基于蛋白核小球藻的环境污染物时间毒性微板分析方法技术

本发明专利技术公开了一种基于蛋白核小球藻的环境污染物时间毒性微板分析方法，以淡水绿藻中的蛋白核小球藻为受试生物，以96孔透明微板为载体，在传统化合物浓度-效应关系中引入时间因素，通过测定部分环境污染物对蛋白核小球藻的时间依赖性毒性，发现所有测定的污染物均具有明显的时间依赖特征，再利用最小二乘样条函数逼近法构建浓度-时间-效应曲面，了解污染物随浓度和时间变化的动态毒性效应。本发明专利技术克服传统毒性分析方法中只分析污染物对暴露生物在某一暴露时间终点的累积效应的不足，有助于全面的了解污染物的毒性效应，而且能更深入的了解污染物的毒理作用机制与途径，更能体现实际环境中污染物暴露的现象和信息。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及环境污染物毒性检测
，尤其涉及一种基于蛋白核小球藻的环 境污染物时间毒性微板分析方法。
技术介绍
目前，人类的生产和生活不间断地排放着大量的种类繁多的污染物进入环境，对 生态环境和生物体产生着持续的毒害作用。因而，污染物毒性的检测除考虑浓度因素外，更 应该着眼于污染物对暴露生物随着时间而变化的动态效应，即同时观察浓度和时间两个因 素在污染物对生物体毒性变化过程中起的重要作用。 环境中的污染物对水生生物的毒性效应是一个动态变化的过程，同时因其在环境 中代谢转化等因素的也会影响污染物对生物的毒性效应，而基于污染物对暴露生物在某一 特殊时间终点的毒性效应如短期效应和长期效应只是某一时间段的累积效应，不易观测到 污染物对生物体在整个暴露期间毒性效应发生的变化，更不易观测到污染物对暴露生物的 真实的毒性作用规律和作用机制。因此，检测环境污染物对暴露生物随时间而变化的动态 效应规律与作用机制，不仅有助于全面的了解污染物的毒性效应，而且能更深入的了解污 染物的毒理作用机制与途径，更能体现实际环境中污染物暴露的现象和信息。
技术实现思路
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【技术保护点】
一种基于蛋白核小球藻的环境污染物时间毒性微板分析方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、培养得到OD690＝0.25‑0.35的蛋白核小球藻液；S2、取m个8行×12列的96孔透明微板；在任一个微板中，选取最外围的36个微孔并定义为第一微孔，在36个第一微孔中分别加入200μL蒸馏水，在外围之内选取12个微孔并定义为第二微孔，在12个第二微孔中分别加入100μL蒸馏水和100μL由S1得到的蛋白核小球藻液，将剩余48个微孔定义为第三微孔，将48个第三微孔均分为12组并分别标记为j＝1、2、…、12，向第j组的4个第三微孔中分别加入100μL浓度为Cj的受试样品溶液和100μL由S1得到的蛋白核小...

【技术特征摘要】
1. 一种基于蛋白核小球藻的环境污染物时间毒性微板分析方法，其特征在于，包括如 下步骤： 51、 培养得到〇D69Q = 0? 25-0. 35的蛋白核小球藻液； 52、 取m个8行X 12列的96孔透明微板；在任一个微板中，选取最外围的36个微孔并 定义为第一微孔，在36个第一微孔中分别加入200 ii L蒸馏水，在外围之内选取12个微孔 并定义为第二微孔，在12个第二微孔中分别加入100 y L蒸馏水和100 ii L由S1得到的蛋 白核小球藻液，将剩余48个微孔定义为第三微孔，将48个第三微孔均分为12组并分别标 记为j = 1、2、…、12,向第j组的4个第三微孔中分别加入100ii L浓度为Cj的受试样品 溶液和100 ii L由S1得到的蛋白核小球藻液； 其中，Cj = f^1 ?〇!，式中j为各组相应的标号，j = 1、2、…、12，CQ为受试样品的储备 液浓度，f为受试样品的稀释因子，而f?可由公式f = (cycH)1/(Iri)推导得到，式中Q为受试 样品的最低效应浓度，CHS受试样品的最高效应浓度，n为受试样品溶液浓度梯度的数目， 即 n = 12 ; 53、 将m个微板置于光照培养箱中进行培养，在培养Tx时，测定每个微板上第三微孔的 j组在Tx时的0D_平均值并记为0DjS, x，并测定每个微板上第二微孔在Tx时的0D_平均 值并记为0D空白,x，其中Tx = 0h、t h、2t h、4t h、6t h、…、96h，x为正整数； 54、 根据公式yT = (〇Dj x-〇Dj h) A?」x计算得到浓度为Cj的受试样品处理蛋 白核小球藻在T时的平均生长速率，根据公式y u = (0D 空白，x_〇D空白，x-j /0D空白，x 计算 得到第二微孔中蛋白核...

【专利技术属性】
技术研发人员：张瑾，陈琼，朱曙光，凌琪，刘磊，
申请(专利权)人：安徽建筑大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34