中国对虾COMT重组蛋白的生产方法及其应用技术

本发明专利技术属于基因产品开发与应用领域，涉及中国对虾COMT重组蛋白的生产方法及其应用。本发明专利技术的技术方案为：中国对虾COMT重组蛋白的生产方法，包括以下步骤：1）构建comt/pPIC9K重组表达载体；2）获得转化子高拷贝的毕赤酵母表达菌株comt/pPIC9K/KM71；3）转化子的发酵培养与诱导表达；4）COMT纯化。该法用真核——毕赤酵母生产与制备的儿茶酚-氧位-甲基转移酶（COMT）有翻译后的修饰，结构更天然，酶活性更高，直接用酵母液纯化，省去了原核菌体回收、破碎的繁琐步骤，降低了生产成本，提高了纯化效率。

【技术实现步骤摘要】
中国对虾COMT重组蛋白的生产方法及其应用
本专利技术属于基因产品开发与应用领域，涉及中国对虾COMT重组蛋白的生产方法及其应用。
技术介绍
儿茶酌-氧位-甲基转移酶(CatechoK-methyltransferase,简称C0MT,E.C.2.1.1.6)，是1958年首先在人体发现的一种转甲基酶，主要代谢儿茶酚型的化合物，其反应机制如附图1所示，COMT酶(E.C.2.1.1.6)在有二价镁离子(Mg++)存在时，催化S腺苷蛋氨酸(SAM)的一个甲基转移到底物DHBAc分子的一个羟基上，形成甲基化产物香草酸(VA)和异香草酸(IVA)的反应机理。在体内，COMT底物广泛，包括儿茶酚胺、多巴胺、肾上腺素、二羟苯甲酸(DHBAc)等。在体外检测时，底物DHBAc要比儿茶酚胺、多巴胺、肾上腺素相对稳定。COMT可以将DHBAc甲基化，产生香草酸(VA)和异香草酸(IVA)。高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)是检测COMT酶活性最为灵敏、快速的方法。COMT在脊椎动物和无脊椎动物中都有发现，它不仅对生物的生长、发育有调控作用，而且与人类的精神疾病和肿瘤的发生有一定的联本文档来自技高网...

【技术保护点】
中国对虾COMT重组蛋白的生产方法，包括以下步骤：1）构建comt/pPIC9K重组表达载体；2）获得转化子高拷贝的毕赤酵母表达菌株comt/pPIC9K/KM71；?3）转化子的发酵培养与诱导表达；4）COMT纯化。

【技术特征摘要】
1.中国对虾COMT重组蛋白的生产方法，包括以下步骤: O构建cofi?i/pPIC9K重组表达载体； 2)获得转化子高拷贝的毕赤酵母表达菌株coffii/pPIC9K/KM71； 3)转化子的发酵培养与诱导表达；4)COMT 纯化。2.根据权利要求1所述的中国对虾COMT重组蛋白的生产方法，其特征在于:所述步骤I)构建cofi?i/pPIC9K重组表达载体: 用獲弧菌(Vibrio aflgwiWara?)和金黄色葡萄球菌{Staphylococcus aareiAs)混合液诱导的中国对虾cDNA为模板，合成包含&oR I (GAATTC)与Not I iGCGGCCGC、内切酶位点的正反向引物，引物序列为:COMT ExF:5’ -TACTCAfi^77TATGTCTTCTCTGAAGAGTTAC-3，COMT ExR:5’ -TACTCAGCGGCCGCYCA ATG ATG ATG ATG ATG ATGTTTTTTAAAACAGAGAGACAAGC-3， 经...

【专利技术属性】
技术研发人员：李殿香，王金星，赵小凡，王蕾，齐梅，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：