利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法和制备绿色藻细胞干粉的方法，包括：1)将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后，加水提取，得到稻叶提取液；2)用稻叶提取液代替水(通常为蒸馏水)配制蛋白核小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；3)用稻叶提取液培养基对蛋白核小球藻进行培养，经细胞分离得到小球藻细胞沉淀和内含水稻叶提取液的上清液。本发明专利技术应用水稻叶片提取液培养蛋白核小球藻，达到快速增加小球藻生长速率的目的效果。应用本发明专利技术的培养技术能快速增加蛋白核小球藻的生长速率，在短时间内获得大量蛋白核小球藻细胞，同时操作简单，成本低，收益高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白核小球藻培养领域，具体涉及一种利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法。
技术介绍
蛋白核小球藻是一种单细胞绿藻，其环境适应性强，易于大规模培养。蛋白核小球藻活细胞可以清除废水中不同形态的氮和磷，能用于工厂化水产养殖废水的净化处理(陈海敏,等，工厂化水产养殖废水菌藻联合处理模式研究.浙江树人大学学报，2002，2(4)：64-67)，还对印染废水中的偶氮染料具有较强的脱色能力(郑金来,等，生物降解常见染料的研究进展.环境污染治理技术与设备，2000，1(3):39-43)，可用于印染废水的净化处理。蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidosa)细胞干物质中蛋白质占50％～65％，油脂占5％～10％，碳水化合物占10％～20％，含有大量具有抗氧化物活性的维生素如维生素C和维生素E，被FAO命名为绿色健康食品(HUQ,PANB,XUJ,etal.EffectsofsupercriticalcarbondioxideextractionconditionsonyieldsandantioxidantactivityofChlorellapyrenoidosaextracts[J].JournalofFoodEngineering,2007,80(4):997-1001.)，从蛋白核小球藻中还分离出具有增强机体免疫力、抑制肿瘤、降血压、血球凝集素等功效的生物活性成分(汪炬,等.蛋白核小球藻提取物的抑瘤作用及对免疫功能的影响.营养学报，2004，26(2)：136-138；YANGSC,YANGHY,YANCYC,etal.ChlorellapyrenoidosaamelioratedL-NAME-inducedhypertensionandcardiorenalremodelinginrats[J].EuropeanJournalofNutrition,2013,52(2):601-608.)，我国于2012年批准人工养殖的蛋白核小球藻为新型食品资源。蛋白核小球藻藻粉粗蛋白必需氨基酸含量高，是一种优良的饲料蛋白源(李国平.蛋白核小球藻粉中氨基酸含量和饲用价值分析.中国野生植物资源.2003，22(2):23-25)。可见，蛋白核小球藻在环境污水净化处理、制备营养食品饲料、开发医药新产品和生物柴油等领域前景广阔，如何在提高细胞生长速率，短时间内获得大量的藻细胞是开发应用蛋白核小球藻的关键技术环节。科学家发现天然植物提取液具有促进小球藻生长的效应，从芦苇粗提液中分离出了能够促进蛋白核小球藻生长的生物活性物质。科学家还发现采用低浓度的柳树叶浸提液培养7d可使蛋白核小球藻藻密度提高16.9％-30.9％。应用植物粗提物提高小球藻的生物量具有成本低廉，操作方便等优点，对小球藻的生产具有重要价值。
技术实现思路
本专利技术提供了一种利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，应用水稻叶片提取液达到快速增加小球藻生长速率的目的效果。一种利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，包括：1)将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后，加水提取，得到稻叶提取液；2)用稻叶提取液代替水(通常为蒸馏水)配制蛋白核小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；3)用稻叶提取液培养基对蛋白核小球藻进行培养，经细胞分离得到小球藻细胞沉淀和内含水稻叶提取液的上清液。以下作为本专利技术的优选技术方案：步骤1)中，所述的新鲜的水稻叶片为田间或人工培养的水稻植株分蘖盛期叶片。所述的将新鲜的水稻叶片干燥粉碎包括：将新鲜的水稻叶片置于55～65℃烘箱中烘干20～28h，然后粉碎，过筛孔径0.15-0.7mm的筛，得到稻叶干粉。得到的稻叶干粉再加水提取，得到稻叶提取液。进一步优选，所述的将新鲜的水稻叶片干燥粉碎包括：将新鲜的水稻叶片置于60℃烘箱中烘干24h，然后粉碎，过40目筛(筛孔径0.25-0.5mm)得到稻叶干粉。得到的稻叶干粉再加水提取，得到稻叶提取液。所述的加水提取具体包括：将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后得到的稻叶干粉加水在黑暗中15℃～35℃浸提36～60h，之后过滤，得到滤液，即为稻叶提取液。所述的加水提取具体包括：将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后得到的稻叶干粉加水在黑暗中25℃浸提48h，之后过滤，得到滤液，即为稻叶提取液。所述的稻叶干粉与水的质量比为：0.2～5：100。进一步优选，所述的稻叶干粉与水的质量比为：0.5～2：100。更进一步优选，所述的稻叶干粉与水的质量比为2：100，能够更好地促进小球藻的生长，同时提高小球藻叶绿素含量。步骤2)中，所述的蛋白核小球藻培养基可采用现有的蛋白核小球藻培养基，将配置蛋白核小球藻培养基的水组分替换成稻叶提取液，配方的含量和其他组分均不变。如可采用常用BG11培养基，将BG11培养基中的水组分替换成步骤1)中的稻叶提取液，配方的含量和其他组分均不变。步骤3)中，所述的培养的条件为：培养温度为23℃～33℃，光强1500～2500Lux，光周期为10～14hr昼/10～14hr夜，主要为静置培养，每天(即每24hr周期内)摇动培养瓶混匀2～6次直至培养周期结束，培养周期为6～12天。进一步优选，所述的培养的条件为：培养温度为28℃，光强2000Lux，光周期为12hr昼/12hr夜，主要为静置培养，每天摇动培养瓶混匀4次直至培养周期结束，培养周期为6～8天。所述的蛋白核小球藻，可采用市售产品，可具体采用中国科学院野生生物种质库淡水藻种库(FACHB)市售的编号为FACHB-1222的蛋白核小球藻。步骤3)中，藻细胞沉淀获得为离心法，即所述的细胞分离采用离心法，所述的细胞分离的条件为：在10000～14000r/min离心3～15min。进一步优选，所述的细胞分离的条件为：12000r/min离心10min，使的小球藻细胞沉淀下来。所获得的内含水稻叶提取液的上清液，可以一定配比添加到藻细胞培养液中重复利用，促进藻细胞生长。本专利技术中，小球藻细胞沉淀经洗涤重悬后可作为水中氮、磷、偶氮染料降解等污水净化处理的生物基料，也可经干燥后获得蛋白核小球藻细胞产品，作为制备饲料、提取油脂、蛋白、色素和生长因子等相关生物产品的原料。小球藻细胞沉淀经处理后得到绿色小球藻细胞干粉，绿色小球藻细胞干粉是一种蛋白核小球藻细胞产品。一种制备绿色藻细胞干粉的方法，包括：1)根据所述的利用水稻叶片提取液提高蛋白核小球藻产量的方法制备得到小球藻细胞沉淀；2)将小球藻细胞沉淀经洗涤、离心和干燥后得到绿色藻细胞干粉。所述的洗涤、离心和干燥具体为：将小球藻细胞沉淀加入水重悬洗涤后，经6000～10000r/min离心5～20min后收集，之后在30℃～50℃低温条件下烘干，得到藻细胞干品。进一步优选，将小球藻细胞沉淀加入水重悬洗涤后，经8000r/min离心10min后收集，之后在40℃低温条件下烘干，得到藻细胞干品。绿色蛋白核小球藻细胞干粉可直接制作为食品或/和生物饲料，也可以添加到食品或/和饲料配方中，得到复合食品/和生物饲料。本专利技术水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量和叶绿素含量的技术的机理在于：稻叶提取液促进蛋白核小球藻生长的原因一方面稻叶提取液可能含有内源激素或其他生物活性成分，这些成分改变本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，其特征在于，包括：1)将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后，加水提取，得到稻叶提取液；2)用稻叶提取液代替水配制蛋白核小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；3)用稻叶提取液培养基对蛋白核小球藻进行培养，经细胞分离得到小球藻细胞沉淀和内含水稻叶提取液的上清液。

【技术特征摘要】
1.一种利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，其特征在于，包括：1)将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后，加水提取，得到稻叶提取液；2)用稻叶提取液代替水配制蛋白核小球藻培养基，得到稻叶提取液培养基；3)用稻叶提取液培养基对蛋白核小球藻进行培养，经细胞分离得到小球藻细胞沉淀和内含水稻叶提取液的上清液。2.根据权利要求1所述的利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的新鲜的水稻叶片为水稻植株分蘖盛期叶片。3.根据权利要求1所述的利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的将新鲜的水稻叶片干燥粉碎包括：将新鲜的水稻叶片置于55～65℃烘箱中烘干20～28h，然后粉碎，过筛孔径0.15-0.7mm的筛，得到稻叶干粉。4.根据权利要求1所述的利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的加水提取具体包括：将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后得到的稻叶干粉加水在黑暗中15℃～35℃浸提36～60h，之后过滤，得到滤液，即为稻叶提取液。5.根据权利要求4所述的利用水稻叶片提取液培养提高蛋白核小球藻产量的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的加水提取具体包括：将新鲜的水稻叶片干燥粉碎后得到的稻叶干粉加水在黑...

【专利技术属性】
技术研发人员：张毅宁，
申请(专利权)人：浙江省杭州学军中学，
类型：发明
国别省市：浙江;33