一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法技术

本发明专利技术一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法，属于蛋白提取技术领域。所述方法包括将小球藻在室温下浸泡24h后，离心去色素及乙醇溶液；然后在50℃下经纤维素酶酶解3h；后灭酶，于超声处理30min，后用超高速细胞剪切仪剪切10 min；本发明专利技术方法还可以包括对小球藻色素的提取，及检测其抗氧化活性，小球藻蛋白的提取优化。本发明专利技术具有以下优点：在对今后小球藻蛋白的提取和利用大幅度提高至70.23%，和将小球藻色素及蛋白在食品、卫生、和医药行业得到广泛应用提供依据。

Method for extracting protein from Chlorella

The invention relates to a method for extracting protein from protein Chlorella, belonging to the technical field of protein extraction. The method includes Chlorella at room temperature for 24h after centrifugation to pigment and ethanol solution; then in 50 DEG C with cellulase 3H; after the inactivation of enzyme in 30min after ultrasonic treatment, with ultra high speed shear shear min 10 cells; the method of the invention can also include the extraction of Chlorella pigment and, to detect the antioxidant activity of Chlorella protein extraction optimization. The invention has the following advantages: in the future of Chlorella protein extraction and utilization increased to 70.23%, and the Chlorella pigment and protein is widely used in food, health, and provide the basis for the pharmaceutical industry.

【技术实现步骤摘要】
一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法
本专利技术属于蛋白提取
，具体涉及一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法。
技术介绍
蛋白核小球藻是一种普生性球形单细胞藻类蛋白含量大于63%，生态分布极广，在淡水、海水均能快速生长的。随着蛋白核小球藻的价值逐渐被认识，在日本、美国等国家对蛋白核小球藻开发尤为广泛，并向保健、美容系列产品发展，我国也于2013年将蛋白核小球藻列为新资源食品。蛋白核小球藻分布广、生长快，含有碳水化合物、蛋白质、油脂等营养成分，具有广阔的市场前景，但经热水浸提大部分是游离氨基酸或者是变性蛋白质，而多糖耐热性好，易于提取，有利于高附加值的蛋白核小球藻开发。但是目前其蛋白提取率却不足50%致使在生在和运用中蛋白得到浪费。
技术实现思路
针对现有技术在蛋白核小球藻蛋白提取率低下的问题，本专利技术致力于提高蛋白核小球藻蛋白的提取及利用率。酶解法能有效破除细胞壁，降解纤维素，使多糖从细胞中溶解出来，且作用条件温和、效率高，因此利用纤维素酶辅助提取蛋白核小球藻多糖，为蛋白核小球藻蛋白的保健品及药物等的开发利用奠定理论基础。本专利技术的目的在于公开了一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：1、一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法，包括如下步骤：(1)、乙醇浸泡小球藻：称取原料小球藻2g，加入40ml的乙醇室温25℃浸泡24h，后离心去除用水冲洗3-4次离心；(2)、保留步骤(1)得到的离心上清液和离心沉淀；(3)、纤维素酶处理：取步骤(1)的离心沉淀加入20ml水，用NaH2PO3缓冲溶液调整pH5.0-5.5，加入纤维素酶1%，在水浴50℃中酶解3h，后100℃灭酶10min；(4)、超声处理：往步骤(3)的产物中加入50ml水后，经超声破碎蛋白核小球藻细胞；(5)、剪切处理：将步骤(4)的产物用超高速细胞剪切仪剪切，破碎蛋白核小球藻细胞；(6)、取步骤(5)的产物，离心用水冲洗3-4次收集上清液；(7)、合并步骤(2)和步骤(6)获得的离心上清液。上述技术方案所述的方法，其中，步骤(1)中的乙醇浓度为75%。上述技术方案所述的方法，其中，步骤(1)和步骤(6)中离心时的离心转速为5000r/min，时间为10min。上述技术方案所述的方法，其中，步骤(4)中超声处理的超声功率为1000W，时间为24min。上述技术方案所述的方法，其中，步骤(5)中剪切处理的剪切速度为8000r/min，时间为10min。上述技术方案所述的方法，其中，所述方法还包括对步骤(1)和步骤(6)中所得的离心上清液用微量法96孔板测定蛋白的提取率和用BCA试剂盒测蛋白含量的步骤。上述技术方案所述的方法，其中，对步骤(1)和步骤(6)中所得的离心上清液用BCA试剂盒测蛋白含量的具体过程为：将上清液稀释20倍，取10μL稀释液用BAC试剂盒在562nm波长下测其中的蛋白含量，及全波扫描吸光度。超声提取作为一种应用越来越广泛的一种新提取手段，并且能实现破碎、匀质、乳化、混合、提取等功能，故广泛应用于生物、医学、化学、制药、食品、等实验室研究及企业生产，在本实验中能增加细胞破碎率，提高蛋白提取量。超高速剪切均质乳化机，其剪切速度可以超过100000rpm，转子速度可以达到40m/s并且能实现细胞的破碎、匀质、乳化、混合、提取等功能，能提高本实验蛋白提取的效率。本专利技术具有以下有益效果：1、本次专利技术与传统的实验相比，传统的酸碱浸泡会影响蛋白结构活性，且不能用于食品医药中，本专利技术在不破坏蛋白结构的情况能大大提高其蛋白的利用。2、本专利技术所采用的方法可以简单、有效地破碎蛋白核小球藻细胞和提取其蛋白，且蛋白提取率高达70.23%。3、通过响应面优化确定最佳的提取工艺参数，能最大得到蛋白核小球藻的蛋白提取率。4、能结合目前企业工厂需要并将其应用。附图说明：1、图1为超声功率对蛋白提取的影响；2、图2为超声时间对蛋白提取的影响；3、图3为超声时料液比对蛋白提取的影响。具体实施方式：为使本专利技术的技术方案便于理解，以下结合具体实施例对本专利技术一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法作进一步的说明。实施例1：一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法：一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法，包括如下步骤：(1)、乙醇浸泡小球藻：称取原料小球藻2g，加入40ml的浓度为75%的乙醇室温25℃浸泡24h，后离心去除用水冲洗3-4次离心；其中，离心时的离心转速为5000r/min、时间为10min；(2)、保留步骤(1)得到的离心上清液和离心沉淀；(3)、纤维素酶处理：取步骤(1)的离心沉淀加入20ml水(使得原料小球藻与液体之间的比例为1:10)，用NaH2PO3缓冲溶液调整pH5.0-5.5，加入纤维素酶1%，在水浴50℃中酶解3h，后100℃灭酶10min；(4)、超声处理：往步骤(3)的产物中加入50ml水(使得原料小球藻与液体之间的比例为1:35)后，经超声破碎蛋白核小球藻细胞；其中，超声处理的超声功率为1000W、时间为24min；(5)、剪切处理：将步骤(4)的产物用超高速细胞剪切仪剪切，破碎蛋白核小球藻细胞；其中，剪切处理的剪切速度为8000r/min、时间为10min；(6)、取步骤(5)的产物，离心用水冲洗3-4次收集上清液；其中，离心时的离心转速为5000r/min、时间为10min；(7)、合并步骤(2)和步骤(6)获得的离心上清液。实施例2：一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法：本实施例与实施例1步骤相同，区别在于：本实施例中还包括对实施例1中步骤(1)和步骤(6)中所得的离心上清液用微量法96孔板测定蛋白的提取率和用BCA试剂盒测蛋白含量的步骤；其中，对步骤(1)和步骤(6)中所得的离心上清液用BCA试剂盒测蛋白含量的具体过程为：将上清液稀释20倍，取10μL稀释液用BAC试剂盒在562nm波长下测其中的蛋白含量，及全波扫描吸光度。以下通过具体实验例对本专利技术一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法中的具体步骤及参数作进一步的说明。一、试剂及仪器：蛋白核小球藻，纤维素酶购自上海伯奥生物科技有限公司；BCA试剂盒购自南京建成；本专利技术试剂均为市场所售分析纯试剂。分析测试方法：色素分析用紫外分光光度计测定，蛋白用BCA试剂盒测量。实验设备：超声细胞破碎仪、高压脉冲电源系统、离心机、凯氏定氮仪、超高速均质机。实验例1：从蛋白核小球藻中提取蛋白质的工艺流程：蛋白核小球藻加水浸泡离心加水酶解灭酶超声破壁细胞剪切破壁离心。(1)、加水浸泡：称取2.0g蛋白核小球藻，加入40ml的乙醇室温25℃浸泡12h，后离心去除用水冲洗3-4次离心(5000r/min，10min)；(2)、色素测量及蛋白测定：取3.0mL的浸泡液，在紫外分光光度计全波段扫描，离心上清液用BCA试剂BCA蛋白的测定，南京建成BCA试剂盒绘制标准曲线。并用微量法96孔板测定蛋白的提取率。上清液稀释20倍，取10μL稀释液的在562nm测其中的蛋白含量。C1=(A562-0.0348)/0.5003(ml/ml)C2=(A562-0.0348)/0.5003(ml/ml)蛋白提取量(g/ml)=C1×V1×稀释倍数+C2×V2×稀释倍数蛋白提取率（%）=蛋白提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法，包括如下步骤：(1)、乙醇浸泡小球藻：称取原料小球藻2g，加入40 ml的乙醇室温25℃浸泡24 h，后离心去除用水冲洗3‑4次离心；(2)、保留步骤(1)得到的离心上清液和离心沉淀；(3)、纤维素酶处理：取步骤(1)的离心沉淀加入20ml水，用NaH

【技术特征摘要】
1.一种从蛋白核小球藻中提取蛋白质的方法，包括如下步骤：(1)、乙醇浸泡小球藻：称取原料小球藻2g，加入40ml的乙醇室温25℃浸泡24h，后离心去除用水冲洗3-4次离心；(2)、保留步骤(1)得到的离心上清液和离心沉淀；(3)、纤维素酶处理：取步骤(1)的离心沉淀加入20ml水，用NaH2PO3缓冲溶液调整pH5.0-5.5，加入纤维素酶1%，在水浴50℃中酶解3h，后100℃灭酶10min；(4)、超声处理：往步骤(3)的产物中加入50ml水后，经超声破碎蛋白核小球藻细胞；(5)、剪切处理：将步骤(4)的产物用超高速细胞剪切仪剪切，破碎蛋白核小球藻细胞；(6)、取步骤(5)的产物，离心用水冲洗3-4次后收集离心上清液；(7)、合并步骤(2)和步骤(6)获得的离心上清液。2.根据专利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中的乙醇浓度为7...

【专利技术属性】
技术研发人员：张学武，张睿林，
申请(专利权)人：时代生物科技深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44