本发明专利技术公开了一种生产WF16616的发酵培养基，其包括1-10％的碳源、1-6％的有机氮源和0.1-1％的无机磷酸盐，其中所述的碳源包括甘露醇和玉米淀粉；所述的氮源为棉籽粉、干酵母和聚蛋白胨，或者为黄豆饼粉、干酵母和聚蛋白胨；百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。本发明专利技术还提供了所述的发酵培养基在以Tolypocladium parasiticum No.16616为产生菌发酵生产WF16616中的用途，以及一种发酵生产WF16616的方法。本发明专利技术的发酵培养基能够显著提高WF16616的产量(效价达300-420mg/L)，相对于现有技术(3.1mg/L)有非常明显的提高，还能降低杂质的含量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生产WF16616的发酵培养基及其使用方法和用途。
技术介绍
WF16616(FR190293)是1998年从真菌Tolypocladium parasiticum No.16616的发酵培养液中分离得到的一种脂肽类物质，其分子式为C51H82N8O21S，经过结构修饰改造可以得到一种新型棘白菌素类抗真菌药物米卡芬净(Micafungin，MFG，FK-463)。WF16616(FR190293)及FK463结构式如下：WF16616(FR190293)结构式FK-463结构式米卡芬净对念珠菌属、曲菌属具有广泛抗真菌作用，对耐氟康唑与依曲康唑的念珠菌亦有作用；能够非竞争性抑制1，3-β-D葡聚糖合成酶的活性，从而抑制真菌细胞壁合成，故该化合物对真菌细胞具有较高的特异性，对人体副作用较小。米卡芬净由日本藤泽公司开发，于2002年12月在日本上市，商品名为Fungard，2005年3月通过美国FDA认证。目前本品主要获准用于治疗以目前的治疗手段难以治愈的真菌感染以及预防造血干细胞移植患者的真菌感染。专利US005854276A公布了利用真菌Tolypocladium parasiticum No.16616发酵生产WF16616的过程：从斜面培养基上取一环生长时间为两周的WF16616产生菌，接种于含种子培养基(蔗糖2％，棉子粉2％，干酵母1％，聚蛋白胨1％，甘油2％，KH2PO4 0.1％，Tween-80 0.1％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的500ml摇瓶中，装量160ml，25℃振荡培养一周后，接种于含20L发酵培养基(葡萄糖1％，玉米淀粉2％，大豆粉0.5％，干酵母0.5％，棉子粉1％，KH2PO4 0.1％，Tween-80 0.1％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的30L发酵罐中，200rpm搅拌，通气量为20L/min，25℃培养6天后，所得15L发酵液经分离纯化后得到纯品46.6mg，约3.1mg/L，WF16616产量很低。Ryuichi Kanasaki et al.J.Antibiot.59(3)：158-167，2006公布了利用真菌Tolypocladium parasiticum No.16616发酵生产WF16616的过程：从斜面培养基上取一环生长时间为两周的WF16616产生菌，接种于含种子培养基(蔗糖2％，Pharmamedia 2％，干酵母1％，聚蛋白胨1％，甘油2％，KH2PO4 0.1％，Tween-80 0.1％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的500ml摇瓶中，装量160ml，25℃振荡培养7天后，接种于含20L发酵培养基(葡萄糖1％，玉米淀粉2％，黄豆粉0.5％，干酵母0.5％，Pharmamedia 1％，Adekanol LG-1090.05％，Silicone KM-700.05％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的30L发酵罐中，200rpm搅拌，通气量为20L/min，25℃培养6天后，所得15L发酵液经分离纯化后也只得到纯品47mg，约3.1mg/L，WF16616的产量同样很低。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服了现有的用于发酵WF16616的发酵培养基产量低的缺陷，提供了一种用于培养Tolypocladium parasiticum No.16616以生产WF16616的发酵培养基及其用途，以及一种发酵生产WF16616的方法。本专利技术的发酵培养基能够使得WF16616的菌丝量由8％升至30％以上，发酵产物的产率高，效价达到300-420mg/L。本专利技术提供了一种生产WF16616的发酵培养基，其原料包括1-10％的碳源、1-6％的有机氮源和0.1-1％的无机磷酸盐，其中所述的碳源包括甘露醇和玉米淀粉；所述的氮源为棉籽粉、干酵母和聚蛋白胨，或者为黄豆饼粉、干酵母和聚蛋白胨；百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。本专利技术中，当所述的氮源为黄豆饼粉、干酵母和聚蛋白胨时，相对于氮源为棉籽粉、干酵母和聚蛋白胨的情况，发酵得到的WF16616产物中杂质含量更低。因此本专利技术的氮源优选为黄豆饼粉、干酵母和聚蛋白胨。其中，所述的无机磷酸盐为本领域发酵培养基中常规添加的无机磷酸盐，较佳地包括KH2PO4、K2HPO4·3H2O、NaH2PO4·2H2O和Na2HPO4·12H2O中的一种或多种，更佳地为NaH2PO4·2H2O。其中，所述甘露醇和玉米淀粉的含量较佳地为2-6％，更佳地为2-4％，百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。其中，所述碳源还可包括本领域中用于发酵生产WF16616的发酵培养基中常规使用的除甘露醇和玉米淀粉以外的其他碳源，如葡萄糖、蔗糖、甘油和可溶性淀粉中的一种或多种，较佳地为葡萄糖。当所述发酵培养基中含有葡萄糖时，所述葡萄糖的含量较佳地为1-4％，更佳地为1-2％，百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。其中，所述的聚蛋白胨可为本领域各种培养基中使用的聚蛋白胨。其中，所述的有机氮源的含量较佳地为1.5-4.5％，百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。其中，所述的发酵培养基还可包含酪氨酸和/或谷氨酰胺，较佳地为酪氨酸。所述酪氨酸和/或谷氨酰胺的含量较佳地为0.01-0.1％，更佳地为0.01％，百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。其中，所述的发酵培养基还可包括天然油脂，所述的天然油脂选自葵花籽油、玉米胚芽油、大豆油和稻米油中的一种或多种。所述天然油脂的含量较佳地为0.1-1％，更佳地为0.4-0.6％，百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。其中，所述的发酵培养基还可含有维生素。所述维生素及其含量为本领域发酵培养基中的常规种类和含量，只要其对WF16616的产生没有明显的抑制作用即可。其中，所述的发酵培养基还可含有下述金属离子中的一种或多种：Cu2+、Zn2+和Co3+，较佳地为Zn2+。所述的金属离子皆以无机盐的形式添加到所述发酵培养基中。所述金属离子的含量较佳地为0.01-0.1％，更佳地为0.04-0.06％，百分比为所述金属离子的无机盐相对于所述发酵培养基的重量百分比。本专利技术还提供了所述的发酵培养基在以Tolypocladium parasiticum No.16616为产生菌发酵生产WF16616中的用途。本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种生产WF16616的发酵培养基，其特征在于：其原料包括1‑10％的碳源、1‑6％的有机氮源和0.1‑1％的无机磷酸盐，其中所述的碳源包括甘露醇和玉米淀粉；所述的氮源为棉籽粉、干酵母和聚蛋白胨，或者为黄豆饼粉、干酵母和聚蛋白胨；百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。
【技术特征摘要】
1.一种生产WF16616的发酵培养基，其特征在于：其原料包括1-10％
的碳源、1-6％的有机氮源和0.1-1％的无机磷酸盐，其中所述的碳源包括甘露
醇和玉米淀粉；所述的氮源为棉籽粉、干酵母和聚蛋白胨，或者为黄豆饼粉、
干酵母和聚蛋白胨；百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。
2.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于：所述的无机磷酸盐包
括KH2PO4、K2HPO4·3H2O、NaH2PO4·2H2O和Na2HPO4·12H2O中的一种或
多种。
3.如权利要求1或2所述的发酵培养基，其特征在于：所述甘露醇和玉
米淀粉的含量为2-6％，较佳地为2-4％；所述有机氮源的含量为1.5-4.5％；百
分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。
4.如权利要求1-3中任一项所述的发酵培养基，其特征在于：所述碳源
还可包括葡萄糖、蔗糖、甘油和可溶性淀粉中的一种或多种；当所述发酵培
养基中含有葡萄糖时，所述葡萄糖的含量较佳地为1-4％，更佳地为1-2％，
百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。
5.如权利要求1-4中任一项所述的发酵培养基，其特征在于：所述的发
酵培养基还可包含酪氨酸和/或谷氨酰胺；所述酪氨酸和/或谷氨酰胺的含量
较佳地为0.01-0.1％；百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡海峰，王利军，闵涛玲，朱宝泉，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院， 中国医药工业研究总院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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