一种混合培养盐生红胞藻的方法技术

本发明专利技术提供了一种混合培养盐生红胞藻的方法，包括，利用种子培养基培养盐生红胞藻；利用甘油驯化培养；将驯化后的盐生红胞藻接种到甘油发酵培养基，利用不同波长和强度的光培养盐生红胞藻。本发明专利技术提升了盐生红胞藻(R.salina)发酵时菌体的底物利用率、生长速度、生物量、藻红蛋白，总蛋白、多不饱和脂肪酸和总脂含量，减少了盐生红胞藻(R.salina)收获的问题，降低了生物质浓缩以及目的产物提取的前处理成本。

Method for mixed culture of Dunaliella salina

The present invention provides a method, saline red alga mixed culture including the culture, salt red alga culture medium by using glycerol seeds; domestication; the domestication of red alga Dunaliella were inoculated into glycerol fermentation medium and cultivating salt red alga with different wavelength and intensity of light. The invention improves the salt red alga (R.salina) cell substrate utilization rate, growth rate, biomass, phycoerythrin fermentation, total protein, unsaturated fatty acid and total lipid content, reducing salt red alga (R.salina) harvest, reducing the processing cost of biomass. The purpose of the contract and product extraction.

【技术实现步骤摘要】
一种混合培养盐生红胞藻的方法
本专利技术属于微生物应用
，具体涉及一种混合培养盐生红胞藻的方法。
技术介绍
十八碳四烯酸(18:4n-3)(SA)是一种重要的ω-3系列多不饱和脂肪酸(Δ6,9,12,15-全顺式-十八碳四烯酸)，作为EPA的前体物质，SA在动物体内的转化效率比花生四烯酸高很多，具有辅助降低体内胆固醇和甘油三酯的含量，促进体内饱和脂肪酸代谢的作用，从而降低血液粘稠度，增进血液循环，提高组织供氧而消除疲劳。防止脂肪在血管壁的沉积，预防动脉粥样硬化的形成和发展、预防脑血栓、脑溢血、高血压等心血管疾病。目前SA主要来源于植物油(高SA大豆油)以及微藻。大豆来源主要存在SA相对含量低，受地域限制等诸多问题，从而导致气味不良、纯化成本高等。相反，微生物油脂(SingleCellOils，SCO)不但容易实现大规模生产，同时还克服了传统高SA大豆存在受地域和气候条件制约的问题，应用前景广阔。盐生红胞藻(RhodomonassalinorR.salina)属Pyrenomonadaceae家族成员，为有鞭毛的单细胞红藻。由于其富含长碳链多不饱和脂肪酸和天然色素-藻红蛋白，R.salina已被视为一个极具潜力的资源藻种，在食品、化妆品、医药、科学研究以及水产养殖等方面应用广泛。R.salina合成的多不饱和脂肪酸十八碳四烯酸(SA,18:4n-3)和α-亚麻酸(ALA18:3n-3)分别占胞内总脂肪的20–30.2％和20.7–29.9％。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。鉴于上述和/或现有混合培养盐生红胞藻的方法中存在的问题，提出了本专利技术。因此，本专利技术的目的是提供一种混合培养盐生红胞藻的方法，大幅度提高了盐生红胞藻(R.salina)生产藻红蛋白和多不饱和脂肪酸的效率，从而降低了生产成本。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种混合培养盐生红胞藻的方法，包括，利用种子培养基培养盐生红胞藻；利用甘油驯化培养；将驯化后的盐生红胞藻接种到甘油发酵培养基，利用不同波长和强度的光培养盐生红胞藻。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述种子培养基包括甘油、Na2EDTA、H3BO3、FeCl3、MnSO4、ZnSO4、CoCl2、HCl、HEPESbufferpH7.8、VitaminB12中的一种或几种。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述种子培养基包括占培养基质量10％的甘油、Na2EDTA·2H2O80mM、H3BO32mM、FeCl3·6H2O5.02mM、MnSO4·H2O0.01mM、ZnSO4·7H2O0.001mM、CoCl2·6H2O0.001mM、HCl0.1M、HEPESbufferpH7.8、VitaminB120.3g/L。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述甘油发酵培养基包括甘油、NaCl、MgSO4·7H2O、KCl、NaNO3、CaCl2·2H2O、KH2PO4、TricinepH7.8、NH4Cl、Na2EDTA·2H2O、H3BO3、FeCl3·6H2O、MnSO4·H2O、ZnSO4·7H2O、CoCl2·6H2O、HCl、HEPESbufferpH7.8或VitaminB12中的一种或几种。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述利用种子培养基培养盐生红胞藻，其是将盐生红胞藻以10～50％的接种量接入种子培养基中，培养温度为21～30℃、100～200rpm下培养40～50h。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述利用不同波长和强度的光培养，其是利用不同波长和强度的光在温度为21～30℃，pH值为5～9，通气速率为0.01～10m3·min-1，光照强度50～500为μmolm-2s-1的条件下，培养5～14天。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述利用不同波长和强度的光，其中，所述光包括红光、蓝光、红蓝混合光，其与发酵培养基液面的距离为15～30cm。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述利用甘油驯化培养，其是以5％～50％的接种量依次接入不同比例混合培养基中逐步驯化，每次培养的温度为21～30℃，pH值为5～9，通气速率为0.01～10m3·min，光照强度为50～500μmolm-2s-1，培养时间为2～15天。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述红蓝混合光，其混合比例为蓝光：红光＝1:1～5。作为本专利技术所述混合培养盐生红胞藻的方法的一种优选方案，其中：所述红光，其波长为590～670nm，波峰为640nm；所述蓝光，其波长420～510nm，波峰为460nm。本专利技术具有的有益效果：本专利技术提升了盐生红胞藻(R.salina)发酵时菌体的底物利用率、生长速度、生物量、藻红蛋白，总蛋白、多不饱和脂肪酸和总脂含量，减少了盐生红胞藻(R.salina)收获的问题，降低了生物质浓缩以及目的产物提取的前处理成本。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1是本专利技术中白光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)生长情况示意图；图2是本专利技术中白光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)藻红蛋白合成情况示意图；图3是本专利技术中红光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)生长情况示意图；图4是本专利技术中红光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)藻红蛋白合成情况示意图；图5是本专利技术中蓝光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)生长情况示意图；图6是本专利技术中蓝光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)藻红蛋白合成情况示意图；图7是本专利技术中红蓝混合光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)生长情况示意图；图8是本专利技术中红蓝混合光照射条件下不同浓度甘油混合培养盐生红胞藻(R.salina)藻红蛋白合成情况示意图。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本专利技术至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种混合培养盐生红胞藻的方法，其特征在于：包括，利用种子培养基培养盐生红胞藻；利用甘油驯化培养；将驯化后的盐生红胞藻接种到甘油发酵培养基，利用不同波长和强度的光培养盐生红胞藻。

【技术特征摘要】
1.一种混合培养盐生红胞藻的方法，其特征在于：包括，利用种子培养基培养盐生红胞藻；利用甘油驯化培养；将驯化后的盐生红胞藻接种到甘油发酵培养基，利用不同波长和强度的光培养盐生红胞藻。2.根据权利要求1所述混合培养盐生红胞藻的方法，其特征在于：所述种子培养基包括甘油、Na2EDTA、H3BO3、FeCl3、MnSO4、ZnSO4、CoCl2、HCl、HEPESbufferpH7.8、VitaminB12中的一种或几种。3.根据权利要求1或2所述混合培养盐生红胞藻的方法，其特征在于：所述种子培养基包括占培养基质量10％的甘油、Na2EDTA·2H2O80mM、H3BO32mM、FeCl3·6H2O5.02mM、MnSO4·H2O0.01mM、ZnSO4·7H2O0.001mM、CoCl2·6H2O0.001mM、HCl0.1M、HEPESbufferpH7.8、VitaminB120.3g/L。4.根据权利要求1所述混合培养盐生红胞藻的方法，其特征在于：所述甘油发酵培养基包括甘油、NaCl、MgSO4·7H2O、KCl、NaNO3、CaCl2·2H2O、KH2PO4、TricinepH7.8、NH4Cl、Na2EDTA·2H2O、H3BO3、FeCl3·6H2O、MnSO4·H2O、ZnSO4·7H2O、CoCl2·6H2O、HCl、HEPESbufferpH7.8或VitaminB12中的一种或几种。5.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：常明，刘睿杰，王兴国，金青哲，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32