC3bBb分子的形成。这些抗体不能抑制C3b与因子B的结合，因为这种结合事件显示为是通过因子B的Ba结构域介导的。本申请研发出人源化的嵌合抗Bb特异性抑制剂或抑制方法，这种抑制剂或抑制方法将(a)通过阻断PC3bBb活性而阻断因子B功能，和/或(b)抑制因子B的切割，这种切割会阻止Bb的生成。这些抑制剂似乎是C3转化酶的酶活性的灭活剂，而不破坏因子B与C3b的相互作用。针对抗因子Bb抗体在阻断AP激活中的潜在作用，我们已经评价了抗因子Bb抗体的抑制活性。这些抗体在体外和全血中阻止了因子B的功能。此外，还研发了其他的抗因子Ba的单克隆抗体，并且在疾病的动物模型中进行了测试，但是并未构成本专利技术的一部分。这些抗Ba抗体阻断了因子B与C3b的结合，因此阻断了补体级联的激活。本专利技术计划通过使用抗Bb抗体来抑制Bb在病理学状况中的功能活性及其的程序性作用。专利技术概述本专利技术涉及通过阻断PC3bBb和C3bBb上的Bb位点并限制因子D介导的因子B的切割来抑制Bb依赖的补体激活的方法。与Bb结合并且仅抑制旁路途径的激活但不会抑制经典途径的抗体被涵盖在本专利技术的范围内。因子B依赖的补体激活可以通过因子B抑制剂分子(除了诸如适体和SiRNA以外的抗体)来抑制。因子B抑制剂分子抗体可以包含全部的或片段的抗因子B抗体。片段的抗因子B抗体可以为Fa、F(ab)2、Fv或单链Fv。抗因子B抗体可以为单克隆、多克隆、嵌合或去免疫化的，并且具有与因子B及其片段结合的能力。本专利技术公开了Bb抗体但并不是抗Ba抗体用于治疗通过补体激活调节的多种炎症紊乱的用途。在一个方面中，本专利技术涉及抑制Bb依赖的补体激活在受试对象中的不利作用的方法。该方法包括向受试对象给予有效抑制Bb依赖的补体激活的、一定量的Bb抑制剂。就这一点而言，短语“Bb依赖的补体激活”是指所有3种补体途径的激活。在本专利技术的一些方面中，Bb抑制剂为抗因子Bb抗体或其片段，而在其他的方面中，抗因子Bb抗体具有降低的效应器功能。在其他的方面中，Bb抑制剂为Bb抑制肽。本专利技术所述的方法、组合物和药剂用于在哺乳动物的受试对象中体内抑制Bb依赖的补体激活的不利作用，期中所述的哺乳动物受试对象包括遭受急性或慢性病理学状况的人类，其中在疾病的病理学中，涉及不适的补体激活。在另一个方面中，本专利技术创建了抗因子Bb抗体，该抗体包含互补性决定区1至3(CDR1至3)与构架区(FR1至FR4)的多种组合。CDR包含轻链与重链的组合。CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3及构架区可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含参照抗体的重链的抗因子Bb鼠抗体，其中所述的抗因子Bb抗体包含在SEQ ID NO:1所含有的CDR和构架的组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.03 US 61/619,8581.一种分离的抗Bb抗体或其抗原结合部分，包含：重链可变结构域，由SEQIDNO:9组成；和轻链可变结构域，由SEQIDNO:10组成。2.权利要求1所述的抗Bb抗体或其抗原结合部分，其中所述抗Bb抗体或其抗原结合部分与位于因子Bb上的肽区结合，所述的肽区具有选自SEQIDNO:47、SEQIDNO:48、SEQIDNO:49、SEQIDNO:50和SEQIDNO:51的氨基酸序列。3.权利要求1所述的抗Bb抗体或其抗原结合部分，其中所述抗Bb抗体或其抗原结合部分通过抑制所述的PC3bBb复合物的形成来抑制C3b的形成。4.权利要求1所述的抗Bb抗体或其抗原结合部分，其中所述抗Bb抗体或其抗原结合部分抑制新生产的C3a、C5a、SC5b-9的形成。5.权利要求1所述的抗Bb抗体或其抗原结合部分，其中所述抗Bb抗体或其抗原结合部分抑制嗜中性粒细胞、单核细胞和血小板的激活。6.权利要求1所述的抗Bb抗体或其抗原结合部分，其中所述抗Bb抗体或其抗原结合部分抑制红细胞溶解。7.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1所述的抗Bb抗体或其抗原结合部分。8.权利要求1所述的抗Bb抗体或其抗原结合部分在制备用于治疗炎症紊乱的药剂中的用途，其中在所述的炎性紊乱中发现异常水平的炎症介质，包括C3a、C5...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·班萨尔，
申请(专利权)人：诺沃姆德治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US