起催化作用的抗因子Ⅷ同种抗体制造技术

本发明专利技术涉及一种测定能降解哺乳动物中因子Ⅷ的起催化作用的抗因子Ⅷ同种抗体的存在的方法，以及由所述催化作用的抗因子Ⅷ同种抗体使所述因子Ⅷ分子中裂解位点特征化的方法。本发明专利技术还涉及一种抗因子Ⅷ同种抗体催化的因子Ⅷ降解抑制剂；以及包含所述能降解哺乳动物中因子Ⅷ并从所述测定方法中获得的起催化作用的抗因子Ⅷ同种抗体的药物组合物；本发明专利技术还涉及一种包含抗因子Ⅷ同种抗体催化的因子Ⅷ降解抑制剂的药物组合物。最后本发明专利技术涉及所述抗因子Ⅷ同种抗体催化的因子Ⅷ降解抑制剂，包含所述能降解因子Ⅷ以及起源于所述测定方法的起催化作用的抗因子Ⅷ同种抗体的药物组合物，以及包含所述抗因子Ⅷ同种抗体催化的因子Ⅷ降解抑制剂的药物组合物在治疗中的应用。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种测定能降解哺乳动物中因子VIII的起催化作用的抗因子VIII同种抗体的存在的方法，以及由所述起催化作用的抗因子VIII同种抗体使所述因子VIII分子中裂解部位特征化的方法。本专利技术还涉及一种被抗因子VIII同种抗体催化的因子VIII降解抑制剂。本专利技术进一步涉及一种药物组合物，其中包含所述的能降解因子VIII并来源于所述测定方法的起催化作用的抗因子VIII同种抗体，还涉及一种药物组合物，其中包含被所述抗因子VIII同种抗体催化的因子VIII降解抑制剂。最后，本专利技术涉及以下这些物质在治疗上的应用，即所述抗因子VIII同种抗体催化的因子VIII降解抑制剂，包含所述能降解因子VIII以及起源于所述测定方法的起催化作用的抗因子VIII同种抗体的药物组合物，以及包含所述抗因子VIII同种抗体催化的因子VIII降解抑制剂的药物组合物。给具有严重血友病A的病人注入同源的因子VIII导致25％的病案出现抗因子VIII同种抗体(Ehrenforth，S.，Kreuz，W.，Scharrer，I.，Linde，R.，Funk，M.，Güngr，T.，Krackhardt，B.和Komhuber，B.，《Incidence of development of factor VIII and factor IX inhibitors inhaemophiliacs》，Lancet，1992，339594-598)，该同种抗体通过因子VIII与稳定化分子(Saenko，E.L.，Shima，M.，Rajalakshmi，K.J.和Scandella，D.，《Arole for the C2 domain of factor VIII in bindingto von Willebrand factor》，J.Biol.Chem.，1994，26911601-11605；和Saenko，E.L.，Shima，M.，Gilbert，G.E.，和Scandella，D.，《Slowed release of thrombin-cleaved factor VIII from von Willebrandfactor by a monoclonal and a human antibody is a novel mechanismfor factor VIII inhibition》，J.Biol.Chem.，1996，27127424--27431)，或与对其活性来说必要的分子(Arai，M.，Scandella，D.，和Hoyer，L.W.，《Molecular basis of factor VIII inhibition by humanantibodiesAntibodies that bind to the factor VIII light chainprevent the interaction of factor VIII with phospholipid》，J.Clin.Invest.，1989，831978-1984；和Zhong，D.，Saenko，E.L.，Shima，M.，Felch，M.和Scandella，D.，《Some human inhibitor antibodiesinterfere with factor VIII binding to Factor IX》.，Blood，1998，92136-142)，或与活化分子(Lubahn，B.C.，Ware，J.，Stafford，D.W.，和Reiser，H.M.，《IdentificatIon of a FVIII epitope recognized bya human hemophilic inhibitor》，Blood，1989，73497-499；和Neuenschwander，P.F.，and Jesty，J.，《Thrombin-activated andfactor Xa-activated human factor VIIIdifferences in cofactoractivity and decay rate》，Arc.Biochem.Biophys.，1992，296426-434)的相互作用的空间位阻来抑制因子VIII的促凝血活性。申请人发现的起催化作用的抗因子VIII同种抗体是就他所知在治疗带有因子VIII的病人时出现被诱导的催化抗体的第一次报告。迄今为止仍认为在因子VIII存在下形成抗体是令人非常惊讶的，甚至是荒谬或难以置信的，因为实际上这将通过催化水解使因子VIII分子失去活性(《蛋白质水解(proteolysis)》)。但是至今已报道的在疾病过程中或在生理条件下发现的催化抗体都是自身抗体。因此，被诱发的抗体称作同种抗体(ALLO-antibodies)，其起源与任何自身免疫疾病中的自身抗体(AUTO-antibodies)的起源明显不同。对于一个病人的抗因子VIII抗体的反应来说，算术平均值Km和表观Vmax分别是9.46±5.62μM和85±60fmol.min-1。因子VIII水解动力参数表明在活体内因子VIII钝化作用中催化免疫应答的功能性作用。由此抗因子VIII同种抗体作为位点特异蛋白酶的特性给具有抗因子VIII同种抗体的病人提供了新的疾病治疗方法。因此依据本专利技术第一方面，本专利技术提供了一种测定能够降解哺乳动物中因子VIII的、起催化作用的抗因子VIII同种抗体是否存在的方法，其特征在于该方法包括i)从所述哺乳动物中取得的血样分离出血浆；ii)从所述血浆中分离出抗因子VIII同种抗体；iii)放置所述抗因子VIII同种抗体，使之与因子VIII接触一段时间，该时间足以使所述因子VIII被所述抗因子VIII同种抗体任意降解；以及iv)在所述的一段时间后，测定所述因子VIII是否被所述的抗因子VIII同种抗体有效地降解。依据本专利技术方法步骤ii)的实施方式，所述抗因子VIII同种抗体通过与所述因子VIII组合而从所述血浆中分离出来，所述因子VIII优选与一种基质偶合。有利的是，在步骤ii)中，所述抗因子VIII同种抗体通过亲合色谱法分离出来。优选地在步骤ii)中，所述亲合色谱法包括使用琼脂糖凝胶(Sepharose)基质，优选用溴化氰活化。依据本专利技术方法步骤iii)的实施方式，所述因子VIII用一种标记试剂所标记，优选用放射性标记试剂，具体来说如125I。有利的是在步骤iii)中，在约15℃到约40℃，优选为38℃的温度下，所述因子VIII与所述抗因子VIII同种抗体接触放置的时间在约0.5到约30小时之间，优选约10小时。依据本专利技术方法步骤iV)的实施方式，测定所述因子VIII是否被所述抗因子VIII同种抗体有效地降解的方法是通过包括分离技术的测定方法来完成的，例如凝胶电泳，具体来说例如SDS PAGE，或凝胶过滤，具体来说例如快速蛋白质液相色谱凝胶过滤，以及造影术，具体来说例如放射自显影术。依据本专利技术方法进一步的实施方式，所述方法的特征在于其进一步包括V)使被所述抗因子VIII同种抗体裂解的所述因子VIII分子中一个(多个)部位特征化。依据本专利技术方法的步骤V)的实施方式本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定能够降解哺乳动物中因子Ⅷ的抗因子Ⅷ同种抗体存在的方法，其特征在于该方法包括： ｉ） 从所述哺乳动物中取得的血样分离出血浆； ｉｉ） 从所述血浆中分离出抗因子Ⅷ同种抗体； ｉｉｉ） 放置所述抗因子Ⅷ同种抗体，使之与因子Ⅷ接触一段时间，该时间足以使所述因子Ⅷ被所述抗因子Ⅷ同种抗体任意降解；以及 ｉｖ） 在所述的一段时间后，测定所述因子Ⅷ是否被所述的抗因子Ⅷ同种抗体有效地降解。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：斯里尼瓦斯凯维利，塞巴斯蒂安拉克鲁瓦得斯马塞斯，米夏尔卡扎切基尼，
申请(专利权)人：国家医疗保健研究所，拜尔药品有限公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]